高效液相色譜法測定食品中的維生素B6的含量

李丹，徐駿，潘明杰

維生素B6是吡哆醇、吡哆醛、吡哆胺的總稱，屬于水溶性維生素。維生素B6可促進(jìn)原血紅素及核酸的合成，用于預(yù)防各類神經(jīng)、皮膚相關(guān)性疾病。因維生素B6需從食物中攝取，故食物中維生素B6的檢測有著十分重要的意義。高效液相色譜法測定食品中的維生素B6的含量，具有分離效果好、分析速度快、靈敏度高、所用時間更短、重現(xiàn)性好且結(jié)果準(zhǔn)確可靠等特點。該檢測方法的靈敏度、精密度、準(zhǔn)確度、回收率等技術(shù)參數(shù)均符合食品樣品測試的要求。筆者匯總實驗相關(guān)內(nèi)容與數(shù)據(jù)，報道如下。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

1.1.1 實驗試劑：吡哆醇（純度99.9%，Dr.公司）、吡哆醛（純度99.5%，INC公司）、吡多胺（純度99.9%，Trc公司）；辛烷磺酸鈉、甲醇為色譜純；三乙胺、冰乙酸為優(yōu)級純。

1.1.2 實驗儀器：液相色譜儀：島津/日本，20AT，液相色譜儀—熒光檢測器；電子分析天平：梅特勒—托利多/瑞士，BS224，感量0.1 mg。

1.1.3 試驗用樣品：某品牌較大嬰幼兒乳粉。

1.2 溶液配制和樣品前處理方法

1.2.1 色譜條件：色譜柱： Aglient–XDB C18，5μm ，4.6×250 mm；流動相：甲醇:緩沖鹽溶液（準(zhǔn)確稱取辛烷磺酸鈉2.00 g、三乙胺2.5 mL加超純水溶解并定容至1000 mL，用冰乙酸調(diào)節(jié)pH至3.0±0.1）=20:80；流速：1.0 mL/min；檢測波長：激發(fā)波長293 nm，發(fā)射波長395 nm；進(jìn)樣量：10μL。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制[1]：（1）吡哆醇儲備液（1.0mg/mL）:準(zhǔn)確稱取10 mg吡哆醇標(biāo)準(zhǔn)品，用流動相溶解定容至10mL。（2）吡哆醛儲備液（1.0mg/mL）:準(zhǔn)確稱取10 mg吡哆醛標(biāo)準(zhǔn)品，用流動相溶解定容至10mL。（3）吡哆胺儲備液（1.0mg/mL）:準(zhǔn)確稱取10 mg吡哆胺標(biāo)準(zhǔn)品，用流動相溶解定容至10mL。（4）維生素B6中間液（10μg/mL）：分別吸取吡哆醇、吡哆醛、吡多胺的標(biāo)準(zhǔn)儲備液各0.10mL，用流動相定容至10mL。（5）維生素B6工作液（10μg/mL）：分別吸取維生素B6中間液0.10mL、0.20mL、0.40mL、0.60mL、1.00mL，用流動相定容至10mL。該標(biāo)準(zhǔn)系列濃度分別為0.10μg/mL、0.20μg/mL、0.40μg/mL、0.60、1.00μg/mL。

1.2.3 樣品處理[2]：（1）固體樣品：稱取混合均勻的固體試樣約10g于100mL碘量瓶中，加入約30mL超純水，混勻。（2）液體樣品：稱取混勻的液體樣品10g于100mL碘量瓶中（注：含淀粉樣品需加入0.5g淀粉酶，混勻后充入氮氣，蓋上瓶塞，置50℃培養(yǎng)箱內(nèi)約30min）。

用0.1mol/L的鹽酸或氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)上述試樣溶液的pH值至4.5±0.1，放入數(shù)控超聲波清洗器中超聲10min。然后將試樣溶液轉(zhuǎn)移至50mL比色管中，用流動相定容至50mL，靜置10min，取上清液經(jīng)0.45μm水系微孔過濾膜過濾至進(jìn)樣瓶中待測。

2 結(jié) 果

2.1 色譜條件選擇 通過實驗對比，按照優(yōu)化的色譜條件得到的維生素B6（吡哆醇、吡哆醛、吡多胺）標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖如圖1所示。

圖1 維生素B6 混合標(biāo)準(zhǔn)品（吡哆醛、吡哆醇、吡多胺）色譜圖Figure1 Vitamin B6 mixed standard (Pyridoxal,Pyridoxine,Polyami ne) chromatogram

2.2 方法的線性范圍和檢出限 取濃度為0.10μg/mL、0.20μg/mL、0.40μg/mL、0.60、1.00μg/mL的吡哆醇、吡哆醛和吡多胺混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別進(jìn)樣10 μL，記錄峰面積，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，所得標(biāo)準(zhǔn)曲線:

吡哆醛的線性回歸方程為：y=870268x+24688.4，Rr1=0.9997628；

吡哆醇的線性回歸方程為：y=2.11050e+006x+6472.04，Rr1=0.9999770；

吡哆胺的線性回歸方程為：y=1.77141e+006x-594.558，Rr1=0.9999933。

取濃度為0.10 μg/mL的吡哆醇、吡哆醛和吡多胺混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，依章節(jié)“1.2.1”方法進(jìn)樣，計算信噪比為20，按三倍信噪比計算，檢出限為0.0005μg/mL。

2.3 精密度及回收率 樣品添加回收率：取較大嬰幼兒乳粉樣品，分別精密稱取10份，每份10 g，其中5份加入吡哆醇、吡哆醛和吡多胺1.0 μg/mL混合標(biāo)準(zhǔn)溶液1 mL，另外5份樣品作為對照，依章節(jié)“1.2.3”方法進(jìn)行樣品前處理。上機(jī)測試后得出回收率見表1。

表1 加樣回收率

樣品的添加回收率均在98.3%～99.9%之間，提示此方法測定食品中吡哆醇、吡哆醛和吡多胺總量具有很好的準(zhǔn)確性。

綜上，高效液相色譜法測定食品中的維生素B6的含量在精密度、重現(xiàn)性、檢出限等方面完全達(dá)到了測定食品中維生素B6（吡哆醛、吡哆醇、吡多胺）含量的要求。此方法方便、快捷，準(zhǔn)確，值得推廣應(yīng)用。

[1]GB/T 5009.154-2016食品中維生素B6的測定[S].GB/T 5009.

[2]何珊麗,胡燕玲,梁波.高壓液相色譜法檢測飲料中維生素 B6[J].食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報,2013,(3):939-943.