高效液相色譜法測定蔬菜中氨基甲酸酯類農(nóng)藥

王敏，李廣益，宋豐江，王鐘，高慧，邢燕

（淄博市疾病預(yù)防控制中心，山東淄博255026）

高效液相色譜法測定蔬菜中氨基甲酸酯類農(nóng)藥

王敏，李廣益，宋豐江，王鐘，高慧，邢燕*

（淄博市疾病預(yù)防控制中心，山東淄博255026）

建立高效液相色譜-柱后衍生測定蔬菜中6種氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的方法。樣品中的氨基甲酸酯類農(nóng)藥經(jīng)乙腈溶劑超聲提取后，CARB/NH2固相萃取柱凈化，高效液相色譜-柱后衍生法進(jìn)行定量分析。結(jié)果表明在一定濃度范圍內(nèi)質(zhì)量濃度與峰面積有良好的線性關(guān)系，其線性相關(guān)系數(shù)為0.999 2～0.999 8，加標(biāo)回收率在79%～91%之間，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為0.8%～4.9%，方法檢出限為0.002mg/kg～0.005mg/kg。

蔬菜；氨基甲酸酯類農(nóng)藥；高效液相色譜；柱后衍生

氨基甲酸酯類農(nóng)藥是繼有機(jī)氯、有機(jī)磷類農(nóng)藥后發(fā)展較為迅速的一類高效、廣譜殺蟲劑，常用于蔬菜、水果等農(nóng)作物的病蟲害防治，具有分解快，殘留期短等特點(diǎn)[1]。然而，由于其在蔬菜上的過量殘留或長期暴露于受污染的環(huán)境中會對人體健康造成一定的危害[2]，該類農(nóng)藥的殘留情況也越來越受關(guān)注[3-8]。因而，開展氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留檢測技術(shù)的研究非常必要。

目前測定食品中氨基甲酸酯的分析方法主要有生物檢測法[9]、生物傳感器法[10]、氣相色譜法[11]、氣相色譜-質(zhì)譜法[12-14]、液相色譜-質(zhì)譜法[15-20]和液相色譜法[7，21]等。由于氨基甲酸酯類化合物極性強(qiáng)、熱穩(wěn)定性差，使液相色譜法和液相色譜-質(zhì)譜法成為首選的分析方法。其中，液相色譜-柱后衍生法測定氨基甲酸酯類農(nóng)藥，方法重現(xiàn)性好、靈敏度高，且不需要設(shè)備昂貴的質(zhì)譜，在氨基甲酸酯類農(nóng)藥的檢測工作中應(yīng)用較為廣泛。本研究通過對蔬菜中殘留的氨基甲酸酯類農(nóng)藥進(jìn)行提取、凈化，建立了蔬菜中6種氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的柱后衍生-高效液相色譜法，滿足蔬菜中氨基甲酸酯類農(nóng)藥的日常檢測要求。

1 材料與方法

1.1 試樣

蔬菜樣品來源：隨機(jī)抽取25種市售蔬菜。

1.2 儀器與試劑

e2695型高效液相色譜儀配熒光檢測器、Waters Symmetry C18（4.6 mm×250 mm，5.0 μm）色譜柱：Waters公司；ST 16R型高速離心機(jī)：Thermo Fisher公司；N-EVAPTM112型氮吹濃縮儀：Organomation公司；KQ-250B型超聲波清洗器：昆山市超聲儀器有限公司；12位SPE固相萃取儀：Supelco公司；CARB/NH2（500mg/6mL）固相萃取小柱：Agilent公司。

甲醇、乙腈、丙酮、二氯甲烷（均為色譜純）：默克公司；氫氧化鈉、鄰苯二甲醛（OPA）、硼砂、巰基乙醇（均為分析純）：國藥集團(tuán)；6種氨基甲酸酯（克百威、三羥基克百威、涕滅威、涕滅威砜、滅多威、涕滅威亞砜，濃度均為100μg/mL）：農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)制所，準(zhǔn)確吸取上述標(biāo)準(zhǔn)貯備液各100 μL于1mL容量瓶中，丙酮定容至刻度，得標(biāo)準(zhǔn)混合應(yīng)用液濃度為10.0μg/mL。

