產γ-氨基丁酸釀酒酵母JM037釀造桑葚酒風味物質分析

譚霄，曾林，趙婷婷，劉波，張慶*，何紹志，向文良

1(西華大學 食品與生物工程學院，四川省食品生物技術重點實驗室，四川 成都，610039) 2(四川省食品藥品檢驗檢測院，四川 成都，611731)

產γ-氨基丁酸釀酒酵母JM037釀造桑葚酒風味物質分析

譚霄1，曾林1，趙婷婷1，劉波1，張慶1*，何紹志2，向文良1

1(西華大學 食品與生物工程學院，四川省食品生物技術重點實驗室，四川 成都，610039) 2(四川省食品藥品檢驗檢測院，四川 成都，611731)

探究以產γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)釀酒酵母JM037發酵制備桑葚酒過程中風味物質的變化。采用高效液相色譜和頂空固相微萃取-氣相色譜-質譜聯用法，分析發酵過程有機酸與揮發性風味物質的變化，并評估桑葚酒中GABA含量。結果表明：發酵過程中有機酸共檢測出7種，其含量整體呈現出先上升后下降的趨勢；揮發性風味物質共檢測出54種，其中酯類19種、醇類16種、醛類8種、酮類4種、酚類3種及其他類4種，相對含量從高到低依次為醇類、酯類、酮類、醛類和酚類，且揮發性風味物質的種類與相對含量隨發酵過程也不斷變化。主成分分析顯示，桑葚中的醛類、酮類和酚類為發酵桑葚酒中的其他風味成分提供前體物質。評估GABA含量發現，桑葚酒中GABA質量濃度達到1 180 mg/L。

γ-氨基丁酸；釀酒酵母JM037；桑葚酒；風味物質；主成分分析

桑葚(Mulberry,MB)又稱烏葚，為桑科桑屬植物，其果實呈深紫紅色，含有大量的天然紅色素，其色素主要成分為花色苷類，具有抑制血小板凝固、預防心臟病、血栓、延緩衰老等生理作用[1-3]。我國衛生部已把桑葚列為“既是食品又是藥品”的農產品之一[4]。因此，桑葚是一種極具開發潛力和經濟效益的藥食兩用型保健水果。目前，桑葚以鮮食為主，較少用于深加工，因其季節性強，保存時間短，不易貯藏，運輸成本高昂，使鮮果的銷售受到很大限制，嚴重制約桑葚產業的發展[5]。近年，在倡導水果產業多元化發展的指引下，發展桑葚果酒不僅能夠體現桑葚果品的風味特色，而且能夠保持其果實中的部分營養和保健功效[6]。因此，桑葚果酒的研究對桑葚產業的可持續發展有積極意義。

γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid，簡稱GABA)是一種非蛋白質類氨基酸，具有降低血壓、利尿、增強記憶等多種生理功能[7-10]。隨著人們生活水平的提高和保健意識的增強，富含GABA 的功能性發酵飲品已成為研究開發的熱點。而在發酵飲品的開發中，風味是重要的評價指標之一，風味的好壞直接影響著飲品的品質。但發酵飲品獨特的風味與品質受多種因素影響，其中與發酵微生物的關系尤為密切[11]。李艷等[12]研究了3種釀酒酵母對干紅葡萄酒釀造過程中香氣成分的影響及相關性，結果表明，這3種酵母菌發酵葡萄酒中主體香氣成分的相對含量存在顯著性差異；蔣錫龍等[13]分析了不同釀酒酵母對桃果酒香氣成分的影響；有研究表明[14]，酵母菌的糖苷酶活性以及其代謝產物對風味物質的形成具有重要的影響。康明麗等[6]分析了活性干酵母對柑橘酒釀造過程中揮發性風味物質的變化。而目前以產GABA的釀酒酵母發酵制備功能性桑葚酒過程中的風味物質變化及相關性研究尚未見報道。

本研究以桑葚為原料，利用本實驗室前期篩選獲得的產GABA釀酒酵母JM037發酵制備功能性桑葚酒，通過發酵過程中的風味物質變化、相關性及GABA含量分析，為該釀酒酵母及其在發酵制備功能性桑葚酒的產業開發中提供一定的理論參考。

