正交法優(yōu)選香附的醋炙工藝

摘 要：目的：優(yōu)選香附的醋炙工藝。方法：對(duì)同一批香附藥材，使用揮發(fā)油提取法提取揮發(fā)油定量，以及使用薄層色譜法鑒別香附中的α-香附酮定性，并對(duì)薄層色譜圖中α-香附酮所展開的斑點(diǎn)打分（對(duì)照品在薄層板上的點(diǎn)樣量均為2uL，供試品在薄層板上的點(diǎn)樣量均為5uL）作為內(nèi)在指標(biāo)，同時(shí)以醋炙香附的性狀、外觀作為外在指標(biāo)，采用L9（33）正交試驗(yàn)法，考察醋炙香附的悶潤(rùn)時(shí)間、炒制溫度、炒制時(shí)間，使用醋炙香附中揮發(fā)油的量和薄層色譜圖中α-香附酮所展開斑點(diǎn)的分?jǐn)?shù)加權(quán)評(píng)分作為依據(jù)，優(yōu)選出香附的最佳醋炙工藝，對(duì)香附的最佳醋炙工藝進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，最終對(duì)篩選出的最佳香附醋炙工藝，使用車間電加熱炒藥機(jī)進(jìn)行穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)，判斷此次實(shí)驗(yàn)?zāi)芊裼糜谲囬g大生產(chǎn)，結(jié)果表明此次實(shí)驗(yàn)可以對(duì)車間醋炙香附的實(shí)際生產(chǎn)提供指導(dǎo)依據(jù)。結(jié)果：優(yōu)選出香附的最佳醋炙工藝為：悶潤(rùn)時(shí)間為2h；炒制溫度為100℃；炒制時(shí)間為15min。結(jié)論：穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)表明優(yōu)選出的香附醋炙工藝穩(wěn)定可行，對(duì)實(shí)現(xiàn)香附醋炙的大批量生產(chǎn)及其質(zhì)量控制提供指導(dǎo)依據(jù)。

關(guān)鍵詞：正交試驗(yàn)；香附；醋炙工藝；揮發(fā)油；α-香附酮；薄層色譜法

中圖分類號(hào)：R283.3 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1004-7344（2018）17-0342-03

香附為莎草科植物莎草Cyperus rotundus L.的干燥根莖。秋季采挖，燎去毛須，置沸水中略煮或蒸透后曬干，或燎后直接曬干[1]。香附中含葡萄糖8.3～9.1%、果糖1.0～1.7%、淀粉40～41.1%、揮發(fā)油0.65～1.4%[3]。香附中主要含有揮發(fā)油，油中主要成分為α-香附酮、β-香附酮、芹子烯、廣藿香酮。此外，還有黃酮類和萜類化合物等。香附醋炙后，總揮發(fā)油含量比生香附降低35%左右。醋炙后的香附專入肝經(jīng)，舒肝止痛作用增強(qiáng)，并能消積化滯[4]。《中華人民共和國(guó)藥典》一部附錄ⅡD醋炙通則醋炙法規(guī)定中并沒有對(duì)醋炙香附的悶潤(rùn)時(shí)間、炒制溫度、炒制時(shí)間等作相關(guān)的規(guī)定，在目前的實(shí)際生產(chǎn)中操作工主要以香附醋炙后的外觀性狀，結(jié)合自身的經(jīng)驗(yàn)來判斷，存在個(gè)人誤差，難以標(biāo)準(zhǔn)化。本實(shí)驗(yàn)采用香附中揮發(fā)油的含量，以及薄層色譜法定性醋炙香附中α-香附酮作為內(nèi)在指標(biāo)，綜合加權(quán)評(píng)分，并以醋炙香附的外觀性狀為外在指標(biāo)，結(jié)合正交試驗(yàn)法對(duì)香附的醋炙工藝進(jìn)行研究，優(yōu)選香附醋炙的最佳炮制工藝。