1.3 儀器條件

色譜柱：Waters Symmetry C18（4.6 mm×250 mm，5.0 μm）。

柱溫：42℃；激發(fā)波長：330 nm；發(fā)射波長：465 nm；進(jìn)樣體積：20 μL。

流動相：水-甲醇；流速：1.0mL/min。梯度洗脫程序見表1。

表1 梯度洗脫程序Table 1 Gradient eluting condition of mobile phase

1.4 柱后衍生試劑的配制

衍生試劑1：將1.00gNaOH溶于水，稀釋至500mL，過濾，脫氣，備用。

衍生試劑2：將0.1 g OPA溶于10mL甲醇中，將以上混合物加入含有19.1 g硼砂的水溶液中。補(bǔ)充溶劑直至最終容量達(dá)到1.0 L，過濾并脫氣。在所得的溶液中，加入25 μLβ-巰基乙醇，輕搖，混合后備用。操作過程需避光。

1.5 柱后衍生條件

衍生試劑1流速：0.3mL/min，衍生試劑2流速：0.3mL/min；柱后衍生反應(yīng)器溫度：80℃。

1.6 樣品測定

稱取10.0 g左右已粉碎的蔬菜樣品于50mL離心管中，加入25mL乙腈后搖勻，超聲萃取20min后離心分層。將上清液15mL在40℃水浴中氮吹至近干，加入1mL丙酮，待凈化。取固相萃取小柱（CARB/NH2，500mg/6mL），于固相萃取儀上固定好，用丙酮/二氯甲烷（1∶1，體積比）5mL淋洗萃取小柱。當(dāng)二氯甲烷液面即將到達(dá)小柱吸附層表面時，立即將樣品液轉(zhuǎn)入萃取柱中，另取一10mL比色管接收樣液，待液面即將到達(dá)小柱吸附層表面時，再分別以丙酮/二氯甲烷（1∶1，體積比）10mL先后分三次淋洗小柱，用氮?dú)獯抵两桑蛹状级ㄈ葜?.0mL，過0.22 μm有機(jī)膜，待測。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)色譜圖

6種氨基甲酸酯農(nóng)藥（克百威、三羥基克百威、涕滅威、涕滅威砜、滅多威、涕滅威亞砜）的混合標(biāo)液色譜圖如圖1所示。

圖1表明，在上述梯度洗脫程序下，6種氨基甲酸酯類農(nóng)藥在20min內(nèi)能夠得到很好的分離。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線及檢出限

分別配制6種氨基甲酸酯濃度為：0.05、0.10、0.50、1.00、2.00、5.00μg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，采用本試驗(yàn)所確定的分析條件，以保留時間定性，外標(biāo)峰面積（y）與濃度（x）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，方法檢出限按照3倍信噪比計算。結(jié)果見表2。

由表2可以看出，在 0.05μg/mL～5.00μg/mL 濃度范圍內(nèi)，6種氨基甲酸酯農(nóng)藥的質(zhì)量濃度與峰面積有良好的線性關(guān)系，其線性相關(guān)系數(shù)為0.999 2～0.999 8，方法檢出限在0.002mg/kg～0.005mg/kg。

2.3 方法回收率和精密度

取10.00 g不含氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的白菜樣品，加入相應(yīng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液50 μL，渦旋混勻，配制成氨基甲酸酯濃度為 0.10、0.50、2.00μg/mL 的模擬樣品，每一濃度平行制作6份，記錄氨基甲酸酯的峰面積值，帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線計算測得濃度，得方法的精密度。模擬樣品經(jīng)上述前處理后，測得的氨基甲酸酯色譜峰面積與相應(yīng)濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液直接進(jìn)樣測得的色譜峰面積相比，得絕對回收率。其結(jié)果見表3。

