梨盤多毛孢褐斑病菌生物學特性及藥劑毒力測定

趙 杰，戴富明

（1上海市浦東新區農業技術推廣中心，上海 201201；2上海市農業科學院生態環境保護研究所，上海 201403）

梨盤多毛孢褐斑病菌生物學特性及藥劑毒力測定

趙 杰1，戴富明2

（1上海市浦東新區農業技術推廣中心，上海 201201；2上海市農業科學院生態環境保護研究所，上海 201403）

為了研究梨盤多毛孢褐斑病菌的生物學特性和篩選防治該病原菌的殺菌劑，采用生長速率法和產孢量的測定來研究梨盤多毛孢褐斑病菌的生物學特性。結果表明：PDA和PSA培養基最適宜菌落生長，葡萄糖蛋白胨瓊脂培養基產孢量最多；菌絲生長的適宜溫度范圍為5—30℃，最適溫度25℃；培養基pH 4左右，菌絲產孢量最多；病原菌致死溫度為54℃；全暗和全光有利于菌落生長，全光條件下產孢量最大。碳源測定的試驗顯示：淀粉和葡萄糖最適宜菌絲生長，果糖最適宜產孢。氮源試驗表明：氮源中以酵母膏、蛋白胨和牛肉膏最適宜菌絲生長，蛋白胨最適宜產孢。12種殺菌劑的毒力測定結果表明：吡唑醚菌酯、己唑醇、多菌靈、咪鮮胺錳鹽的毒力較強，是比較理想的防治藥劑。以上結果為試驗條件下高效培養梨盤多毛孢褐斑病菌奠定了基礎，為生產上防治該病害提供了理論依據。

梨盤多毛孢褐斑病菌；生物學特性；產孢量；殺菌劑；毒力測定

鮮梨是我國主要果品之一，也是浦東新區的優勢特色產業，其中“翠冠”梨因果形大、外觀好、風味佳，深受廣大市民喜愛，市場銷售情況常供不應求，畝產值達8 900元人民幣（大眾水果中僅次于葡萄）。2013—2015年，作者在多個梨園梨樹葉片上發現由斑污擬盤多毛孢引起的梨盤多毛孢褐斑病，葉片發病率在5%—10%，嚴重的可達40%以上，該病害可侵染梨、茶、柿、山茶、木蘭、烏飯樹等［1-2］。雖然有關擬盤多毛孢屬的分類［3］、新種［4-10］和防治［11-12］有不少研究報道，也有學者開展了該屬擬盤多毛孢菌生物學特性的研究［11，13］，但只有陳玉森等［14］對寄主茶樹上的斑污擬盤多毛孢菌絲適宜溫度和pH進行了研究。由于不同地區、不同寄主和栽培條件下，病菌特性往往存在明顯差異，因此，對當地梨盤多毛孢褐斑病菌即梨斑污擬盤多毛孢的癥狀、生物學特性進行了觀測，旨在尋找通過環境條件控制病害發生的途徑，并篩選防治該病害的理想藥劑。

1 材料與方法

1.1 供試病原菌

梨盤多毛孢褐斑病菌（Pestalotia guepini Desm.）從浦東新區梨樹采集病葉，經室內組織分離、純化［15］，病原菌于PDA培養基上培養5 d用于試驗。

1.2 供試藥劑

30%吡唑醚菌酯懸浮劑（深圳諾普信農化股份有限公司）、43%戊唑醇懸浮劑（發事達南通化工有限公司）、50%異菌脲懸浮劑（拜耳作物科學中國有限公司）、50%咪鮮胺錳鹽可濕性粉劑（江蘇輝豐農化股份有限公司）、10%苯醚甲環唑水分散粒劑（江蘇豐登農藥有限公司）、80%代森錳鋅可濕性粉劑（江蘇省農墾生物化學有限公司）、45%咪鮮胺乳油（以色列馬克西姆化學公司）、50%多菌靈懸浮劑（江蘇龍燈化學有限公司）、25%丙環唑乳油（深圳諾普信農化股份有限公司）、5%己唑醇懸浮劑（陜西上格之路生物科學有限公司）、12.5%烯唑醇可濕性粉劑（江蘇輝豐農化股份有限公司）、40%百菌清懸浮劑（汕頭市宏光化工有限公司）。

1.3 生物學特性觀測

1.3.1 不同培養基對菌落生長和產孢量的影響

將梨盤多毛孢褐斑病菌于20%植物煎汁（梨樹葉片、枝條和未成熟果實）培養基、PDA、PSA、葡萄糖蛋白胨瓊脂、淀粉瓊脂、酵母浸膏和麥芽糖瓊脂等9種培養基上25℃培養5 d后測量菌落直徑，第7天測產孢量［16-18］。

