植物病原菌快速檢測技術(shù)方法

[摘 要] 本文開展對比試驗研究環(huán)介導(dǎo)等溫擴增（LAMP）對于植物病原菌的快速定量檢測效果，結(jié)果表明LAMP體系能夠準(zhǔn)確、快速地檢測出植物病原菌，可以在田間或其他現(xiàn)場推廣應(yīng)用。

[關(guān)鍵詞] 植物病害；病原菌；快速檢測技術(shù)

[中圖分類號] S432.4 [文獻標(biāo)識碼] A [文章編號] 1674-7909（2017）29-64-1

植物病害是限制農(nóng)作物產(chǎn)量和品質(zhì)的主要因素之一。在農(nóng)作物種植前或收獲后進行植物病原菌檢測，不僅可以對病害進行提前預(yù)警，也可以檢測農(nóng)產(chǎn)品的品質(zhì)。傳統(tǒng)的植物病原菌分子生物學(xué)檢測方法往往需要在實驗室進行，并且需要借助多種專業(yè)的儀器設(shè)備。為了在田間或其他現(xiàn)場能夠?qū)Σ≡M行快速定量檢測，利用便攜且操作簡單的儀器設(shè)備進行病原菌檢測顯得尤為重要。經(jīng)過分析發(fā)現(xiàn)，環(huán)介導(dǎo)等溫擴增（LAMP），是近年來興起的一種新的聚合酶鏈?zhǔn)綌U增反應(yīng)體系，這種方法只需要一個恒定的反應(yīng)溫度，所使用的反應(yīng)儀器簡單。

1 試驗材料

待檢測的病原菌包括禾谷鐮刀菌、腫囊腐霉菌、彎孢葉霉菌和玉蜀黍黑粉菌。陰性對照為去離子H2O。

2 試劑和儀器設(shè)備

試驗試劑包括反應(yīng)DNA擴增試劑盒（廣州迪澳生物科技有限公司）。每種病原菌對應(yīng)一套LAMP引物，每套引物均由6條引物組成。

反應(yīng)在廣州雙螺旋基因科技有效公司生產(chǎn)的ZYD-S1熒光恒溫擴增儀器（見圖1）上進行。反應(yīng)溫度設(shè)定為63 ℃，反應(yīng)時間設(shè)定為45 min。反應(yīng)結(jié)束后，根據(jù)儀器自帶的程序判斷反應(yīng)結(jié)果。

3 試驗方法和結(jié)果

禾谷鐮刀菌、腫囊腐霉菌、彎孢葉霉菌和玉蜀黍黑粉菌的DNA和去離子H2O分別作為反應(yīng)的模板配制反應(yīng)體系。反應(yīng)管在ZYD-S1加熱模塊上的布局如圖2所示：陰性對照（A1/B1，A6/B6，A7/B7，A8/B8），禾谷鐮刀菌（A2/B2），腫囊腐霉菌（A3/B3），彎孢葉霉菌（A4/B4）和玉蜀黍黑粉菌（A5/B5）。反應(yīng)完成后，根據(jù)反應(yīng)自帶程序產(chǎn)生的擴增曲線圖可以看出：所有的陰性對照均沒有有效擴增，而4種植物病原菌均產(chǎn)生有效的擴增（見圖3）。這就表明LAMP體系能夠準(zhǔn)確、快速地檢測出植物病原菌。