海桐皮質量標準優化研究

王 燁，劉梓煜，劉 偉，王夢桐，楊濟菲，劉思佳，楊錦祥，丁禹伶，李 勇

（長春中醫藥大學藥學院，長春 130117）

據吉林省1986 年《吉林省中藥飲片炮制規范》記載，海桐皮來源為五加科植物刺楸Kalopanax septemlobus（Thunb.）Nakai.、豆科植物刺桐Erythrina variegata L. var. orie. taLis（L.）、 喬 木刺桐E. arborescens Roxb.、或蕓香科植物樗葉花椒ZanthoxyLum aiLanthoides. Sieb et Zucc.的干燥樹皮。刺楸，是五加科刺楸屬植物。其樹皮具有祛風、除濕、通絡、止痛、殺蟲之功效[1]。化學研究主要涵蓋三萜及其皂苷和苯丙素類化合物，已從刺楸中分離出122 種化合物，包括三萜類（7 個）及三萜皂苷類（79個）、苯丙素類（26 個）、其他類（10 個）（甾醇類、苯酚類、苯甲酸類）化合物。其中三萜皂苷是K. septemlobus 最主要的化學成分。藥理研究表明，從刺楸不同部位分離出的各種提取物和單體化合物具有廣泛的生物活性，包括抗炎、抗腫瘤、抗氧化、抗真菌等。其中，三萜皂苷在抗炎、抗腫瘤等方面已被深入研究[2-3]。刺桐或喬木刺桐，為豆科刺桐屬植物。其樹皮具有鎮靜[4]、平喘[5]祛風除濕，驅蟲之功效。化學研究主要涵蓋生物堿和黃酮類化合物。藥理作用包括抗炎、抗腫瘤、抗氧化、抗菌、預防齲齒、鎮痛、抗風濕、抗病毒等作用[4-6]。樗葉花椒，為蕓香科花椒屬植物，其樹皮具有祛風通絡、活血散瘀、溫中健胃等諸多功效[7]化學研究主要涵蓋揮發油類、生物堿類、酰胺類、黃酮類、香豆素類和木脂素類等化合物[8-12]，藥理作用包括鎮靜鎮痛、抗菌、抗病毒、抗氧化等方作用[13-14]。

由以上信息可知四種海桐皮在功能主治、化學成分和藥理作用方面存在異同。但是它們卻都作為海桐皮使用，這使得混用藥材可能帶來安全隱患，因此有必要針對每種植物做不同的顯微和薄層對其定性鑒別，加以區分。本研究采用顯微和薄層色譜法對刺楸、刺桐或喬木刺桐以及樗葉花椒三味中藥進行定性鑒別研究，進一步完善海桐皮的質量標準。

1 儀器材料

1.1 試劑與試藥

見表1。

表1 試劑與試藥

1.2 實驗儀器

見表2。

表2 實驗儀器

2 實驗方法

2.1 標本制作

準備出采集的標本，剪去莖上殘葉或者一些過密的葉子，留下葉柄，將根修剪，壓平，整體修剪，確定標本大致形狀，標本夾的一面放在桌上，上鋪幾層吸水性好的草紙，將之前處理的標本放在紙上，加以整理，再蓋上幾層草紙，最后將標本夾另一面也壓上，用繩縛緊，1 ～2 d 后標本夾打開，換草紙，將標本翻面，直至標本完全干燥，將干燥的標本貼于臺紙上，分別在左上角和右下角貼標簽，進而制作成植物標本。