1 材料與方法

1.1 材料和試劑

產GABA釀酒酵母JM037，本實驗室從四川泡菜中分離獲得的菌株，NCBI登錄號為：KU761835[15]；商業安琪耐高溫釀酒高活性干酵母購買于安琪酵母股份有限公司。菌株采用含5 g/LL-谷氨酸鈉(L-monosodium glutamate,L-MSG)的麥芽汁瓊脂培養基斜面保存。

桑葚(大十)，購于四川大邑桑葚基地(糖含量7 g/100mL)；GABA色譜純(含量≥99%)，上海金穗生物科技有限公司；鄰苯二甲醛(ortho-Phthalaldehyde,OPA)，成都華夏化學試劑有限公司；其他試劑均為國產色譜純或分析純，上海生工生物工程公司。

1.2 儀器與設備

Waters2695高效液相色譜儀(配有Waters2998紫外檢測器)，美國沃特世公司；GC-MS QP2010 Plus氣相色譜-質譜聯用儀，日本島津公司；固相微萃取針頭75 μm CAR/PDMS、SPME手動進樣手柄，美國Supelco公司；7820A氣相色譜儀(配有氫火焰離子化檢測器)，安捷倫科技有限公司；pHS-3C酸度計，成都世紀方舟科技有限公司。

1.3 方法

1.3.1 釀制過程

參考潘訓海等[16]桑葚酒的釀造工藝，挑選并完全粉碎桑葚后，蔗糖調節糖度至19%，添加偏重亞硫酸鉀，使有效SO2含量達到60 mg/L，并加入L-MSG至5 g/L。以安琪耐高溫釀酒高活性干酵母(AQ)為對照，按6 lg CFU/mL接種量的釀酒酵母JM037接種，溫度控制在(22±2) ℃，至殘糖質量濃度降到4 g/L后，加至30 mg/L亞硫酸封罐，終止發酵，并將溫度降至0～5 ℃，靜置澄清。

1.3.2 理化指標分析

酵母菌計數：采用稀釋涂布YPD平板測定發酵過程中釀酒酵母JM037和商業活性干酵母數量變化；pH值測定：采用pHS-3C酸度計測定桑葚酒發酵過程中pH變化；可滴定酸測定：參照GB/T 12456—2008《食品中總酸的測定》滴定；糖含量測定：參照GB 5009.7—2016《食品中還原糖的測定》方法測定；乙醇含量測定：采用氣相色譜法，參照謝文等[17]利用甲醇稀釋法進行乙醇產量檢測，同時對未接種AQ和JM037酵母的桑葚汁檢測為實驗的空白組。

1.3.3 桑葚酒發酵過程有機酸含量測定

運用HPLC方法分析，參照商敬敏等[18]有機酸檢測方法測定桑葚酒發酵過程中有機酸含量，色譜條件：色譜柱為樹脂色譜柱HPX-87H(300 mm×7.8 mm,Bio-Rad)，流動相為0.057 mol/L H2SO4，流速為0.6 mL/min，檢測波長為210 nm，柱溫60℃，進樣量20 μL。

1.3.4 GC-MS分析

參照PAULO等[19]基于HS-SPME/GC-MS對不同桑葚品種揮發性物質的分析，采用頂空固相微萃取技術和氣相色譜-質譜方法分析桑葚酒風味物質形成過程及不同發酵階段的差異性。

1.3.5 桑葚酒中GABA含量測定

參照AMIR等[20]利用鄰苯二甲醛衍生化的方法測定桑葚酒發酵結束后GABA的產量，HPLC分析條件：色譜柱為島津-GL INERTSIL ODS-3(4.6 mm×150 mm,5 μm)；紫外檢測波長為254 nm；柱溫30 ℃；進樣量20 μL；流動相A為甲醇，流動相B為醋酸鈉(pH 6.2)∶甲醇∶四氫呋喃(84∶25∶1,V/V)；流速1 mL/min；梯度洗脫時，流動相B比例為：0～6 min，80%～50%；6～9 min，50%～20%；9～10 min，20%～0%；10～11 min，維持0%；11～15 min，返回80%。

1.3.6 數據分析

實驗數據采用IBM SPSS statistics 20統計軟件進行單因素方差分析(ANOVA)、多重比較法(LSD)和主成分分析(principal component analysis,PCA)。折線圖和熱點圖分別采用Origin 8.0和Heml 1.0.3.3-Heatmap Illustrator進行繪制。每組實驗5個水平，所有結果用平均值±標準差表示。

