豬鏈球菌與多殺性巴氏桿菌混合感染的診治分析

盧建洲，蔣增海，鄧同煒，霍元楠，王宇坤

（1．河南牧業經濟學院，動物醫學院，河南 鄭州 450046；2．河南省豬病防控工程技術研究中心，河南 鄭州 450046）

豬鏈球菌與多殺性巴氏桿菌混合感染的診治分析

盧建洲，蔣增海*，鄧同煒，霍元楠，王宇坤

（1．河南牧業經濟學院，動物醫學院，河南 鄭州 450046；2．河南省豬病防控工程技術研究中心，河南 鄭州 450046）

豬鏈球菌病是由多種不同血清群（C、D、E、L群）的鏈球菌引起的不同臨診傳染病的總稱，臨床上主要是以淋巴結膿腫、腦膜炎、關節炎以及敗血癥為主要特征，其中，豬鏈球菌是世界范圍內引起豬鏈球菌病最主要的病原，該菌可引起豬腦膜炎和敗血癥等癥狀，并能通過黏膜或者傷口等傳播途徑感染人[1]。豬是多殺性巴氏桿菌的易感動物之一，豬群中流行的多殺性巴氏桿菌血清型多為A型和D型，主要引發豬肺疫和豬進行性萎縮性鼻炎[2]。近年來，豬鏈球菌與多殺性巴氏桿菌混合感染病例報道較少[3-4]。2017年2月下旬，河南濮陽某800頭基礎母豬規模化場，保育后期、育肥前期的豬群陸續發病，送來我單位診斷，筆者通過臨床綜合診斷和實驗室診斷，確診為豬鏈球菌與多殺性巴氏桿菌混合感染，現將報道如下。

1 臨床癥狀

該豬場存欄保育后期、育肥前期的豬群約1 500余頭，50～120日齡，從2月上旬，相繼陸續發病，表現為精神沉郁，食欲減退，體溫升高為41～42 ℃，眼結膜潮紅，腹式呼吸，喘氣，四肢無力，趴臥地面，耳廓、腹部、四肢皮膚有紫紅色出血斑塊（圖1）；有的豬晚上發病、早上死亡，口鼻流出血樣泡沫；有的關節腫大、跛行；有的保育仔豬頭頸歪斜，共濟失調，走路搖晃，病程長的保育仔豬嚴重消瘦。整個豬場自發病以后，發病率約為40%，死亡率約為15%，使用氟苯尼考、替米考星、強力霉素等，療效不明顯。

2 剖解病理變化

腹股溝淋巴結腫大（圖1），頜下淋巴結腫大；心包積液（圖2），心包液內有少量的纖維性物質；有的豬心外膜有大量纖維素物質包裹，呈絨毛心；氣管內有大量出血泡沫液體；肺臟出血，呈紫紅色，有肉變區，有的豬肺氣腫，切面流出泡沫樣液體；有的豬腎臟針尖狀出血點；關節積液增多，內有纖維絮狀物。

3 實驗室診斷

3.1 主要試劑

TSA（胰蛋白大豆瓊脂）、TSB（胰蛋白大豆肉湯）購自美國BD（Becton，Dickinson and Company） 公司；TSA平板、TSB肉湯配制時，分別添加煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD）終濃度為10 mg/L和犢牛血清（終濃度50 mL/L)；2×Taq PCR MasterMix/with dye購自加拿大ABM公司；Marker 2000等購自寶生物工程（大連)有限公司；藥敏片購自杭州濱和微生物試劑有限公司。

3.2 引物與合成

豬鏈球菌特異性擴增引物，參照文 獻[5]，P1 ：GCAGCGTATTCTGTCAAACG，P2：CCATGGACAGATAAAGATGG，預期擴增片段大小為689 bp；多殺性巴氏桿菌特異性擴增引物，參照文獻[6]，P1：5′ -ATCCGCTATTTACCCAGTGG-3′，P2：5 ′ -GCTGTAAACGAACTCGCCAC-3′，預期擴增片段大小為457 bp，均由上海生工生物工程技術服務有限公司合成。

3.3 分離、培養

無菌采集患豬肺臟，引火自燃消毒肺臟表明，使用滅菌剪刀與鑷子，剪去肺臟表面，采集深部肺臟組織，涂抹于TSA平板（添加有NAD，犢牛血清），37 ℃培養24～48 h，生長出一種白色、半透明、圓形菌落，約為0.5～1 mm；另外一種淡淺色、圓形、濕潤菌落，大小約為1～1.5 mm，進一步將兩株菌落接種于TSA平板（添加有NAD，犢牛血清）純化、傳代。

