瑞替加濱對(duì)大鼠局灶性缺血再灌注損傷的保護(hù)機(jī)制

孫 原 石秋艷 王德龍 張春陽(yáng) 李 弘 楊 斌 李艷玲

華北理工大學(xué)附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，河北 唐山 063000

·論著科研之窗·

瑞替加濱對(duì)大鼠局灶性缺血再灌注損傷的保護(hù)機(jī)制

孫 原 石秋艷 王德龍 張春陽(yáng) 李 弘 楊 斌 李艷玲

華北理工大學(xué)附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，河北 唐山 063000

目的研究M型鉀離子通道開(kāi)放劑瑞替加濱(retigabine，RTG)對(duì)大鼠局灶性缺血再灌注損傷的影響。方法選取SD大鼠110只，隨機(jī)分為假手術(shù)組(10只，Sham組)，模型對(duì)照組(20只，MCAO組)，治療組(80只，RTG組)。按照給藥時(shí)間再將RTG組分為0 h、1 h、3 h及6 h 4個(gè)亞組，每組20只。采用線栓-再通法建立大鼠模型，于腦缺血2 h后恢復(fù)灌注。RTG組經(jīng)尾靜脈注射瑞替加濱10.5 mg/kg，假手術(shù)組和缺血再灌注組給予等量生理鹽水。比較腦梗死體積變化，并進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分，檢測(cè)各組大鼠缺血半影區(qū)星形膠質(zhì)細(xì)胞的增殖和半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3) 的表達(dá)，觀察梗死皮質(zhì)區(qū)域神經(jīng)元的存活數(shù)量。結(jié)果Sham組未發(fā)現(xiàn)腦梗死病灶，無(wú)神經(jīng)功能損傷，Caspase-3陽(yáng)性細(xì)胞及星形膠質(zhì)細(xì)胞少見(jiàn)，腦皮質(zhì)含有大量神經(jīng)元。MCAO組和RTG組均可見(jiàn)大腦中動(dòng)脈供血區(qū)梗死灶及神經(jīng)功能損傷，但RTG治療組梗死體積及神經(jīng)功能評(píng)分均較MCAO組明顯減少(P<0.05)，RTG6h組較其他給藥組大鼠腦梗死體積及神經(jīng)功能評(píng)分增加(P<0.05)。MCAO組大鼠梗死周?chē)鷧^(qū)Caspase-3陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)、星形膠質(zhì)細(xì)胞明顯增多，梗死區(qū)神經(jīng)元數(shù)量明顯減少，但RTG各組大鼠梗死周?chē)鷧^(qū)Caspase-3陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)、星形膠質(zhì)細(xì)胞均較MCAO組明顯下降(P<0.05)，梗死區(qū)神經(jīng)元的存活數(shù)量明顯增加(P<0.05)，RTG0h組、RTG1h、RTG3h組最為明顯。結(jié)論瑞替加濱對(duì)缺血性腦卒中具有腦保護(hù)作用，其機(jī)制可能是降低神經(jīng)細(xì)胞的興奮性，減輕缺血半影區(qū)的炎癥反應(yīng)，從而抑制細(xì)胞凋亡。瑞替加濱的腦保護(hù)作用具有時(shí)間依賴(lài)性，即超過(guò)一定的時(shí)間窗，腦保護(hù)作用會(huì)減弱。

瑞替加濱；腦卒中；腦梗死；鉀離子通道；缺血再灌注損傷；神經(jīng)興奮性毒性；腦保護(hù)；大鼠

缺血性腦卒中已成為成人死亡和殘疾的主要原因之一，腦缺血后繼發(fā)性腦損傷涉及多種機(jī)制，包括興奮性氨基酸毒性、自由基產(chǎn)生、鈣超載、炎癥反應(yīng)和凋亡等，這些因素相互影響，是加重腦神經(jīng)損傷的重要原因。其中興奮性氨基酸毒性是缺血再灌注損傷級(jí)聯(lián)反應(yīng)中非常關(guān)鍵的一個(gè)環(huán)節(jié)。因此，以降低神經(jīng)細(xì)胞的病態(tài)興奮性為靶點(diǎn)，治療缺血性腦卒中具有潛在的臨床價(jià)值。瑞替加濱(RTG)是第一個(gè)應(yīng)用于臨床的M型鉀離子通道開(kāi)放劑[1]，因其能明顯降低神經(jīng)元的興奮性主要用于抗癲癇治療與研究。也有研究提示瑞替加濱對(duì)缺血性腦卒中再灌注損傷有一定的抑制作用[2]。