2 結果與分析

2.1 桑葚酒發酵過程理化指標分析

釀酒酵母JM037和商業活性干酵母發酵制備桑葚酒過程中的理化指標分析結果見表1。

表1 桑葚酒不同發酵時期酵母總數和理化成分分析Table 1 The yeast number and physicochemical properties of mulberry wine during different fermentation periods

注：“MB”是將桑葚汁調整酸和糖并采用超高溫瞬時殺菌技術處理后的樣品；不同小寫字母表示差異顯著(p<0.05)；“-”表示未檢出。

由表1結果發現，pH值在發酵初期時下降，隨后略有上升，而可滴定酸含量的變化并不顯著(p>0.05)。這可能與發酵初期酵母形成乙酸、草酸等酸性物質(見圖1(A))，導致pH值的降低，但其后酵母轉入酒精發酵階段，其分泌的蛋白酶水解蛋白質生成氨基酸，氨基酸脫氨作用生成NH3，造成pH值上升[21]。此外，由桑葚酒發酵過程中的殘糖與乙醇含量變化可看出，隨著釀酒酵母JM037發酵的進行，殘糖顯著降低(p<0.05)，乙醇含量明顯增高，顯示該酵母菌株具備良好的乙醇轉化能力。

2.2 桑葚酒發酵過程有機酸變化

采用HPLC對不同發酵時期桑葚酒中有機酸含量進行測定，結果見圖1(A)。在桑葚汁中檢測出蘋果酸(malic acid,MLA)、檸檬酸(citric acid,CTA)、酒石酸(tartaric acid,TTA)、琥珀酸(succinic acid,SCA)、乳酸(lactic acid,LTA)和草酸(oxalic acid,OLA)6種有機酸，總有機酸質量濃度為7.00 g/L，其中蘋果酸和檸檬酸含量較高，分別為2.73 mg/L和2.24 mg/L。與KOYUNCU[22]測定桑葚果汁中有機酸含量的結果略有不同，可能是桑葚品種差異造成的。

圖1 不同發酵時期桑葚酒中有機酸含量變化和主成分分析Fig.1 The content and principal component analysis of organic acids in mulberry wine at different fermentation time

由圖1(A)可知，接種釀酒酵母JM037發酵第1天后，6種有機酸含量均在增加，并有少量乙酸生成，在發酵初期，酵母菌利用底物發酵生成各種有機酸。隨著發酵的進行，蘋果酸-乳酸發酵受到酒精發酵的抑制[23]，導致乳酸、蘋果酸和檸檬酸迅速減少。而接種商業活性干酵母的發酵液中有機酸變化趨勢和幅度大致相同，除乳酸含量維持穩定，其余各種有機酸基本呈現先上升后下降的趨勢，并產生大量丙酸(propionic acid,PPA)和乙酸(acetic acid,ATA)。

主成分分析(PCA)是常用的數理統計分析方法，它能在多個指標表現的多元信息中進行降維處理，并篩選出關鍵特征和有用信息[24]。由圖1(B)可知，分別接種釀酒酵母JM037和商業活性干酵母的前2個主成分分別占總方差73.82%和24.62%，二者合占98.44%，表明2個主成分已經基本代表了樣品的主要信息特征，能用來分析桑葚酒發酵過程釀酒酵母JM037和商業活性干酵母與發酵桑葚酒中有機酸的相關性。在PC1的正向端，蘋果酸和檸檬酸與桑葚汁和桑葚酒發酵過程均相關。在PC2的正向端，蘋果酸、檸檬酸、酒石酸和草酸與桑葚汁、商業活性干酵母發酵1 d和釀酒酵母JM037發酵1 d相關；在PC2的負向端，琥珀酸、乳酸、草酸、丙酸和乙酸與商業活性干酵母發酵5 d、9 d，釀酒酵母JM037發酵5 d、9 d相關。