1 實(shí)驗(yàn)儀器與實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器

CY-700電熱炒藥機(jī)（周口制藥機(jī)械有限公司）；美的多功能電磁爐（廣東美的生活電器制造有限公司）；600g搖擺式高速萬能粉碎機(jī)（溫嶺市林大機(jī)械有限公司）；雙杰牌系列電子天平（美國(guó)雙杰集團(tuán)有限公司、常熟市雙杰測(cè)試儀器廠，型號(hào)：JJ5000 5000g/0.1g）；DETW調(diào)溫電熱套（北京市永光明醫(yī)療儀器廠）；ZF-I三用紫外分析儀；玻璃點(diǎn)樣毛細(xì)管（華西醫(yī)科大學(xué)儀器廠）；硅膠GF254薄層板）；揮發(fā)油提取器（；回流冷凝管；玻璃噴霧瓶；1000mL圓底燒瓶，50mL錐形瓶。

1.2 實(shí)驗(yàn)材料

米醋（昆明拓東調(diào)味食品有限公司，批號(hào)：1509015）；香附（昆明中藥廠有限公司原料庫提供，批號(hào)：515-799-804）；α-香附酮對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110748-200608）；蒸餾水；硅膠（青島鼎康硅膠有限公司）；乙醚（重慶川東化工有限公司，批號(hào)：20141101）；二氯甲烷（重慶川東化工有限公司，批號(hào)：20130901）；乙酸乙酯（重慶川東化工有限公司，批號(hào)：20150201）；冰醋酸（重慶川東化工有限公司，批號(hào)：20111201）；二硝基苯肼試液，批號(hào)：20150924）；消泡劑。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)

2.1.1 香附醋炙正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)

通過對(duì)炒藥機(jī)性能、車間生產(chǎn)環(huán)境、目前國(guó)內(nèi)的研究及現(xiàn)版《中華人民共和國(guó)藥典》中香附醋炙方法的考察，最終選取悶潤(rùn)時(shí)間（A）、炒制時(shí)間（B）、炒制溫度（C）作為考察因素，每個(gè)因素設(shè)計(jì)與之相應(yīng)的三個(gè)水平，設(shè)計(jì)因素水平表見表1，正交表安排及試驗(yàn)結(jié)果見表2。

2.1.2 樣品的制備

取同一批香附20kg，除去其中的雜質(zhì)及非藥用部位，如砂石、碎屑等，取除去雜質(zhì)后的凈香附9kg混合均勻，平均分為9份，每份1kg；取米醋（昆明拓東醋，酸總量以乙酸計(jì)≧3.50g/100mL）1.8kg，每份香附使用米醋20%，將米醋與香附拌勻后，9組香附藥材按照正交試驗(yàn)表的安排置于電磁爐中進(jìn)行醋炙。香附醋炙的具體方法：取凈香附，加米醋（20%量）拌勻，按照正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)表中的悶潤(rùn)時(shí)間悶透，置鍋內(nèi)按照正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)表中的炒制溫度及炒制時(shí)間炒制，按照2010版《中華人民共和國(guó)藥典》一部附錄ⅡD炒至香附表面黑褐色。微有醋香氣，味微苦。取出，放涼，篩去碎屑，按照四分法取樣法取樣，每份樣品取樣110g，裝入取樣袋中，并貼上標(biāo)簽。醋炙后的香附樣品分別用600g搖擺式高速萬能粉碎機(jī)粉碎使能通過二號(hào)至三號(hào)篩，并混合均勻。即得1～9號(hào)樣品。

2.1.3 樣品中揮發(fā)油的提取

按照2010版《中華人民共和國(guó)藥典》附錄XD揮發(fā)油提取法測(cè)定，分別稱取50g醋炙香附樣品，放入圓底燒瓶中，加入適量沸石及消泡劑，及適量蒸餾水，振搖混合后，把圓底燒瓶放入電熱套中，連接揮發(fā)油測(cè)定器與回流冷凝管，自冷凝管上端加入蒸餾水使充滿揮發(fā)油測(cè)定器的刻度部分，并溢流入圓底燒瓶為止。緩緩加熱至沸，并保持微沸5h，至測(cè)定器中揮發(fā)油量不再增加，停止加熱，放置片刻，開啟測(cè)定器下端的活塞，將水緩緩放出，至油層上端到達(dá)刻度0線上面5mm為止放置1h以上，在開啟活賽使油層下降到其上端恰與0刻度線平齊，讀取揮發(fā)油量，并計(jì)算揮發(fā)油的含量（%）。