3.4 染色、鏡檢

無菌采集病變部位的肺臟組織，染色后，觀察到疑似兩種細菌，一種為革蘭氏陽性、單個或短鏈球菌，另外一種為革蘭氏陰性短桿菌或個別稍長桿菌（圖3）。將分離、純化的可疑菌，染色、鏡檢，觀察到一種為革蘭氏陽性、鏈狀排列的球菌，疑似豬鏈球菌（圖4）；另外一種為革蘭氏陰性、卵圓性的短小桿菌，疑似為多殺性巴氏桿菌（圖5）。

3.5 PCR鑒定

根據參考文獻[5-6]，利用PCR方法，擴增疑似為豬鏈球菌、多殺性巴氏桿菌的特異性片段，結果顯示擴增出豬鏈球菌689 bp 特異性片段、多殺性巴氏桿菌457 bp片段，與預期一致（圖6），表明分離兩種細菌為豬鏈球菌和多殺性巴氏桿菌。

3.6 藥敏試驗

選擇18種藥物，采用紙片擴散法，測定分離的豬鏈球菌和多殺性巴氏桿菌藥物敏感性，其結果見表1。結果表明豬鏈球菌和多殺性巴氏桿菌對氨芐西林、阿莫西林、青霉素、恩諾沙星、環丙殺沙星菌等敏感，因此，建議該養殖戶，針對發病嚴重豬只，使用氨芐西林、青霉素、或者恩諾沙星單獨，或者聯合注射治療，同時使用阿莫西林拌料，適當加大用藥劑量，連用5～7 d。治療效果明顯，1周后，該豬場疫情平息。

圖1 腹部皮膚出血和腹股溝淋巴結出血

圖2 心包積液

圖3 肺膈葉病料中疑似鏈球菌、巴氏桿菌（革蘭氏染色）

圖4 分離鏈球菌（革蘭氏染色）

圖5 分離多殺性巴氏桿菌（革蘭氏染色）

圖6 分離細菌PCR鑒定結果

表1 分離豬鏈球菌、多殺性巴氏桿菌對各種藥物的抑菌圈

4 分析與討論

通過臨床癥狀與病變，容易診斷為急性傳染性胸膜肺炎，因此筆者采用TSA平板（加有NAD、犢牛血清）分離發病豬群感染的病原，是為了判斷能否分離到傳染性胸膜肺炎放線桿菌，及副豬嗜血桿菌（該培養基，能夠適合這兩種菌的生長）。實驗結果顯示分離到的兩種細菌分別為豬鏈球菌和多殺性巴氏桿菌，結合臨床癥狀和病理變化，最終確診為豬鏈球菌與多殺性巴氏桿菌混合感染，混合感染時，病情更加復雜，增加診斷難度，必須依靠實驗室檢測才能確診。

根據養殖戶反映，使用氟苯尼考、替米考星、強力霉素等藥物，療效不佳，筆者推測豬群感染耐藥性菌株所致。因此，分離豬鏈球菌和多殺性巴氏桿菌，進行藥物敏感試驗，結果顯示，氨芐西林、阿莫西林、青霉素、恩諾沙星、環丙沙星等藥物敏感，最后，根據藥敏試驗結果，使用氨芐西林、青霉素、或者恩諾沙星聯合注射治療，阿莫西林拌料給藥，適當加大劑量，療效明顯。獸醫臨床中，由于濫用藥物，耐藥性問題相當嚴重，分離病原菌、進行藥敏試驗，對于正確指導用藥十分重要。

[1] 陳溥言.獸醫傳染病學[M].6版.北京：中國農業出版社， 2015：156-157.

[2] 彭忠， 王庚， 吳廣敬， 等. 豬源多殺性巴氏桿菌的分離與鑒定[J]. 中國獸醫科學 ， 2015， 45(9)： 943-951.

[3] 吳柯青. 豬鏈球菌病與豬多殺性巴氏桿菌病混合感染的診治[J]. 福建畜牧獸醫 ， 2010， 32(6)： 73.

[4] 婁欣建. 一例母豬豬肺疫與鏈球菌病混合感染的診治[J]. 養殖技術顧問，2012(3)： 186.

[5] OKUMABUA O，O’ CONNOR M，SHULL E. A polymerase chain reaction(PCR)assay specific for Streptococcus suis based on the gene encoding the glutamate dehydrogenase[J].FEMS Microbiol Lett，2003，218(1)：79-84.

[6] 唐先春， 吳斌， 陳煥春. 豬多殺性巴氏桿菌 PCR 檢測方法的建立及其應用[J]. 中國獸醫科技 ，2004， 34(2)： 46-48.

河南牧業經濟學院預防獸醫學重點學科建設項目（項目編號：MXK2016102）；

盧建洲（1963-），男，河南鞏義人，主要從事豬病臨床診斷與防治研究；

*通訊作者：蔣增海（1976-），男，四川簡陽人，講師，在職博士，主要從事豬病原微生物研究。E-mail：50242328@qq.com。

2017-09-20)