2.3 HS-SPME/GC-MS檢測桑葚酒發酵過程中揮發性物質

采用HS-SPME/GC-MS聯用方法對桑葚酒發酵過程中揮發性物質進行萃取并檢測，結果見表2。測出桑葚汁中揮發性物質27種，釀酒酵母JM037發酵1 d、5 d、9 d分別為23、27、34種，而商業活性干酵母發酵1 d、5 d、9 d分別有20、24和26種揮發性成分。由表3可知，桑葚汁中醇類、醛類和酚類的相對含量較高，分別占38.57%、26.80%和17.24%。在商業活性干酵母釀造的桑葚酒第1天，酯類和醇類物質顯著增加(p<0.05)，醛類、酮類和酚類物質顯著降低(p<0.05)，隨后各類揮發性物質總相對含量變化不顯著(p>0.05)，但種類發生改變，呈先減少后增加的趨勢。在釀酒酵母JM037釀造的桑葚酒過程中，各類揮發性物質的變化趨勢與安琪酵母釀造桑葚酒相一致，而酯類揮發性物質相對含量相對較低，醇類物質相對含量相對較高，其余相對含量基本保持一致，但在揮發性物質種類上明顯優于商業活性干酵母。結果表明，釀酒酵母JM037作為發酵菌株能夠制備風味豐富的桑葚酒。

表2 基于HS-SPME/GC-MS的桑葚酒發酵過程中揮發性成分分析(匹配度≥80%) 單位：%Table 2 Volatile compounds profiles of mulberry wine at different fermentation period identified by HS-SPME/GC-MS

續表2

序號化合物名稱英文名稱MBAQJM0371d5d9d1d5d9d444?羥基?2?丁酮4?Hydroxy?2?butanone0 220 610 940 311 420 401 9445甲基庚烯酮Methylheptenone0 72------46大馬士酮Damascenone5 843 252 562 013 102 592 2647香葉基丙酮Geranylacetone---0 080 250 120 0648丁香酚Eugenol6 50 410 390 50 160 240 13492，4二叔丁基苯酚2，4?Ditertbutylphenol3 790 130 260 180 130 630 4750桉樹酚1，4?Cineole0 36------512?氨基?5甲基苯甲酸2?Amino?5-methylbenzoicacid0 86------52葑烯Fenchene----0 13--53甲基萘Methylnaphthalene--0 01-0 030 350 1254萘Naphthalene--0 12-1 312 991 87

注：“-”代表未檢出；MB是將桑葚汁調整酸和糖并采用超高溫瞬時殺菌技術處理后的樣品。

表3 桑葚酒發酵過程中各類揮發物質的相對含量 單位：%Table 3 The relative content of various volatile compounds classes of mulberry wine at different fermentation time

注：相對含量是以總揮發性物質為100%，各種揮發性占總香氣物質的比例；MB是將桑葚汁調整酸和糖并采用超高溫瞬時殺菌技術處理后的樣品；不同小寫字母表示差異顯著(p<0.05)。

2.4 桑葚酒發酵過程中揮發性物質成分比較

2.4.1 酯類揮發性物質分析

酯類是桑葚酒中揮發性風味種類最多的物質，也是呈現出特殊花香和果香味的重要物質基礎[25]。由圖2可以看出，釀酒酵母JM037發酵過程中酯類風味物質相對含量先增加后減少，而酯種類增加。在發酵過程中，乙酸異戊酯、辛酸乙酯、乙酸苯乙酯為桑葚酒主要酯類物質，且隨發酵時間的增加而增加。此外，2種酵母菌發酵桑葚酒中共有的酯類物質是丙酸乙酯(菠蘿香味)、乙酸丁酯(水果香味)、丁酸乙酯(水果香味)、乙酸異戊酯(香蕉香味)、辛酸乙酯(白蘭地的香味)、苯乙酸乙酯(蜂蜜香味)、乙酸苯乙酯(甜蜜的香味)、苯丙酸乙酯(甜水果味)、反式-43癸烯酸乙酯(梨香味)、癸酸乙酯(椰子香味)和月桂酸乙酯(花生香味)，而乙二醇單甲酸酯、丙烯酸正戊酯、己酸甲酯(菠蘿香味)、甲酸異丁酯(甜水果味)、甲基丁酸異戊酯為釀酒酵母JM037釀造的桑葚酒所獨有，其中，己酸甲酯、甲酸異丁酯為桑葚中酯類特征風味物質，釀酒酵母JM037不僅能最大限度的保留原有的特征風味，還能豐富桑葚酒的風味物質。

圖2 桑葚酒發酵過程中揮發性物質的熱點圖Fig.2 Hierarchical clustering analysis dendrogram associated with heatmap of volatile compounds profiles of mulberry wine at different fermentation time