圖1 6種氨基甲酸酯農(nóng)藥的混合標(biāo)液色譜圖Fig.1 Chromatogram of the mixture of 6 carbamate pesticide standards

表2 6種氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的保留時間、線性范圍、相關(guān)系數(shù)（R2）以及檢出限Table 2 Retention times，linear ranges，correlation coefficients and detection limits of 6 carbamate pesticides

表3 方法回收率及精密度（n=6）Table 3 Recovery and precision of the method

續(xù)表3 方法回收率及精密度（n=6）Continue table 3 Recovery and precision of the method

由表3可以看出：在3個添加水平上，6種氨基甲酸酯類農(nóng)藥的加標(biāo)回收率在79%～91%之間，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）均小于5.0%，符合農(nóng)藥多殘留檢測的回收率和RSD要求。

2.4 樣品測定

運(yùn)用上述方法對隨機(jī)抽取的5種市售蔬菜進(jìn)行測定，其結(jié)果見表4。

由表4可以看出，5種市售蔬菜中的6種氨基甲酸酯類農(nóng)藥的測定結(jié)果均小于檢出限。

3 結(jié)論

本研究建立了高效液相色譜-柱后衍生法同時測定蔬菜中6種氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留，加標(biāo)回收率在79%～91%之間，方法檢出限為0.002mg/kg～0.005mg/kg，方法靈敏、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，達(dá)到農(nóng)殘檢測的要求，適用于蔬菜中多種氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的同時測定。

表4 實(shí)際樣品的測定結(jié)果Table 4 Determination results in different samples

[1]于彥彬,譚丕功,曲璐璐,等.PSA分散固相萃取液相色譜柱后衍生熒光法測定蔬菜和水果中的13種氨基甲酸酯[J].分析試驗(yàn)室,2009,28(11):97-101

[2]李崇瑛,白亞之,鈕松召,等.食品中氨基甲酸酯農(nóng)藥殘留的分析方法[J].分析科學(xué)學(xué)報,2007,23(6):723-728

[3]萬益群,毛雪金,鄢愛平.微波輔助提取-氣相色譜法同時測定中草藥中有機(jī)磷和氨基甲酸酯農(nóng)藥殘留[J].分析科學(xué)學(xué)報,2009,25(5):537-541

[4]高玲,楊元,王煉,等.氣相色譜-質(zhì)譜法同時測定水中7種氨基甲酸酯類殺蟲劑[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2005,15(6):713-714

[5]陳劍剛,趙倩鈴,連宗衍,等.高效液相色譜-質(zhì)譜法分析測定水中氨基甲酸酯[J].分析化學(xué),2005,33(8):1167-1170

[6]張帆,黃志強(qiáng),張瑩,等.高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定食品中20種氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留[J].色譜,2010,28(4):348-355

[7]楊民樂,薛園園,宋歡,等.高效液相色譜柱后衍生法測定栗子和松籽中氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量[J].食品工業(yè)科技,2010,31(6):330-332

[8]Kovalczuk T,Lacina O,Jech M.Novel approach to fast determination of multiple pesticide residues using ultra-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry(UPLC-MS/MS)[J].Food Additives&Contaminants,2008,25(4):444-457

[9]張昊,劉傳志,徐影,等.生物熒光傳感器檢測環(huán)境水樣中氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留[J].分析化學(xué),2014,42(1):104-108

[10]王曉朋,曾梅,萬德慧,等.化學(xué)發(fā)光生物傳感器法測定食品中有機(jī)磷與氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留[J].食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報,2014,5(12):4163-4171

[11]張?zhí)N,吳香倫,汪尤剛,等.磁分散固相萃取-氣相色譜法測定水中8種氨基甲酸酯類農(nóng)藥[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2016,26(11):1521-1523

