豬肉中3種β—受體激動(dòng)劑殘留檢測(cè)新技術(shù)試驗(yàn)方案

[摘 要] β-受體激動(dòng)劑因較強(qiáng)的毒性及易被濫用等特點(diǎn)一直備受關(guān)注。目前的分析方法中液相色譜-質(zhì)譜法特異性強(qiáng)、靈敏度高，是β-受體激動(dòng)劑殘留檢測(cè)最主要的技術(shù)手段，但樣品處理程序較為復(fù)雜，費(fèi)時(shí)費(fèi)力。本文在已有方法的基礎(chǔ)上，簡化樣品前處理步驟，采用MCX柱固相萃取和超高壓液相色譜-串聯(lián)四級(jí)桿質(zhì)譜技術(shù)建立豬肉中沙丁胺醇、萊克多巴胺、克倫特羅3種β-受體激動(dòng)劑單個(gè)或混合物殘留量的定性確證和定量測(cè)定，縮短樣品前處理耗時(shí)，增加樣品前處理批次，減少試劑耗材成本，極大地提高了工作效率。

[關(guān)鍵詞] 豬肉；β-受體激動(dòng)劑；回收率；重復(fù)性；準(zhǔn)確度；靈敏度

[中圖分類號(hào)] TS251.7 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-7909（2017）25-64-2

1 試劑與儀器

1.1 試劑

沙丁胺醇、萊克多巴胺、克侖特羅對(duì)照品，純度均大于98.0%；濃鹽酸，分析純；無水碳酸鈉，分析純；乙酸乙酯；甲醇，色譜純；乙腈，色譜純；0.1 mol/L鹽酸溶液，10%碳酸鈉溶液，5%氨水甲醇溶液，甲醇-0.1%甲酸溶液（5+95，V/V）；標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，0.1 mg/mL；混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，20 ng/mL。

1.2 儀器和設(shè)備

超高效液相色譜儀-串聯(lián)質(zhì)譜儀（ACQUITY UPLC-Xevo TQ-S美國Waters公司）；天平，感量0.01 g[BT2202S賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司]；分析天平，感量0.000 01 g[CP225D賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司]；渦旋混合器（VX-Ⅲ踏錦科技）；高速離心機(jī)（3-30K德國Sigma公司）；固相萃取裝置（美國Waters公司）；Oasis MCX固相萃取柱（60 mg/3cc）；氮吹儀（HSC-24A天津市恒奧科技發(fā)展有限公司）。

2 測(cè)定方法

2.1 公告方法

農(nóng)業(yè)部1025-18-2008號(hào)公告方法中，陽性添加樣品經(jīng)酶解后高氯酸、氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值，當(dāng)取樣量為2 g時(shí)，沙丁胺醇、萊克多巴胺、克侖特羅在豬肉中的檢測(cè)限為0.25 μg/kg，定量限為0.50 μg/kg。加標(biāo)濃度為0.50、1.00、2.50 μg/kg時(shí)，豬肉中3種β-受體激動(dòng)劑類藥物（克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇）的平均回收率為80%～115%。3種目標(biāo)藥物的回收率見表1。

2.2 改進(jìn)方法

取均質(zhì)的供試料品（2.00±0.02） g，作為空白試料（陰性對(duì)照）；取均質(zhì)的供試料品（2.00±0.02） g，添加混合標(biāo)準(zhǔn)工作液得到0.50、1.00、2.50 μg/kg的空白添加試樣（陽性對(duì)照）。

3 結(jié)果與分析

經(jīng)試驗(yàn)證明，本方法達(dá)到了以下目的。

3.1 重復(fù)性

將1.00 μg/kg的3種激動(dòng)劑（克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇）標(biāo)準(zhǔn)溶液混合液重復(fù)進(jìn)樣7次。試驗(yàn)結(jié)果為保留時(shí)間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.21%、0.18%、0.61%，峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.6%、2.4%、0.4%。

3.2 準(zhǔn)確度

本方法中在0.50、1.00、2.50、3.75 μg/kg添加濃度，用空白添加標(biāo)準(zhǔn)校正，其回收率范圍達(dá)到85%～112%，與1025-18-2008號(hào)公告規(guī)定的回收率一致。回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差見表2。

3.3 靈敏度

本方法當(dāng)取樣量為2 g時(shí)，沙丁胺醇、萊克多巴胺、克侖特羅在豬肉中的檢測(cè)限為0.25 μg/kg，定量限為0.50 μg/kg，與1025-18-2008號(hào)公告的靈敏度一致。

此外，縮短至少16 h的樣品前處理時(shí)間。

4 結(jié)論

1025-18-2008號(hào)公告中樣品前處理步驟需在樣品中加入β-鹽酸葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶，于37 ℃下避光水浴振蕩約16 h后，用高氯酸、NaOH調(diào)節(jié)pH值。本方法樣品前處理時(shí)省略酶解步驟，提取前向樣品中加碳酸鈉溶液，乙酸乙酯提取2次后經(jīng)凈化濃縮等步驟完成前處理。當(dāng)稱樣量為2 g時(shí)，沙丁胺醇、萊克多巴胺、克侖特羅在豬肉中的檢測(cè)限為0.25 μg/kg，定量限為0.50 μg/kg。加標(biāo)濃度為0.50、1.00、2.50 μg/kg時(shí)，豬肉中3種β-受體激動(dòng)劑類藥物的平均回收率為88.3%～105.1%，滿足國際上動(dòng)物性食品中獸藥殘留檢測(cè)的要求。以上證明本方法簡便快速、靈敏度高、耗材成本低，對(duì)豬肉制品的監(jiān)管和保障食品安全具有重要意義。

5 經(jīng)濟(jì)效益與社會(huì)效益

1025號(hào)公告-18-2008方法中使用的β-鹽酸葡糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶市場(chǎng)價(jià)格為850元/mL，高氯酸為120元/L，叔丁基甲醚為44元/L，折算到每個(gè)樣品上的成本比本方法至少高30～60元，再加上其他試劑耗材成本及儀器設(shè)備使用維護(hù)成本，按照一年做100批次樣品計(jì)算，本方法可每年節(jié)省費(fèi)用0.8萬～1.0萬元。同時(shí)，本方法可加大樣品前處理數(shù)量，縮短檢測(cè)時(shí)間，為加大對(duì)豬肉制品的監(jiān)管力度和保障食品安全帶來了不可估量的社會(huì)效益。