2.4.2 醇類揮發性物質分析

由表3可以看出，釀酒酵母JM037和商業活性干酵母發酵的桑葚酒中，均為醇類物質的相對含量占有絕對優勢，主要來源于微生物代謝物和氨基酸代謝[25]。其中，異戊醇呈香蕉味，可以柔和桑葚酒中苦味氨基酸的苦和澀味[26]。β-苯乙醇是桑葚酒中的特征性香氣物質，具有清甜的玫瑰香味，落口有綿甜清爽之感[27]。由圖2可知，釀酒酵母JM037發酵過程中，醇種類逐漸減少，為形成酸類、酯類等香氣物質提供前體物質[28]。而異戊醇呈先增加后減少，β-苯乙醇呈線性增加，且發酵結束后，，異戊醇和β-苯乙醇是桑葚酒中的主要醇類，其分別占醇類相對含量的38.79%和44.91%。

2.4.3 醛類、酮類和酚類揮發性物質分析

相對酯類和醇類，醛類、酮類和酚類揮發性風味物質的含量明顯較少，但它們對酒體風味的形成也具有重要作用。由表2可知，在桑葚酒發酵過程中，共檢測出了癸醛(檸檬香味)、香草醛(柑橘香味)、壬醛(花香氣味)、苯甲醛、4-羥基-2-丁酮、大馬士酮(玫瑰芳香)、香葉基丙酮、丁香酚(丁香辛香氣)和2,4-二叔丁基苯酚等醛類、酮類和酚類，對酒體香氣的融合和協調也有重要作用。由圖2可以看出，桑葚果中含有豐富的醛類、酮類和酚類物質，隨發酵進行，其種類及相對含量逐步減少，僅香草醛和癸醛為發酵過程中產生。

2.5 桑葚酒發酵過程中揮發性物質的主成分分析

對釀酒酵母JM037和商業活性干酵母發酵桑葚酒過程中揮發性風味物質進行PCA分析，結果如圖3所示。前2個主成分分別占總方差74.64%和22.23%，二者合占98.44%，能用來分析桑葚酒發酵過程釀酒酵母JM037和商業活性干酵母與發酵桑葚酒揮發性風味物質的相關性。在PC2的正向端，釀酒酵母JM037和商業活性干酵母發酵過程與丙酸乙酯、乙酸異戊酯、辛酸乙酯、乙酸苯乙酯、癸酸乙酯、甲基丁酸異戊酯、異戊醇、1,3-丁二醇、β-苯乙醇、苯甲醛和大馬士酮相關，其中異戊醇和β-苯乙醇的貢獻率最大，在PC2的負向端，其余揮發性物質與桑葚果汁相關。此外，在PC1的正向端，主要以苯甲醛、大馬士酮、丁香酚等醛類、酮類和酚類物質貢獻率最大，在PC1的負向端，主要以丙酸乙酯、乙酸丁酯和乙酸苯乙酯等酯類貢獻較大，其次為異戊醇、β-苯乙醇等醇類。分析表明，釀酒酵母JM037與商業活性干酵母都能釀制風味良好的桑葚酒，同時還能高度保持桑葚果固有的風味。

圖3 桑葚酒發酵過程中揮發性成分的PCA分析Fig.3 Principal component analysis of volatile compounds profiles of mulberry wine at different fermentation time

2.6 桑葚酒中GABA含量分析

利用HPLC對發酵桑葚酒中GABA含量進行測定，其定性定量結果見圖4，由圖4(A)可以看出，2種發酵桑葚酒中前體物L-MSG明顯減少，有研究表明，釀酒酵母能將L-谷氨酸通過轉氨基生成L-苯丙氨酸，進一步通過艾麗希途徑生成β-苯乙醇[29]。而本研究篩選的產GABA釀酒酵母JM037具有較高谷氨酸脫羧酶(glutamic acid decarboxylase,GAD)活性，能將L-MSG催化脫羧生成GABA。由圖4(B)可知，釀酒酵母JM037產GABA能力顯著高于商業活性干酵母(P<0.05)。在發酵結束后，桑葚酒中GABA質量濃度達到1 180 mg/L。結果表明，釀酒酵母JM037能釀制出風味良好且富含GABA的功能性桑葚酒。

A:HPLC色譜圖；B:GABA質量濃度圖A：a-5g/L的L-MSG和GABA混合標準品；b-釀酒酵母JM037釀制的桑葚酒；c-商業活性干酵母釀制的桑葚酒圖4 發酵桑葚酒中GABA的 HPLC色譜圖及其質量濃度Fig.4 The HPLC chromatogram and GABA concentration in the fermented mulberry wine