2.2 海桐皮飲片制備

本研究中所有樣品均按1986 年《吉林省中藥飲片炮制規范》炮制方法加工而成，取海桐皮鮮品，清洗干凈，悶潤，切制，干燥。

2.3 顯微鑒別

2.3.1 粉末鑒別 將藥材粉碎，粉末過四號篩，取少許置于載玻片上，滴加水合氯醛試液1 ～2 滴，蓋上蓋玻片，置于顯微鏡（10×40）下觀察。

2.4 薄層鑒別

除了對薄層色譜方法進行專項考察外，本研究均按照2020 年版中國藥典四部通則0502 法試驗操作。2.4.1 刺楸（川桐皮）薄層鑒別

2.4.1.1 供試品溶液的制備 取刺楸粉末 1.0 g，加20 mL 甲醇超聲處理 30 min，抽濾，將濾液放入蒸發皿用水浴鍋蒸干，殘渣加水 15 mL 使其溶解，用水飽和正丁醇振搖提取 2 次，每次 15 mL，合并正丁醇提取液，蒸干。殘渣加甲醇 20 mL 溶解，再加入 75%鹽酸 2 mL，加熱回流水解 2 h，水解物加水適量，用三氯甲烷振搖提取 2 次，每次 20 mL，合并三氯甲烷液，蒸干，殘渣加甲醇 2 mL 使溶解，作為供試品溶液。

2.4.1.2 對照品溶液的制備 另取 1 mg 常春藤皂苷元對照品，加甲醇1 mL 使其配制為每 1mL 含 1 mg的溶液，作為對照品溶液。

2.4.1.3 實驗方法 按照《四川省中藥飲片炮制規范》（2015 年版）川桐皮項下薄層方法進行試驗[15-17]：斑點專屬性不好，Rf 值較低，故設定正己烷-乙酸乙酯-冰醋酸 = 7:3:0.3、正己烷-乙酸乙酯-冰醋酸 = 7:3:0.4 和正己烷-乙酸乙酯-冰醋酸 = 7:3:0.5三個展開系統進行考察。

2.4.2 刺桐或喬木刺桐（海桐皮）薄層鑒別

2.4.2.1 供試品溶液的制備 取刺桐或喬木刺桐粉末 1.0 g，加 30 mL 乙醇，超聲處理 30 min，抽濾，將濾液放入蒸發皿用水浴鍋蒸干，殘渣加水15 mL 使溶解，濃氨試液調 pH 值至10 ～12，用三氯甲烷振搖提取 2 次，每次 15 mL，合并三氯甲烷液，蒸干，殘渣加甲醇 2 mL 使溶解，作為供試品溶液。

2.4.2.2 對照藥材溶液的制備 另取海桐皮對照藥材 1.0 g，按照相同方法制成對照藥材溶液。

2.4.2.3 實驗方法 按照《山東省中藥飲片炮制規范》（2012 年版）海桐皮項下薄層方法進行試驗[16-17]：斑點拖尾，重現性不好，故設定三氯甲烷-甲醇 =4:1 和正丁醇-冰醋酸-水 = 4:1:5 上層溶液展開劑兩個展開系統進行考察。

2.4.3 樗葉花椒（浙桐皮）薄層鑒別

2.4.3.1 供試品溶液的制備 取樗葉花椒粉末 1.0 g，用 10 mL 乙醇超聲 30 min，過濾，濾液揮干，用甲醇定容至2 mL，作為供試品溶液[15，17]。

2.4.3.2 對照品溶液的制備 另取 1 mg 木蘭花堿對照品，加甲醇1 mL 使其配制為每 1 mL 含 1 mg 的溶液，作為對照品溶液。

2.4.3.3 實驗方法 按照薄層色譜法（中國藥典2010 年版一部附錄VI B）試驗，吸取上述兩種溶液各5 uL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水 = 7:2:2:1 為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈 254 nm 下檢視。斑點專屬性不好，故設定氯仿-甲醇 = 4:1、乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水 = 7:2:2:1、正丁醇-乙酸-水 = 4:1:5 三個展開系統進行展開劑考察。

3 結果

3.1 植物標本

見圖1、圖2、圖3。

圖1 刺楸標本

圖2 刺桐或喬木刺桐標本

圖3 樗葉花椒標本

3.2 海桐皮飲片性狀

見圖4。角寬大或帶方形。纖維及晶纖維較多，成束或單個散在，壁極厚，木化，孔溝明顯，胞腔狹細，直徑10 ～33 μm。石細胞呈類長圓形、類長方形或紡錘形直徑33 ～56 μm。木栓細胞無色或淡棕色，表面觀類長方形或類多角形。篩管極少見。

