母源抗體對(duì)豬瘟E2基因工程苗免疫效力的影響

何振華，顏 愛(ài)，熊小軍，楊鐵柱，李師師，李海輝*

（1．湖南永州雙牌縣動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，湖南 永州 4252002；湖南豬衛(wèi)士科技服務(wù)有限公司，湖南 長(zhǎng)沙 410128）

母源抗體對(duì)豬瘟E2基因工程苗免疫效力的影響

何振華1，顏 愛(ài)2，熊小軍2，楊鐵柱2，李師師2，李海輝2*

（1．湖南永州雙牌縣動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，湖南 永州 4252002；湖南豬衛(wèi)士科技服務(wù)有限公司，湖南 長(zhǎng)沙 410128）

通過(guò)臨床免疫效果的監(jiān)測(cè)，對(duì)比研究母源抗體對(duì)豬瘟兔化弱毒苗及E2基因工程苗免疫效力的干擾。結(jié)果表明，當(dāng)母源抗體平均阻斷率＞70%時(shí)，其對(duì)豬瘟兔化弱毒苗存在顯著干擾（免疫前、一免后、二免后平均阻斷率分別為86．6%、58．4%、67．3%），而對(duì)E2重組苗幾乎不干擾（免疫前、一免后、二免后平均阻斷率分別為86．1%、73．3%、81．4%）；在低水平母源抗體時(shí)（平均阻斷率＜40%），2種疫苗均能迅速刺激機(jī)體產(chǎn)生相應(yīng)的免疫應(yīng)答。本次研究結(jié)果表明E2基因工程苗既能產(chǎn)生較好的免疫應(yīng)答反應(yīng)同時(shí)又可對(duì)抗母源抗體的干擾。

豬瘟；E2基因工程苗；母源抗體

豬瘟（Classical Swine Fever，CSF）是由豬瘟病毒（CSFV）引起豬的一種世界性的高度接觸性傳染病，被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）列入OIE疾病名錄[1]。免疫接種是控制豬瘟流行的主要策略，弱毒疫苗如我國(guó)的C株對(duì)該病的防控發(fā)揮了積極作用，但單純依賴(lài)弱毒疫苗來(lái)消除CSF還有一定的困難，因?yàn)槠淙狈^(qū)分疫苗免疫及野毒感染的特征，且易受母源抗體干擾，因此，一種能區(qū)分疫苗株、野毒株，同時(shí)可抵抗母源抗體干擾的新型豬瘟苗有利于我國(guó)豬瘟的防控及凈化。近年來(lái)，新型疫苗研究顯示，DNA疫苗、重組基因苗、亞單位苗等具有抗母源抗體干擾的特征[2]。為了解天康生物制備的E2重組桿狀病毒試驗(yàn)滅活苗是否具有抗母源抗體干擾性能，本研究將該苗與兔化弱毒苗同時(shí)接種斷奶仔豬，對(duì)比監(jiān)測(cè)母源抗體對(duì)免疫的影響。

1 材料與方法

1.1 疫苗及主要試劑

豬瘟兔化弱毒疫苗（ST細(xì)胞源，購(gòu)自廣東某公司）；E2重組基因工程苗（由天康生物提供）；CSFV阻斷ELISA抗體檢測(cè)試劑盒（購(gòu)自IDEXX公司）。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)于2017年5月1日—7月10日在郴州某種豬場(chǎng)（A、B兩區(qū)）進(jìn)行，為期70 d。兩區(qū)各選斷奶仔豬300頭，均在35日齡進(jìn)行豬瘟第一次免疫，63日齡進(jìn)行二免，A區(qū)仔豬使用弱毒苗（簡(jiǎn)稱(chēng)弱毒組），B區(qū)仔豬使用E2重組基因工程苗（簡(jiǎn)稱(chēng)E2組）。試驗(yàn)豬的飼養(yǎng)管理及其他疫苗免疫均按本場(chǎng)程序進(jìn)行，保證正常的通風(fēng)和溫度、濕度。試驗(yàn)期間如有明顯疾病發(fā)生，如嚴(yán)重腹瀉、肢體傷殘、氣喘等，予以淘汰。

1.2.2 采血與檢測(cè)

每組在免疫前隨機(jī)抽取15頭進(jìn)行采血，并記錄耳號(hào)，隨后在二免前、二免后一個(gè)月對(duì)這些豬進(jìn)行采血，利用豬瘟阻斷ELISA抗體檢測(cè)試劑盒（包被抗原為E2蛋白）檢測(cè)豬瘟特異性抗體。

1.2.3 判定標(biāo)準(zhǔn)

豬瘟抗體ELISA檢測(cè)試驗(yàn)成立條件：陰性對(duì)照平均OD450＞0.50，陽(yáng)性對(duì)照阻斷率＞50%。判定標(biāo)準(zhǔn)：阻斷率＜30%為陰性，30%≤阻斷率≤40%為可疑，阻斷率＞40%為陽(yáng)性。

2 結(jié)果

試驗(yàn)仔豬均在35 d進(jìn)行豬瘟首次免疫，63 d進(jìn)行二免，在每次免疫前及二免后一個(gè)月收集血清進(jìn)行豬瘟抗體檢測(cè)，母源抗體對(duì)豬瘟兔化弱毒苗及E2基因工程苗的影響見(jiàn)表1及圖1。E2組有3頭跟蹤仔豬因疾病原因而淘汰。在免疫前，E2組母源抗體水平還維持較高水平（平均阻斷率69.3%，陽(yáng)性率83.3%），弱毒組半數(shù)轉(zhuǎn)陰（平均阻斷率為47.8%，陽(yáng)性率為53.3%）；一免后，E2組平均阻斷率稍有下降為65.6%，但全部轉(zhuǎn)陽(yáng)，而弱毒組平均阻斷率為48.6%，陽(yáng)性率為73.3%；二免后，兩組抗體水平均上升，平均阻斷率均在75%以上。