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)觀察不同組SD大鼠腦梗死體積、神經(jīng)功能評(píng)分，同時(shí)測(cè)定各組缺血半影區(qū)星形膠質(zhì)細(xì)胞、Caspase-3陽(yáng)性細(xì)胞及梗死皮質(zhì)區(qū)域神經(jīng)元存活數(shù)量，研究瑞替加濱對(duì)SD大鼠急性局灶性腦梗死缺血再灌注損傷的影響，并為臨床治療缺血性腦卒中提供新的思路與方法。

1 材料與方法

1．1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組雄性(Sprague Dawley SD)大鼠，清潔級(jí)，體質(zhì)量240～260 g，由中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院衛(wèi)生學(xué)環(huán)境醫(yī)學(xué)研究動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，大鼠在實(shí)驗(yàn)室適應(yīng)性喂養(yǎng)1～2周。用正常飼料喂養(yǎng)大鼠，自由飲水。實(shí)驗(yàn)前采用抽簽法隨機(jī)分為：(1)假手術(shù)組(Sham組)10只；(2)模型對(duì)照組(MCAO組)20只；(3)治療組(RTG組)80只。按照給藥時(shí)間的不同RTG組再分為RTG0h組、RTG1h組、RTG3h組、RTG6h組，每組20只大鼠。

1．2制作動(dòng)物模型大鼠術(shù)前禁食5 h，10%水合氯醛(3.5 mg/kg)腹腔注射麻醉。參照 Longa 法[3]，使用尼龍線栓(型號(hào)：2634-A4，北京西濃科技有限公司，中國(guó))堵塞大鼠右側(cè)大腦中動(dòng)脈。在缺血120 min后，取出線栓，并恢復(fù)頸總動(dòng)脈血供。使用動(dòng)物體溫維持儀確保大鼠的核心體溫在36 ℃～37 ℃。假手術(shù)組動(dòng)物的處理除不插入線栓外，其余操作過(guò)程與模型制作過(guò)程一致。

1．3給藥時(shí)間和劑量模型建立成功后，RTG組通過(guò)大鼠尾靜脈分別在恢復(fù)灌注的0 h、1 h、3 h、6 h給予瑞替加濱(10.5 mg/kg)[4]，假手術(shù)組和模型對(duì)照組給予等量生理鹽水。

1．4檢測(cè)指標(biāo)及方法

1．4．1 腦梗死體積：每組10只大鼠用于TTC染色，給藥24 h后給予大鼠注射致死劑量的水合氯醛，斷頭、取腦、去除嗅球、小腦及低位腦干，將腦置于-20 ℃冰凍15 min。自前極(anterior pole)向后連續(xù)切取2 mm厚度腦冠狀切片，置37 ℃的2% 2，3，5-氯化三苯基四氮唑(2，3，5-triphenyltetrazoliumchloride，TTC)(上海精析化工)生理鹽水溶液中，37 ℃避光孵育 30 min，之后在4%甲醛溶液中4 ℃固定過(guò)夜。拍攝照片，Image-pro plus 6.0 圖像分析軟件進(jìn)行圖像分析(美國(guó) Media Cybemetics公司)，計(jì)算并統(tǒng)計(jì)腦梗死體積。

1．4．2 Zea-Longa 評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)[5]：0分：無(wú)明顯神經(jīng)缺損癥狀；1分：提尾垂直時(shí)不能伸展左側(cè)前肢；2分：行走時(shí)向左側(cè)繞圈；3分：行走時(shí)身體向左側(cè)傾倒；4分：不能自行行走，意識(shí)喪失。

1．4．3 免疫組化法檢測(cè)缺血半影區(qū)星形膠質(zhì)細(xì)胞、Caspase-3蛋白及梗死皮質(zhì)區(qū)域神經(jīng)元：腦缺血灌注24 h后，斷頸處死SD大鼠，斷頭取腦，制備石蠟切片，切片常規(guī)脫蠟至水，過(guò)氧化物酶溶液阻斷，5%山羊血清封閉，微波爐抗原修復(fù)，PBS 漂洗后依次滴加兔抗Caspase-3抗體(1：100，Affinity)，兔抗GFAP抗體(1：800，Millipore)，兔抗NeuN 抗體(1：200，Millipore)，4 ℃過(guò)夜，使用0.01 PBS漂洗3次，每次5 min，滴加二抗：羊抗兔抗體(1：100，北京中杉金橋生物技術(shù)公司)，37 ℃ 1 h，PBS 漂洗后DAB顯色。平均每張切片取5個(gè)視野，算出每個(gè)視野的Caspase-3陽(yáng)性細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞及皮質(zhì)神經(jīng)元的數(shù)量，并計(jì)算其平均數(shù)。