圖4 海桐皮飲片性狀圖

3.3.2 刺桐或喬木刺桐 本品粉末黃白色至灰色。木栓細胞多角形，常多層重疊，壁菲薄，非木化或微木化。胞腔內含草酸鈣方晶，方晶較多，單個或成群存在。纖維及晶纖維成束或散在，纖維直徑9 ～30 μm，壁極厚，胞腔線形，木化或微木化，纖維束周圍細胞中含有草酸鈣方晶，形成晶纖維。篩管較少，不太容易找到。

3.3.3 樗葉花椒 本品粉末黃棕色。草酸鈣方晶眾多，有的棱角寬大或帶方形。纖維及晶纖維較多，成束或單個散在，壁極厚，木化，孔溝明顯，胞腔狹細，直徑10 ～33 μm。木栓石細胞呈類長圓形、類長方形或紡錘形，多為兩個以上細胞鏈接在一起，單個直徑在33 ～56 μm。木栓細胞成群存在，無色或淡棕色，表面觀類長方形或類多角形。

3.4 薄層鑒別

3.4.1 刺楸（川桐皮）薄層鑒別 根據圖5 可知，正己烷-乙酸乙酯-冰醋酸 = 7:3:0.3 或7:3:0.4 都能使刺楸顯現出清晰可見的斑點，但其Rf 值較低，而正己烷-乙酸乙酯-冰醋酸 = 7:3:0.5 作為展開劑的薄層色譜圖Rf 值最好，綜合考慮正己烷-乙酸乙酯-冰醋酸 = 7:3:0.5，可作為本鑒別實驗的展開劑。本實驗選取10 批樣品按本法檢驗，均符合規定，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。且薄層色譜分離效果好，斑點圓整清晰，比移值適中，重現性較好。

圖5 刺楸薄層色譜圖

3.4.2 刺桐或喬木刺桐（海桐皮）薄層鑒別 根據圖6 可知，當展開劑為三氯甲烷-甲醇 = 4:1 時，能顯現出斑點，但不夠清晰，表現出拖尾、比移值很低且分離度不好的缺點，而當展開劑為正丁醇-乙酸-水 = 4:1:5 上層溶液為展開劑的薄層色譜斑點清晰圓整，Rf 值最好，故其可作為本鑒別實驗的展開劑。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。本實驗選取10 批樣品按本法檢驗，均符合規定，且薄層色譜分離效果好，斑點圓整清晰，比移值適中，重現性較好。

圖6 刺桐或喬木刺桐薄層色譜圖

3.4.3 樗葉花椒（浙桐皮）薄層鑒別 根據圖7 可知，氯仿:甲醇 = 4:1 和乙酸乙酯-丙酮-甲酸:水= 7:2:2:1 作為展開劑時不能顯現出清晰的斑點，而正丁醇-乙酸-水 = 4:1:5 上層溶液為展開劑的薄層色譜斑點清晰，Rf 值較好，故可作為本鑒別實驗的展開劑。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。10 批樣品按本法檢驗，均符合規定，且薄層色譜分離效果好，斑點圓整清晰，比移值適中，重現性較好。

圖7 樗葉花椒薄層色譜圖

4 討論

海桐皮作為常見中藥，分為多基源藥材，如刺楸、刺桐或喬木刺桐以及樗葉花椒，目前有關于其有效質量控制的文獻和相關報道相對很少，三種海桐皮的功能主治、化學成分及藥理活性各不相同。按照現有標準對其進行標本制作、飲片加工、顯微和薄層色譜定性鑒別，日常檢測工作中發現兩個問題：1）各基源海桐皮的性狀和顯微特征等相差較大，如刺楸中存在較多蔟晶，然而其他兩種藥材包含很多方晶并且篩管較少，很難在其中找到。2）現存薄層色譜方法主要存在專屬性和重復性不好的問題。為了提高海桐皮個混用品的鑒別效率，本研究分別對其展開劑進行優化，最終確定了三種海桐皮藥材薄層色譜鑒定的新方法。研究表明，各基源海桐皮的顯微特征和薄層條件也相差很多，可以單獨作為中藥材使用。并且本實驗方法與現行標準及文獻中記載的方法相比，優化后的薄層色譜斑點更清晰，且分離度較好，專屬性更強。新方法操作簡單，重復性和耐用性良好，可全面有效的控制海桐皮的質量，為該藥品質量標準提供依據和參考。