1.3.2 溫度和pH對菌落生長和產孢量的影響［18］

將直徑為1 cm的病原菌菌絲塊接種到PDA平板中央，分別于5—40℃下培養5 d后測量菌落直徑。

用乳酸和NaOH配制pH為3—10的PDA培養基，于平板中央接種直徑為1 cm的病原菌菌絲塊，25℃培養5 d后測量菌落直徑，第7天測產孢量。

1.3.3 病菌致死溫度的測定

取直徑為1 cm的菌落于不同溫度的試管中處理10 min，然后接種到PDA平板中央，于25℃培養5 d，觀察菌絲生長情況。

1.3.4 光照對菌落生長和產孢量的影響

將直徑1 cm的菌絲塊接種到PDA平板中央，25℃下分別于連續光照、連續黑暗、12 h光照12 h黑暗交替下培養5 d后測量菌落直徑，第7天測定產孢量。

1.3.5 不同碳、氮源對菌落生長和產孢量的影響

采用真菌生理培養基［18］，以KNO3為氮源，測定葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖、果糖和淀粉等碳源對菌落生長的影響，25℃培養5 d測量菌落直徑，第7天測產孢量；以蔗糖為碳源，測定硝酸鉀、硫酸銨、氯化銨、酵母膏、牛肉膏、蛋白胨和尿素等氮源對菌落生長的影響，25℃培養5 d測量菌落直徑，第7天測定產孢量。

1.4 殺菌劑的毒力測定

采用生長速率法進行測定［18］：根據試驗情況，配置5個濃度的含藥PDA培養基，將直徑為1 cm的菌絲塊放在含藥培養基中央，25℃培養5 d，測量菌落直徑、計算抑制率、以藥劑有效成分的濃度為測試濃度計算回歸方程和抑制中濃度EC50。

2 結果與分析

2.1 病害癥狀及病原菌培養性狀觀察

梨盤多毛孢褐斑病菌主要侵染梨樹上部葉片，尤以頂部葉片受害最重，病斑近圓形或不規則形，初為紅褐色斑點，隨著病情發展，中央呈黑色，邊緣紅褐色。在PDA上培養初期，菌落呈白色，隨著菌落生長，菌落出現波狀隆起的同心輪紋，在菌落表面產生黑色的分生孢子盤，培養基背面黃色，培養基內可見輪紋狀排列的黑色分生孢子盤。分生孢子紡錘形，直或略彎曲，多為5細胞，中間3色胞橄欖色或略有深淺，頂胞和尾胞無色或接近無色，頂胞具附屬絲1—3根，多為3根，尾胞具1根或無附屬絲（圖1）。

圖1 梨盤多毛孢褐斑病葉片癥狀、PDA培養基上的菌落和分生孢子Fig.1 Leaf sym ptom s caused by P.guepini and colonies and conidia on PDA medium

2.2 不同培養基對菌落生長和產孢量的影響

梨盤多毛孢褐斑病菌在PDA和PSA培養基上生長最好，培養5 d后的直徑在7 cm以上；7 d后的產孢量以葡萄糖蛋白胨瓊脂培養基最多，為6.667×106個/皿。選用的梨樹葉片、枝條和未成熟果實3個植物煎汁培養基中以梨果煎汁培養基菌落直徑和產孢量較高，表明梨果含有有利于病菌生長和產孢的營養物質（表1）。

表1 梨盤多毛孢褐斑病菌在不同培養基上菌落生長和產孢情況Table1 Colony grow th and spore output of P.guepini on differentmedia

2.3 溫度和pH對菌落生長和產孢量的影響

梨盤多毛孢褐斑病菌在溫度為5—30℃均能生長，其中以25℃最為適宜，直徑為7.36 cm，在40℃時不能生長，甚至菌絲出現衰亡。菌落在pH 3—10均能正常生長，且都有孢子產生，其中菌落生長以pH 4最為適宜，菌落直徑8.50 cm；產孢量以pH 4—6酸性環境較大，超過1.000×106個/皿，其余pH環境下產孢量差異不大，可見病菌較適應于偏酸性環境（表2）。

表2 溫度和pH對梨盤多毛孢褐斑病菌菌落生長和產孢量的影響Table 2 Effects of temperature and pH on colony grow th and spore output of P.guepini

2.4 病菌致死溫度

將菌落在40—52℃的水浴中處理10 min，于PDA平板上培養7 d后均能形成新生菌絲，而54℃以上不能生長，因此，病菌的致死溫度為54℃，時間為10 min。

2.5 光照對菌落生長和產孢量的影響

病原菌全暗或全光等穩定條件下菌落生長較快，光暗交替不利于菌落生長；產孢量以全光條件下最大，為7.350×106個/皿，其次為全暗和光暗交替條件。由此可見，全光不僅有利于菌落生長，還能促進孢子形成（表3）。

表3 光照條件對梨盤多毛孢褐斑病菌菌落生長和產孢量的影響Table 3 Effects of light on colony grow th and spore output of P.guepini

2.6 不同碳、氮源對菌落生長和產孢量的影響

菌落生長較適宜的碳源為淀粉和葡萄糖，菌落直徑分別為5.74 cm和5.53 cm，最不適宜的為果糖；產孢量最適宜的碳源為果糖，為1.300×106個/皿（表4）。

菌落生長最適宜的氮源為酵母膏、蛋白胨和牛肉膏等有機氮源，菌落直徑在6 cm左右，最不適宜的是尿素和硫酸銨；最適宜產孢的氮源為蛋白胨，產孢量為1.100×106個/皿，其次為酵母膏、牛肉膏和硫酸銨，氯化銨最不適宜產孢（表5）。