3 結論

本研究以產GABA釀酒酵母JM037發酵制備富含GABA桑葚酒，在發酵過程中共檢測出7種有機酸，分別為蘋果酸、檸檬酸、酒石酸、琥珀酸、乳酸、草酸和乙酸，其中蘋果酸和檸檬酸含量最高，含量整體上呈現出先上升后下降的趨勢；揮發性成分共鑒定出54種，分別為酯類、醇類、醛類、酮類、酚類及其他類等，其中酯類物質種類最多，但醇類物質在含量上所占比重最高，且揮發性風味物質的種類與相對含量隨發酵進行也不斷變化。主成分分析顯示，蘋果酸和檸檬酸與整個發酵過程均相關，桑葚中的醛類、酮類和酚類為發酵桑葚酒中的其他風味成分提供物質基礎。發酵桑葚酒中GABA含量達到1 180 mg/L。研究表明，釀酒酵母JM037能釀制出風味豐富且富含GABA的桑葚酒。

[1] HUANG H P,CHANG Y C,WU C H,et al.Anthocyanin-rich mulberry extract inhibit the gastric cancer cell growthinvitroand xenograft mice by inducing signals of p38/p53 and c-jun[J].Food Chemistry,2011,129(4):1 703-1 709.

[2] 黃曉杰,田雪瑛,郭彥玲,等.桑葚果漿中花色苷及其色澤的熱降解動力學[J].食品與發酵工業,2014,40(5):51-55.

[3] 曹倩雯,鄭飛云,趙佳迪,等.桑葚果酒專用酵母的分離、篩選及鑒定[J].食品與發酵工業,2017,43(3):94-98.

[4] 寧維穎,邵秀芝,盛玉鳳.桑葚的營養及其原果汁的加工[J].糧油加工與食品機械,2004(9):66-67.

[5] 吳瓊,馮衛敏,蔣和體.不同殺菌方式對桑葚原汁品質的影響[J].食品科學,2016,37(9):144-149.

[6] 劉瑋,陳亮,吳志明,等.不同酵母發酵的桑葚果酒香氣成分的分析[J].食品研究與開發,2013(24):212-217.

[7] MARINA D,JOAN Q,MAGDALENA R,et al.Gamma-aminobutyric acid as a bioactive compound in foods:a review[J].Journal of Functional Foods,2014,10:407-420.

[8] 張暉,姚惠源,姜元榮.富含γ-氨基丁酸保健食品的研究與開發[J].食品與發酵工業,2002,28(9):69-72.

[9] CALIXTO E.GABA withdrawal syndrome:GABAA receptor synapse,neurobiological implications and analogies with other abstinences[J].Neuroscience,2016,313:57-72.

[10] 趙國群,關軍鋒.高產γ氨基丁酸釀酒酵母的篩選及其在梨酒釀制中的應用[J].食品工業科技,2015,36(23)： 173-175.

[11] 張明霞,吳玉文,段長青.葡萄與葡萄酒香氣物質研究進展[J].中國農業科學,2008,41(7):2 098-2 104.

[12] 李艷,康俊杰,成曉玲,等.3種釀酒酵母釀造赤霞珠干紅葡萄酒的香氣成分分析[J].食品科學,2010,31(22):378-382.

[13] 蔣錫龍,孫玉霞,董興全,等.不同釀酒酵母發酵桃果酒香氣成分研究[J].食品工業科技,2013,34(21):91-96.

[14] 蓋禹含,辛秀蘭,楊國偉,等.不同酵母發酵的藍莓酒香氣成分GC-MS分析[J].食品科學,2010,31(4):171-174.

[15] 曾林,劉波,許小艷,等.四川泡菜中產γ-氨基丁酸微生物的系統發育與表達能力評估[J].食品科學,2017,38(2):87-91.

[16] 潘訓海,劉新露,羅惠波,等.桑葚果酒酵母的分離及篩選[J].江蘇農業科學,2013,41(5):249-251.

[17] 謝文,丁慧瑛,章曉氡,等.葡萄酒、果酒中乙醇含量的測定方法[J].色譜,2004,22(5):561-561.

[18] 商敬敏,牟京霞,孟啟山,等.桑葚酒發酵過程中有機酸含量變化[J].食品工業科技,2012,33(4):241-243.