[12]徐燕,王志強(qiáng),喬永青,等.自動固相萃取-氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測定果蔬中的多組分農(nóng)藥殘留[J].實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué),2017,24(1):117-119

[13]余宇成,方靈,蘇德森,等.氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定烏龍茶中5種氨基甲酸酯類農(nóng)藥[J].分析測試學(xué)報,2016,35(12):1586-1590

[14]孫衛(wèi)明,王權(quán)帥.氣相色譜-質(zhì)譜法同時測定生姜中15種有機(jī)氯及氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2014,24(5):647-649

[15]丁葵英,許文娟,孫軍,等.液相色譜-高分辨質(zhì)譜法快速篩查蔬菜中20種氨基甲酸酯類農(nóng)藥[J].食品研究與開發(fā),2015,36(17):123-128

[16]達(dá)晶,王鋼力,曹進(jìn),等.QuEChERS-液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定植物性食品中30種氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留[J].色譜,2015,33(8):830-837

[17]儲大可,李蓉,張朋杰,等.分散固相萃取-液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時測定果蔬中21種氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2015,25(8):1162-1165

[18]Jansson C,Pihlstrom T,Osterdahl BG,et al.A new multi-residue method for analysis of pesticide residues in fruit and vegetables using liquid chromatography with tandem mass spectrometric detection[J].J Chromatogr A,2004,1023(1):93-104

[19]盧敏萍,黃克建,周哲,等.在線固相萃取/液相色譜-線性離子阱質(zhì)譜法同時檢測生物樣品中18種氨基甲酸酯類農(nóng)藥[J].分析測試學(xué)報,2016,35(7):777-784

[20]付明磊,陳旭,周先麗,等.HPLC-MS法測定羅漢果中10種氨基甲酸酯類農(nóng)藥[J].食品研究與開發(fā),2016,37(16):133-136

[21]韓宇.高效液相色譜法測定白菜中7種氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留技術(shù)的優(yōu)化[J].浙江農(nóng)業(yè)科學(xué),2016,57(8):1284-1286

Determination of Carbamate Pesticides in Vegetables by High Performance Liquid Chromatography

WANGmin，LI Guang-yi，SONG Feng-jiang，WANG Zhong，GAO Hui，XING Yan*
（Zibo Center for Disease Control and Prevention，Zibo 255026，Shandong，China）

A method for the determination of 6 kinds of carbamate pesticides in vegetables by high performance liquid chromatography with post column derivatization was established.After ultrasonic extraction of the carbamate pesticides in the sample，CARB/NH2was extracted by acetonitrile and purified by solid phase extraction column，and then the quantitative analysis was carried out by high performance liquid chromatography and post column derivatization.The results showed that the concentration and the peak area presented a good linear relationship，with the linear correlation coefficient of 0.999 2-0.999 8.The recovery rate was between 79%and 91%，while the relative standard deviation（RSD）was 0.8%-4.9%，and the detection limit of the method was 0.002mg/kg-0.005mg/kg.

vegetables；carbamate pesticides；high performance liquid chromatography；post column derivatization

王敏，李廣益，宋豐江，等.高效液相色譜法測定蔬菜中氨基甲酸酯類農(nóng)藥[J].食品研究與開發(fā)，2018，39（1）：122-125

WANGmin，LI Guangyi，SONG Fengjiang，et al.Determination of Carbamate Pesticides in Vegetables by High Performance Liquid Chromatography[J].Food Research and Development，2018，39（1）：122-125

10.3969/j.issn.1005-6521.2018.01.024

山東省自然科學(xué)基金項(xiàng)目（ZR2015PH035）

王敏（1985—），女（漢），主管技師，碩士研究生，研究方向：食品和水質(zhì)檢測。

*通信作者：邢燕（1982—），女（漢），副主任技師，博士研究生，研究方向：食品和水質(zhì)檢測。

2017-05-23