表4 碳源對梨盤多毛孢褐斑病菌菌落生長和產孢量的影響Table 4 Effects of carbon sources on colony grow th and spore output of P.guepini

表5 氮源對梨盤多毛孢褐斑病菌菌落生長和產孢量的影響Table 5 Effects of nitrogen sources on colony grow th and spore output of P.guepini

2.7 殺菌劑對病原菌的毒力測定

選用12種殺菌劑對梨盤多毛孢褐斑病菌進行毒力試驗，結果顯示：吡唑醚菌酯、己唑醇、多菌靈和咪鮮胺錳鹽的EC50明顯小于1 mg/L，毒力較高，可能為生產上理想的防治藥劑。丙環唑、苯醚甲環唑、異菌脲、戊唑醇、咪鮮胺，EC50小于10 mg/L；烯唑醇、代森錳鋅、百菌清毒力相對較低（表6）。

表6 12種殺菌劑對梨盤多毛孢褐斑病菌的毒力Table 6 Test for toxicities of 12 fungicides to P.guepini

3 結論與討論

通過田間觀察、實驗室分離和培養，明確了梨盤多毛孢褐斑病在葉片上的為害癥狀、PDA上的菌落性狀，為田間診斷提供了參考。目前只發現該病菌為害葉片，但病菌在梨葉、梨枝和梨果煎汁培養基上都能正常生長，且以梨果培養基生長最好且產孢量最多，表明該病菌極有可能侵染果實；在其余供試的6種培養基上，菌落在PDA培養基上生長最好，與碳源試驗中葡萄糖較適宜菌落生長的結果一致；產孢量以葡萄糖蛋白胨瓊脂培養基最多，與氮源試驗中蛋白胨最適宜產孢的結果相同。

該菌在5—30℃、pH 3—10的條件下均能生長，而且產孢量以pH 4—6酸性環境較大，表明病菌對環境條件適應能力強，尤其適宜溫暖和偏酸性的條件。陳玉森等［14］研究表明，梨盤多毛孢褐斑病菌菌絲生長適宜pH為7.5，與本研究pH 4—6存在一定差異，可能與病菌長期生存的環境有關。

殺菌劑的毒力測定結果表明：吡唑醚菌酯、己唑醇、多菌靈、咪鮮胺錳鹽、丙環唑的毒力較高；任海英等［12］防治由異色擬盤多毛孢和小孢擬盤多毛孢引起的楊梅凋萎病試驗發現，吡唑醚菌酯、苯醚甲環唑、咪鮮胺、丙環唑防效較好，與本研究中的結果相似，表明同一藥劑對同屬病菌可能具有相同的效果，但由于藥效受寄主和環境的多重影響，因此還需通過田間試驗進一步研究。

秋季氣溫適宜，多陰雨有利于梨盤多毛孢褐斑病的發生；梨果采收后，未及時施用采后肥、管理粗放，發病加重。溝系暢通，科學施肥，合理修剪，改善梨園土壤環境，能有效控制發病，說明改變環境和科學種植是控制病害的重要途徑，因此除了使用藥劑控制病害，關鍵還要注重栽培管理，綜合防治該病害。

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The biological characteristics of Pestalotia guepini Desm.and toxicity test of fungicides to it

ZHAO Jie1，DAIFu-ming2

（1Pudong New District Agro-Technology Extension Center，Shanghai201201，China；2Institute of Eco-Environment Protection，Shanghai Academy of Agricultural Sciences，Shanghai201403，China）

In order to study biological characteristics of P.guepini Desm.and select fungicides against the pathogen，both colony growth and spore production were tested.The results indicated that both PDA and PSA media were themost suitable for the colony growth and there was themaximum spore output on dextrose peptone agarmedium.The suitable temperature for themycelial growth was5—30℃and the optimum was25℃.At pH 4 or so the spore outputwas themaximum.The lethal temperature of the pathogen was 54℃.Full dark or full lightwas favorable for the colony growth and under full light the spore output was the maximum.The tests for carbon sources indicated that amylum and dextrose were favorable for themycelial growth，and fructose was the most favorable for the spore production.The tests for nitrogen sources indicated that yeast extract，peptone and beef extractwere favorable for themycelial growth，and peptone was themost favorable for the spore production.The toxicity tests of 12 fungicides to P.guepini showed that pyraclostrobin，hexaconazole，carbendazim，prochloraz-manganese chloride complex had a higher toxicity and were ideal fungicides.The above results laid a foundation for efficiently culturing P.guepini under experimental conditions and controlling the disease caused by P.guepini in production.

Pestalotia guepini Desm.；Biological characteristic；Spore output；Fungicide；Toxicity test

2016-07-06

上海市浦東新區科技發展基金項目“梨樹病蟲害防控技術集成與示范”（PKJ2016-N02）

趙杰（1979—），男，碩士，高級農藝師，主要從事果實栽培與病蟲害防治。E-mail：zhaocaoyou＠163.com，Tel：021-58388032

S436.612

A

1000-3924（2017）06-033-05

程智強）