2.1.4 薄層色譜法鑒別醋炙香附中的α-香附酮

按照2010版《中華人民共和國(guó)藥典》一部，取香附樣品1g，加乙醚5mL，放置1h，時(shí)時(shí)振搖，濾過，濾液揮干，殘?jiān)右宜嵋阴?.5mL使溶解，作為供試品溶液，另取α-香附酮對(duì)照品，加乙酸乙酯制成每1mL含1mg的溶液作為對(duì)照品溶液，照2010版《中華人民共和國(guó)藥典》薄層色譜法附錄ⅥB試驗(yàn)，吸取對(duì)照品溶液2uL，供試品溶液5uL，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以二氯甲烷-乙酸乙酯-冰醋酸（80：1：1）為展開劑，展開，（置254nm紫外燈下視檢），供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同的深藍(lán)色斑點(diǎn)；噴以二硝基苯肼試液，放置片刻，斑點(diǎn)漸變?yōu)槌燃t色。所得的薄層色譜圖見圖1。

表2以醋炙香附中所含揮發(fā)油的量和薄層色譜圖中α-香附酮所展開斑點(diǎn)的分?jǐn)?shù)加權(quán)評(píng)分為指標(biāo)，優(yōu)選香附的醋炙工藝，由于香附中的主要成分為揮發(fā)油，在醋炙過程中揮發(fā)油的含量會(huì)明顯減少，揮發(fā)油中的主要成分為α-香附酮，在炮制過程中α-香附酮的含量減少，應(yīng)用加權(quán)評(píng)分法處理數(shù)據(jù)，加權(quán)評(píng)分=揮發(fā)油含量×60%+α-香附酮所展開斑點(diǎn)所得分?jǐn)?shù)×40%，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2。

2.1.5 實(shí)驗(yàn)結(jié)論（以醋炙香附中揮發(fā)油含量及薄層色譜圖中α-香附酮所展開的斑點(diǎn)為指標(biāo)）

由表2數(shù)據(jù)分析可知，各因素對(duì)醋炙香附中揮發(fā)油含量以及α-香附酮所展開斑點(diǎn)的情況的影響依次為B>A>C。由表3方差分析可知炒制時(shí)間對(duì)香附醋炙的工藝影響最大，綜合分析香附的最佳醋炙工藝為A3B3C1，即悶潤(rùn)時(shí)間為2h，炒制時(shí)間為15min，炒制溫度為100℃。

2.2 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)

2.2.1 實(shí)驗(yàn)方法

按照優(yōu)選出的工藝，安排6次實(shí)驗(yàn)，使用同一批揀選后的凈香附6kg，分為6份，每份1kg，取同一批米醋（昆明拓東醋，酸總量以乙酸計(jì)≧3.50g/100mL）1.2kg，每份香附使用米醋20%，根據(jù)表4優(yōu)選工藝的實(shí)驗(yàn)安排及“2.1.2”項(xiàng)下方法進(jìn)行香附樣品的制備，以“2.1.3”項(xiàng)下方法提取香附醋炙樣品中的揮發(fā)油，以“2.1.4”項(xiàng)下方法鑒別醋炙香附中α-香附酮所展開斑點(diǎn)的情況，所得薄層色譜圖譜見圖2。

2.2.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)論

由表4數(shù)據(jù)分析及圖2中α-香附酮所展開斑點(diǎn)的情況可知，以揮發(fā)油的含量為指標(biāo)優(yōu)選出的工藝：A3B3C1，即悶潤(rùn)時(shí)間為2h，炒制時(shí)間為15min，炒制溫度為100℃，實(shí)驗(yàn)中1～6號(hào)樣品中揮發(fā)油的量為1.0～1.2%，均值為1.06%，且在同一薄層板及相同的點(diǎn)樣量下α-香附酮所展開的斑點(diǎn)清晰明確，綜合分析得到此工藝為香附的最佳醋炙工藝。