2 結(jié)果

2．1腦梗死體積及神經(jīng)行為評(píng)分測(cè)定Sham組未見(jiàn)梗死灶形成；MCAO組及RTG組可見(jiàn)不同程度梗死灶形成；與MCAO組相比，RTG0h、RTG1h、RTG3h及RTG6h組腦梗死體積明顯減小(P<0.05)。RTG組大鼠神經(jīng)功能評(píng)分均好于MCAO組(P<0.05)，RTG6h組較0 h、1 h、3 h給藥組SD大鼠腦梗死體積及神經(jīng)功能評(píng)分明顯增加(P<0.05，表1)。

2．2各組大鼠缺血半影區(qū)星形膠質(zhì)細(xì)胞的表達(dá)情況免疫組化結(jié)果顯示，Sham組星形膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)正常，細(xì)胞突起細(xì)長(zhǎng)，胞體小，數(shù)量少。MCAO組與RTG治療組缺血半影區(qū)均出現(xiàn)大量的星形膠質(zhì)細(xì)胞，胞體變大，突起增粗。但是RTG治療組星形膠質(zhì)細(xì)胞的數(shù)量低于MCAO組(P<0.05)，且RTG0h、RTG1h及RTG3h組更為明顯(圖1)。

表1 各組大鼠腦梗死體積、 Longa 評(píng)分比較

注：與Sham組相比，△P<0.05；與MCAO組相比，*P<0.05；與RTG6h組相比，#P<0.05

注：與Sham組相比，#P<0.05；與MCAO組相比，*P<0.05圖1 各組SD大鼠缺血半影區(qū)星形膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá) A：Sham組；B：MCAO組；C：RTG0h組；D：RTG1h組；E：RTG3h組；F：RTG6h組

2．3各組大鼠缺血半影區(qū)Caspase-3的表達(dá)情況免疫組化結(jié)果顯示，生理情況下，Caspase-3陽(yáng)性細(xì)胞少見(jiàn)，在MCAO組和RTG組梗死周?chē)鷧^(qū)均可見(jiàn)大量Caspase-3陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞。與MCAO組(79.07±12.3)相比，RTG各時(shí)間點(diǎn)治療組Caspase-3 表達(dá)(RTG0h：32.1±7.7；RTG1h：33.4±5.1；RTG3h：36.1±6.7；RTG6h：53.7±10.8)均較MCAO組明顯減少(P<0.05)，但6 h給藥組較其他時(shí)間點(diǎn)給藥組Caspase-3陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)增多(圖2)。

圖2 各組SD大鼠缺血半影區(qū) Caspase-3陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)(免疫組化×400)比較 A：Sham組；B：MCAO組；C：RTG0h組；D：RTG1h組；E：RTG3h組；F：RTG6h組

2．4各組大鼠梗死皮質(zhì)區(qū)神經(jīng)元存活數(shù)量情況免疫組化結(jié)果顯示，生理情況下，腦組織皮質(zhì)含有大量神經(jīng)元，細(xì)胞排列緊密MCAO組，梗死皮質(zhì)區(qū)所含神經(jīng)元的數(shù)量明顯減少，而RTG各時(shí)間點(diǎn)治療組存活神經(jīng)元較MCAO組明顯增多(P<0.05)，其中0 h、1 h、3 h給藥組最為明顯(圖3)。

3 討論

瑞替加濱因具有穩(wěn)定神經(jīng)元膜電位，抑制興奮性等特點(diǎn)，目前已作為部分癲癇發(fā)作治療藥物[5]。瑞替加濱的作用靶點(diǎn)是M型鉀離子通道，神經(jīng)元上的M型鉀離子通道是一種電壓依賴(lài)性通道，在能夠引起動(dòng)作電位的閾電壓時(shí)開(kāi)放，具有較慢的通道動(dòng)力學(xué)特征[6]。M通道由 KCNQ(Kv7)家族構(gòu)成，這些同源性或異源性的亞基構(gòu)成的M通道在穩(wěn)定神經(jīng)元膜電位以及調(diào)節(jié)神經(jīng)沖動(dòng)的發(fā)放上具有重要作用[7]。瑞替加濱能夠通過(guò)增強(qiáng)KCNQ2/3亞型鉀通道功能，促使膜電位回到靜息態(tài)而降低神經(jīng)細(xì)胞的興奮性，減少興奮性神經(jīng)遞質(zhì)谷氨酸的釋放[8-9]。