以阻斷率70%作為分界線，低于70%為中低水平，兩種苗在中低水平情況下均能很好的誘導(dǎo)抗體的產(chǎn)生（圖2）。在高抗體水平下（阻斷率＞70，圖3），母源抗體對(duì)弱毒苗的干擾很明顯，免疫前平均阻斷率為86.6%，一免后降為58.4%，二免后稍有回升但仍較低為67.3%，而對(duì)E2基因工程苗的干擾相對(duì)要小，免疫前平均阻斷率為86.1%，一免后稍有下降為73.3%，二免后回升至81.4%。數(shù)據(jù)表明，E2基因工程苗受母源抗體的干擾較小，可減少豬只的免疫空窗期。

3 分析與討論

母源抗體可以被動(dòng)保護(hù)仔豬免受微生物的感染，但同時(shí)也會(huì)干擾免疫接種后抗體的產(chǎn)生，因此，確定斷奶仔豬疫苗免疫的適當(dāng)日齡及制定合理科學(xué)的免疫程序非常關(guān)鍵。據(jù)報(bào)道，母源抗體的半衰期為14 d，豬場(chǎng)常憑經(jīng)驗(yàn)將首免時(shí)間定在20日齡左右[3]，但這種免疫方法并不能有效消除母源抗體的干擾，從該研究的數(shù)據(jù)也可反映這一點(diǎn)，不同區(qū)不同批次的仔豬母源抗體水平參差不齊，雖然A區(qū)整體水平已到達(dá)免疫的臨界點(diǎn)（平均阻斷率47.8%，陽(yáng)性率53.3%），但抗體水平分布屬于兩端，在35日齡時(shí)，部分豬（阻斷率＜40%）已屬于免疫空窗期，一免后，保護(hù)率并沒(méi)有很快上升，直到二免后，抗體水平才上升（平均阻斷率86.6%）（圖2），而另一部分高水平的母源抗體直接抑制了疫苗的效果，甚至干擾到二免的效應(yīng)（免疫前、一免后、二免后的阻斷率分別為86.6%、58.4%、67.3%）（圖3），因此這也解釋了目前保育、育肥豬群豬瘟抗體水平低下的一個(gè)原因。

表1 母源抗體對(duì)豬瘟兔化弱毒苗及E2基因工程苗的影響

圖1 母源抗體對(duì)豬瘟兔化弱毒苗及E2基因工程苗的影響

圖2 兩種疫苗對(duì)免疫前中低抗體的影響

圖3 兩種疫苗對(duì)免疫前高抗體的影響

E2包膜糖蛋白是豬瘟病毒的主要保護(hù)性抗原，在CSFV感染時(shí)誘導(dǎo)中和抗體的產(chǎn)生，E2蛋白已被證明是一個(gè)有效的免疫原，有研究顯示該蛋白重組疫苗可抵抗母源抗體的干擾[4]。該研究結(jié)果也表明了這點(diǎn)，免疫前陰性豬在第一次接種E2重組苗后，全部轉(zhuǎn)陽(yáng)（圖2），而在高水平的母源抗體條件下，E2重組疫苗并未受到較大干擾（免疫前、一免、二免后的阻斷率分別為86.1%、73.3%、81.4%）（圖3）。

2017年農(nóng)業(yè)部出臺(tái)了《國(guó)家豬瘟防治指導(dǎo)意見(jiàn)（2017-2020）》，對(duì)豬瘟防控提出了新的要求，2020年底全國(guó)所有豬場(chǎng)和部分區(qū)域達(dá)到豬瘟凈化標(biāo)準(zhǔn)，并進(jìn)一步擴(kuò)大豬瘟凈化區(qū)域范圍。而現(xiàn)在使用的兔化弱毒苗并不具備區(qū)分自然感染與疫苗接種的特征，所以安全、高效具有標(biāo)記的新型豬瘟疫苗是未來(lái)實(shí)現(xiàn)豬瘟凈化的關(guān)鍵。E2重組疫苗是最具潛力的，目前在歐洲，重組E2蛋白亞單位疫苗已經(jīng)商業(yè)化，如默沙東動(dòng)物保健公司生產(chǎn)的Porcilis?Pesti，用該疫苗接種，結(jié)合瑞士Prionics公司的豬瘟Eens抗體檢測(cè)試劑盒，用于豬瘟的凈化[5]。在國(guó)內(nèi)，E2疫苗還處在試驗(yàn)階段。該研究的數(shù)據(jù)表明E2基因工程苗既能產(chǎn)生較好的免疫應(yīng)答反應(yīng)同時(shí)又可對(duì)抗母源抗體的干擾，為E2新型苗的研究提供參考依據(jù)。

[1] MOENNING V. introduction to classical swine fever： virus，disease and control policy [J]. Vet Microbiol， 2000， 73(2-3)：93-102.

[2] 孔慶波. 抗母源抗體干擾的病毒疫苗[J]. 動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2003，24(4)：12-15.

[3] 張新成，李官兵，史子學(xué). 豬瘟母源抗體在仔豬體內(nèi)持續(xù)時(shí)間的研究[J]. 養(yǎng)豬，2008(1)：46-48.

[4] 雷建林，杜明亮，孫元，等. 母源抗體對(duì)腺病毒/甲病毒復(fù)制子嵌合載體豬瘟疫苗rAdV-SFV-E2免疫效力的影響[J]. 中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2016，38(6)：484-488.

[5] BIOME S， STAUBACH C， HENKE J， et al. Classical swine fever-an update review[J]. Virus， 2017，9(4)：169-178.

2017-09-20）