2.3 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

2.3.1 實(shí)驗(yàn)方法

由于優(yōu)選的香附的最佳醋炙工藝未包含在正交表安排的9次實(shí)驗(yàn)中，及上述實(shí)驗(yàn)所使用的香附均為同一批，所以安排此次穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)，用于驗(yàn)證此次工藝是否可以用于車間的大生產(chǎn)，使用三批揀選后的凈香附，每批15kg，共45kg，取同一批米醋（昆明拓東醋，酸總量以乙酸計(jì)≧3.50g/100mL）9kg，每份香附使用米醋20%，根據(jù)優(yōu)選出的最佳醋炙工藝，悶潤(rùn)2h，炒制15min，炒制溫度100℃，放入電加熱炒藥機(jī)中進(jìn)行炮制，按照“2.1.2”項(xiàng)下方法進(jìn)行香附醋炙樣品的制備，以“2.1.3”項(xiàng)下方法提取香附醋炙樣品中的揮發(fā)油，以“2.1.4”項(xiàng)下方法鑒別醋炙香附揮發(fā)油中的主要成分α-香附酮所展開斑點(diǎn)的情況，所得薄層色譜圖見圖3，所含揮發(fā)油量及使用電加熱炒藥機(jī)醋炙后香附的性狀見表5。

2.3.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)論

從表5醋炙香附中所含的揮發(fā)油的量及圖3中醋炙后香附中α-香附酮所展開的斑點(diǎn)可知，按照優(yōu)選出的最佳醋炙工藝投入電加熱炒藥機(jī)中進(jìn)行炮制，所得的醋炙香附樣品中揮發(fā)油含量在1.0～1.1%，RSD為5.41%，醋炙后香附中揮發(fā)油的含量≧0.8%，符合2010版《中華人民共和國(guó)藥典》一部中關(guān)于醋炙香附的規(guī)定，薄層色譜圖中α-香附酮所展開斑點(diǎn)的情況較好，電加熱炒藥機(jī)醋炙后的香附表面黑褐色，比起原藥材更有光澤，所得實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明使用正交法優(yōu)選出的香附醋炙工藝具有良好的穩(wěn)定性，對(duì)大生產(chǎn)有一定的指導(dǎo)意義及質(zhì)量控制。

3 小 結(jié)

香附始載于《名醫(yī)別錄》，用藥歷史悠久，在臨床上的應(yīng)用廣泛，被歷代醫(yī)家譽(yù)為“乃氣病之總司，女科之主帥”[6]。同時(shí)炮制方法多樣，炮制后能達(dá)到某些特殊的功效，2010版《中華人民共和國(guó)藥典》一部中收載香附和醋炙香附，醋炙后香附的解痙、鎮(zhèn)痛作用優(yōu)于生品，疏肝止痛作用增強(qiáng)，藥理作用增加，目前對(duì)醋炙香附的用藥需求大，多個(gè)中成藥配方中都以醋炙香附作為主藥。香附的主要有效成分為α-香附酮，在醋炙香附的過程中，香附藥材受高溫長(zhǎng)時(shí)間炒制，有效成分遭到一定的破壞，導(dǎo)致α-香附酮的含量降低[9]。但現(xiàn)版《中華人民共和國(guó)藥典》對(duì)醋炙香附的悶潤(rùn)時(shí)間、炒制時(shí)間、炒制溫度等并沒有做明確的規(guī)定，主要以操作工的經(jīng)驗(yàn)來判斷醋炙的程度，此次實(shí)驗(yàn)使用醋炙香附中揮發(fā)油的含量以及運(yùn)用薄層色譜法對(duì)揮發(fā)油中的主要成分α-香附酮定性，采用正交試驗(yàn)法優(yōu)選出香附的最佳醋炙工藝，通過驗(yàn)證試驗(yàn)，以及使用車間電加熱炒藥機(jī)進(jìn)行穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明炒制時(shí)間對(duì)香附的醋炙工藝影響顯著，由穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)可知此次實(shí)驗(yàn)方法穩(wěn)定可行，對(duì)規(guī)范車間大批量生產(chǎn)醋炙香附，香附的醋炙工藝及醋炙香附的質(zhì)量控制等提供指導(dǎo)依據(jù)。

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收稿日期：2018-5-15

作者簡(jiǎn)介：薛安平（1983-），男，漢族，云南昆明人，工程師，本科，主要從事制藥工藝研究工作。