興奮性神經(jīng)毒性最早由Olney[10]研究發(fā)現(xiàn)，其病理生理機(jī)制：腦缺血后細(xì)胞膜電位丟失，隨著能量耗竭，Na+-K+-ATP酶失活，神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞去極化，神經(jīng)元的興奮性增高，大量的興奮性神經(jīng)遞質(zhì)谷氨酸釋放并蓄積，釋放到細(xì)胞外隙，激活N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-aspartate，NMDA)型谷氨酸受體(N-methyl-D-aspartate receptor，NMDAR)，從而引起神經(jīng)元的損傷[11-13]。因RTG能使細(xì)胞內(nèi)大量鉀離子外流降低神經(jīng)元的過(guò)度興奮性，所以，我們猜想RTG能夠有效減少谷氨酸的釋放，從而抑制神經(jīng)細(xì)胞的損傷。本實(shí)驗(yàn)顯示，RTG能夠減輕SD大鼠神經(jīng)功能損傷，縮小腦梗死面積，抑制缺血半影區(qū)炎癥反應(yīng)及細(xì)胞凋亡，減少梗死皮質(zhì)區(qū)域神經(jīng)細(xì)胞死亡，從不同角度證實(shí)RTG對(duì)腦缺血后大鼠具有神經(jīng)保護(hù)作用。在缺血再灌后6 h前給藥這種保護(hù)作用最為明顯。另外，我們之前的實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)[14]，給予小鼠M型鉀離子通道阻滯劑XE991后，小鼠的腦缺血損傷加重。亦有研究表明，腦缺血后為了對(duì)抗谷氨酸的大量釋放，GABA 的含量明顯增多以拮抗缺血引起的谷氨酸興奮毒性，保護(hù)神經(jīng)元的損傷[15]。故這些研究成果成為M型鉀離子通道開(kāi)放劑可以抑制缺血再灌注后興奮性毒性的有力證據(jù)。

注：與Sham組相比，*P<0.05；與MCAO組相比，#P<0.05圖3 各組SD大鼠腦梗死區(qū)域神經(jīng)元的存活數(shù)量(免疫組化×200) A：假手術(shù)組；B：MCAO組；C：RTG0h組；D：RTG1h組；E：RTG3h組；F：RTG6h組

研究顯示，因興奮性毒性加重的炎癥反應(yīng)在缺血性腦卒中的病理進(jìn)程中發(fā)揮重要作用[16]。腦缺血數(shù)小時(shí)內(nèi)即可啟動(dòng)炎癥反應(yīng)過(guò)程，腦內(nèi)的星形膠質(zhì)細(xì)胞及小膠質(zhì)細(xì)胞被激活并伴隨外周中性粒細(xì)胞及淋巴細(xì)胞等的浸潤(rùn)，并釋放大量的炎癥因子，如TNF-α或IL-1β等促進(jìn)神經(jīng)元的凋亡[17]。目前有許多文獻(xiàn)報(bào)道，在腦缺血再灌注損傷中，星形膠質(zhì)細(xì)胞的活化與增殖是一把雙刃劍，一方面，活化的星形膠質(zhì)細(xì)胞釋放大量的炎癥因子，加重缺血再灌注損傷[18]；另一方面，星形膠質(zhì)細(xì)胞的大量增殖又能夠在梗死區(qū)域與周邊區(qū)之間形成一道屏障，阻止梗死區(qū)域釋放的大量具有毒性物質(zhì)向周邊區(qū)域擴(kuò)散，從而達(dá)到控制梗死范圍的作用[19]。那么，M型鉀離子通道開(kāi)放劑對(duì)缺血性再灌注損傷中的保護(hù)作到底是有利還是有害的？實(shí)驗(yàn)顯示，RTG組活化的星形膠質(zhì)細(xì)胞減少，同時(shí)大鼠神經(jīng)功能損害明顯改善，凋亡蛋白Caspase-3表達(dá)減少及梗死區(qū)存活的神經(jīng)元明顯增多，因此我們推測(cè)，RTG應(yīng)該能夠通過(guò)抑制星形膠質(zhì)細(xì)胞興奮性，減少其增殖及活化，并抑制其釋放炎癥因子，達(dá)到保護(hù)神經(jīng)元的作用，而更加確切的結(jié)論還需要我們深入研究。RTG對(duì)腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用在再灌注后6 h給藥效果減弱，提示RTG的治療作用具有時(shí)間依賴(lài)性，這可能與興奮性毒性主要存在于缺血再灌注損傷的早期有關(guān)。