[19] PAULO R R M,MARIA A P C C,JAILSON B A,et al.Discrimination ofEugeniaunifloraL.biotypes based on volatile compounds in leaves using HS-SPME/GC-MS and chemometric analysis[J].Microchemical Journal,2017,130:79-87.

[20] AMIR H,TAJ M J,MUHAMMAD Y K,et al.HPLC determination of gamma amino butyric acid (GABA) and some biogenic amines (BAs) in controlled,germinated,and fermented brown rice by pre-column derivatization[J].Journal of Cereal Science,2015,64:56-62.

[21] 朱佳娜,王英,李思睿,等.自然發酵黑莓果酒中降酸酵母的篩選與鑒定[J].中國食品學報,2012,12(10):182-187.

[22] KOYUNCU F.Organic acid composition of native black mulberry fruit[J].Chemistry of Natural Compounds,2004,40(4):367-369.

[23] ANA L F,CINTIA L R,ROSANE F S.Microbiological and chemical parameters during cassava based-substrate fermentation using potential starter cultures of lactic acid bacteria and yeast[J].Food Research International,2015,76:787-795.

[24] 呂姍,凌敏,董浩爽,等.烘干溫度對大棗香氣成分及理化指標的影響[J].食品科學,2017,38(2):139-163.

[25] GUSTAV S,BERNARD P,FLORIAN F B.Wine flavor and aroma[J].Journal of Industrial Microbiology and Biotechnology,2011,38:1 145-1 159.

[26] YU H Y,DAI X,YAO G Y,et al.Application of gas chromatographybased electronic nose for classification of Chinese rice wine by wine age[J].Food Analytical Methods,2014,7(7):1 489-1 497.

[27] BERENGUER M,VEGARA S,BARRAJOn E,et al.Physicochemical characterization of pomegranate wines fermented with three differentSaccharomycescerevisiaeyeast strains[J].Food Chemistry,2016,190:848-855.

[28] 栗連會.瀘型酒酒醅中乳酸菌和乳酸降解菌的多樣性和代謝特性[D].無錫:江南大學,2016.

[29] 杜閃,王雪花，楊政茂,等.生物轉化合成β-苯乙醇代謝途徑及其調控的研究[J].食品與發酵工業,2014,40(1):168-173.

AnalysisonflavorsofmulberrywinebrewingbySaccharomycescerevisiaeJM037producingγ-aminobutyricacid

TAN Xiao1,ZENG Lin1,ZHAO Ting-ting1,LIU Bo1,ZHANG Qing1*,HE Shao-zhi2,XIANG Wen-liang1

1(Provincial Key Laboratory of Food Biotechnology of Sichuan,College of Food and Bioengineering,Xihua University,Chengdu 610039,China) 2(Sichuan Institute for Food and Drug Control,Chengdu 611731,China)

Flavors change of mulberry wine fermented bySaccharomycescerevisiaeJM037 with γ-aminobutyric acid(GABA) production capacity were analyzed during fermentation process.The changes of organic acid and volatile compounds were evaluated by high performance liquid chromatography (HPLC) and head-space solid phase micro-extraction associated with gas chromatography-mass spectrometry (HS-SPME/GC-MS),respectively.Meanwhile,the production of GABA in mulberry wine was measured.The results showed that 7 kinds of organic acids were detected,and their contents were firstly increased and then decreased.Totally 54 volatile compounds were identified in mulberry wine,including 19 esters,16 acohol,8 aldehydes,3 ketones,3 phenols,4 others,and the relative content of volatile compounds from high to low was as follows:alcohols,esters,ketones,aldehydes and phenols.Moreover,the kinds and relative content of volatile compounds were changed during fermentation process.Finally,the principal component analysis (PCA) demonstrated that aldehydes,ketones and phenols of mulberry provided the precursor substance for other flavor compounds of the fermented mulberry wine.Furthermore,the concentration of GABA in mulberry wine reached 1 180 mg/L.

γ-aminobutyric acid;SaccharomycescerevisiaeJM037; mulberry wine; flavor compounds; principal component analysis

10.13995/j.cnki.11-1802/ts.015173

碩士研究生(張慶副教授為通訊作者，E-mail：biozhan gq@163.com)。

四川省應用基礎項目(2016JY0253)；四川省科技成果轉化示范項目(2016CC0074)；四川省食品生物技術重點實驗室項目(szjj2016-019)；西華大學大健康管理發展中心重點項目(szjj2017-037)

2017-07-12，改回日期：2017-08-28