綜上所述，M型鉀離子通道開(kāi)放劑瑞替加濱可以通過(guò)抑制腦缺血后神經(jīng)元的過(guò)度興奮，減輕興奮性神經(jīng)毒性對(duì)神經(jīng)元的損傷。而具體機(jī)制可能是通過(guò)抑制腦梗死區(qū)炎癥反應(yīng)及細(xì)胞凋亡達(dá)到保護(hù)神經(jīng)元的作用。而瑞替加濱的這種治療作用具有一定的時(shí)間依賴(lài)性，即超過(guò)一定的時(shí)間窗，治療作用會(huì)減弱。獲取M型鉀離子通道開(kāi)放劑瑞替加濱能夠減少興奮性神經(jīng)遞質(zhì)——谷氨酸釋放的直接證據(jù)將是我們下一步研究的重點(diǎn)。

[1] 于婷．鉀通道KCNQ2/3/5在糖尿病神經(jīng)病變疼痛中的作用及其機(jī)制[D]．濟(jì)南：山東大學(xué)，2015．

[2] Bierbower SM，Choveau FS，Lechleiter JD，et al．Augmentation of M-type(KCNQ) potassium channels as a novel strategy to reduce stroke-induced braininjury[J]．J Neurosci，2015，35(5)：2 101-2 111．

[3] Ulu? K，Miranpuri A，Kujoth GC，et al．Focal cerebral ischemia model by endovascular suture occlusion of the middle cerebral artery in the rat[J]．J Vis Exp，2011，48：1 978．

[4] 石秋艷，楊斌，孫原，等．Beclin-1、LC3-Ⅱ在缺血后處理大鼠再灌注中的表達(dá)及意義[J]．中風(fēng)與神經(jīng)疾病雜志，2014，31(8)：687-690．

[5] 廖玉芳，岳建農(nóng)，王淋麗，等．興奮性氨基酸及其受體與轉(zhuǎn)運(yùn)體在抗癲癇藥理學(xué)研究中的意義[J]．中國(guó)藥房，2015，26(28)：4 007-4 010．

[6] 高迪，陳淵錦，劉羽丹，等．瑞替加濱對(duì)離體大鼠十二指腸平滑肌收縮功能的影響及其機(jī)制[J]．山東醫(yī)藥，2017，57(20)：17-19．

[7] 何軍娜．瑞替加濱對(duì)實(shí)驗(yàn)性腦梗死小鼠的腦保護(hù)作用：下調(diào)calpain-1、Bax，上調(diào)Bcl-2的表達(dá)[D]．石家莊：河北醫(yī)科大學(xué)，2016．

[8] 胡捷先，陳獻(xiàn)華．腦缺血后谷氨酸通路及其調(diào)控的研究進(jìn)展[J]．復(fù)旦學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2016，43(6)：724-731．

[9] Bierbower SM，Choveau FS，Lechleiter JD，et al．Augmentation of M-Type(KCNQ) Potassium Channels as a Novel Strategy to Reduce Stroke-Induced Brain Injury[J]．J Neurosci，2015，35(5)：2 101-2 111．

[10] Olney JW．Brain lesions，obesity，and other disturbanc-es in mice treated with monosodium glutamate[J]．Science，1969，164(3 880)：719-721．

[11] Lai TW，Zhang S，Wang YT．Excitotoxicity and stroke：identifying novel targets for neuroprotection[J]．Prog Neurobiol，2014，115：157-188．

[12] Fujikawa DG．The role of excitotoxic programmed necrosis in acute brain injury[J]．Comput Struct Biotechnol J，2015，13：212-21．

[13] 尚宇，薛強(qiáng)，顧佩菲，等．右美托咪定對(duì)腦缺血/再灌注大鼠海馬興奮性氨基酸含量及NMDA受體亞單位NR1表達(dá)的影響[J]．中國(guó)應(yīng)用生理學(xué)雜志，2016，32(2)：158-162．

[14] 王德龍，孫原，石秋艷，等．瑞替加濱對(duì)小鼠急性腦缺血再灌注損傷的腦保護(hù)作用及機(jī)制研究[J]．中華神經(jīng)醫(yī)學(xué)雜志，2016，15(10)：991-996．

[15] 朱曉峰．托吡酯對(duì)大鼠局灶性腦缺血再灌注保護(hù)作用的研究[D]．揚(yáng)州：揚(yáng)州大學(xué)，2016．

[16] Denes A，Thornton P，Rothwell NJ，et al．Inflammation and brain injury：acute cerebral ischaemia，peripheral and central inflammation[J]．Brain Behav Immun，2010，24(5)：708-23．

[17] 項(xiàng)薇，潘速躍，譚焱，等．移植活化小膠質(zhì)細(xì)胞改善急性腦梗死小鼠神經(jīng)功能的作用機(jī)制[J]．中國(guó)組織工程研究，2017，21(16)：2 552-2 557．

[18] 宋江華，李剛，元小冬，等．小鼠大腦中動(dòng)脈缺血再灌注后缺血區(qū)及周邊區(qū)星形膠質(zhì)細(xì)胞的變化[J]．中國(guó)神經(jīng)免疫學(xué)和神經(jīng)病學(xué)雜志，2017，24(3)：201-205；209．

[19] Pekny M，Wilhelmsson U，Pekna M．The dual role of astrocyte activation andreactive gliosis[J]．Neurosci Lett，2014，17(565)：30-38．

Theprotectiveeffectsandmechanismsofretigabineforthereperfusioninjuryofcerebralinfarction

SUNYuan，SHIQiuyan，WANGDelong，ZHANGChunyang，LIHong，YANGBin，LIYanling

DepartmentofNeurology，NorthChinaUniversityofScienceandTechnologyAffiliatedHospital，Tangshan063000，China

ObjectiveTo studies impacts of retigabin，a M-type potassium channel opener，on focal cerebral ischemia/reperfusion induced neural injury．MethodsTotally 110 SD rats were randomly divided six groups：sham group (n=10)，MCAO group (n=20) and RTG-treatment group．RTG-treatment group was also divided into RTG0h group (n=20)，RTG1h group (n=20)，RTG3h group (n=20) and RTG6h group (n=20)．The temporary middle cerebral artery occlusion reperfusion model was made by the suture method，reperfusion 2 hours after cerebral ischemia．In RTG-treatment groups，a single dose of 10.5 mg/kg RTG was injected at the designated varying time points (at 0 hour，1 hour，3 hours and 6 hours after the reperfusion)．The sham-operated group and MCAO group

the same volume of saline．Infarct size was measured；the neurological function was scored．The number of astrocytes and Caspase-3(+) cells in the ischemic penumbra，and neurons in the infarct area were detected．ResultsIn the sham group，no infarction was observed，hippocampal neurons had no obvious change，astrocytes and caspase-3(+) cells were hardly to be found，a large number of neurons can be found．MCAO group and RTG group showed cerebral artery infarction and the damage of neurological function，but the infarction volume and neurological outcome scores of the RTG-treatment group were lower than those of the MCAO group (P<0.05)．Compared with RTG0h，RTG1h and RTG3h group，the cerebral infarction volume and neurological outcome scores of RTG6h group were significantly increased (P<0.05)．A lot of astrocytes and caspase-3(+) cells were found in the MCAO group，however，only very few neurons were found in the infarct zone．Compared with the MCAO group，the expressions of astrocytes and caspase-3(+) cells decreased significantly and the number of surviving neurons was significantly increased in the RTG-treatment group (P<0.05)，especially at 0 hour，1 hour and 3 hours group，when compared with RTG6h group．ConclusionRTG has protective time-dependent effect in cerebral ischemic reperfusion injury．

Retigabine；Stroke；Cerebral infarction；Potassium channel；Ischemic reperfusion injury；Nervous excitability toxicity；Brain protection；Rats

10.3969/j.issn.1673-5110.2017.21.001

河北省衛(wèi)生廳課題(編號(hào)：20150082)

孫原(1974-)，男，碩士，副主任醫(yī)師。研究方向：腦血管病。Email：sunyuandoctor@163．com

R-332

A

1673-5110(2017)21-0001-06

(收稿2017-09-27)

夏保軍