1032例男性不育癥患者細胞遺傳學分析

柴蓓蓓， 何 培， 王惠瑩， 劉 瀏， 張若鵬， 袁 彩

(1.大理大學臨床醫學院， 云南 大理 671000 2.大理大學第一附屬醫院生殖醫學科， 云南 大理 671000 3.云南省大理白族自治州人民醫院婦科， 云南 大理 671000)

論著

1032例男性不育癥患者細胞遺傳學分析

柴蓓蓓1， 何 培1， 王惠瑩1， 劉 瀏1， 張若鵬2， 袁 彩3

(1.大理大學臨床醫學院， 云南 大理6710002.大理大學第一附屬醫院生殖醫學科， 云南 大理6710003.云南省大理白族自治州人民醫院婦科， 云南 大理671000)

目的探討不育癥患者異常染色體核型的檢出率和異常類型。方法對1032例不育癥患者外周血淋巴細胞進行G顯帶染色體核型分析。結果1032例男性患者中共發現51例染色體異常者，檢出率為4.94%。其中性染色體異常者3例，常染色體異常者11例，染色體多態性改變37例，其中性染色體多態性改變有8例，常染色體多態性改變有29例。臨床表現多為少、弱精癥，無精癥和配偶反復流產。結論在男性不育癥患者中，不僅需要進行精液常規分析，還要對其攜帶異常染色體或染色體多態性進行檢測，避免患者將這些異常染色體遺傳給下一代，造成其后代的不孕不育。

染色體多態性； 染色體異常； 不育癥

不孕不育是指夫妻存在正常性生活且未采取任何避孕措施的情況下一年及以上未妊娠者。其中由于女性因素所導致的稱不孕，由男性因素所導致的稱不育。據近年來的統計，不孕不育中單純女性因素占50%；單純男性因素占40%，比例有所增加；雙方因素占10%。本文對來自大理大學第一附屬醫院和大理白族自治州人民醫院婦科的1032例，男性不育癥患者的外周血淋巴細胞進行了遺傳學染色體分析，旨在探索異常核型及其檢出率與不育癥的聯系，為臨床的優生優育工作提供理論依據和實踐、宣傳指導。

1 資料與方法

1.1研究對象：2016年1月至2017年6月在大理大學第一附屬醫院生殖醫學科和大理白族自治州人民醫院婦科就診的不孕不育癥夫婦1852對，其中僅男方存在不育癥(女方無異常)的患者1032例。所有患者均已不孕不育為主訴就診，詳細記錄病史，并簽署相關科研知情同意書。

1.1.1納入標準:①患者均為22～45歲的男性不育癥患者，以少弱精或女方反復流為不育癥的主要表現。②患者不存在射精障礙或梗阻性無精癥等取精困難的情況。③患者自身不存在抗精子抗體、抗子宮內膜抗體、抗透明帶抗體、抗心磷脂抗體等，影響受精的免疫性不育因素。④患者配偶不存在抗精子抗體，抗子宮內膜抗體、抗透明帶抗體、抗心磷脂抗體等，影響受精的免疫性不孕因素。

1.1.2排除標準:①存在嚴重肝腎功能或心肺功能異常者。②配偶存在卵巢、輸卵管或子宮等因素可導致不孕者。

1.2少弱精判斷標準:①少精癥：國際衛生組織規定，男性的精子應不低于2×107/mL，如果低于2×107/mL就歸為少精癥，生育方面就會有很大影響.②弱精癥：指精液中前向運動的精子(a級+b級)<50%或a級運動的精子<25%。輕度弱精癥指，30%

1.3方法:取肝素抗凝外周靜脈血2mL，用密度梯度離心法提取淋巴細胞，于無菌條件下接種于RPMI1640液體培養基上，37℃條件下先培養68h，隨后加終濃度為0.1μg/mL的秋水仙素繼續培養至72h。離心收集培養物，加0.075mol/L KCl低滲液5mL混勻后37℃低滲保存20min。低滲后的細胞懸液移入離心管中2200rpm，離心10min。離心后棄上清,加入新配制的固定液(無水乙醇：冰醋酸=3：1)5mL，室溫下固定15min以后,再離心。棄上清后,再重復固定兩次。然后根據沉淀細胞量,再加入少量(約0.2～0.3mL)固定液制成細胞懸浮液。將2～4滴細胞懸浮液均勻地滴在冰水預冷的載片上,空氣干燥。標本晾干后，用染液(Giemsa液原液1份，pH6.8的磷酸緩沖液9份)染色15min，自來水沖洗后晾干。隨后先低倍鏡觀察,找到分散好的細胞相后再換高倍鏡觀察。計數30個中期分裂相并分析核型，最后按G帶核型進行細胞遺傳學分析。

2 結 果

2.1染色體異常核型情況:1032例進行細胞遺傳學分析檢查的男性患者中共發現51例染色體異常者，檢出率為4.94%。其中性染色體異常者3例，占染色體異常總數中的5.9%；常染色體異常者11例，占染色體異?？倲抵械?1.56%，具體核型見表1。

表1 染色體異常核型

2.2染色體多態性:發生改變共37例，占染色體異?？倲抵械?2.54%，在染色體多態性中，性染色體多態性改變有8例，占染色體多態性改變的21.62%，常染色體多態性改變有29例，占染色體多態性改變的78.38%，具體核型見表2。

表2 染色體多態性核型

3 討 論

3.1常染色體異常與男性不育:常染色體最常見的改變包括：染色體易位、倒位、染色體羅伯遜易位和衍生染色體。染色體片段的位置改變稱為易位，通常攜帶者自身沒有明顯的病理表現或生殖系統發育異常[1]，但其生殖細胞卻存在染色體的異常，在男性表現為少弱精、不育或其配偶不明原因反復流產，這與本研究結果一致。同時研究表明[2]平衡易位的攜帶者與正常人婚后生育的子女中，有可能得到一條衍生異常染色體，導致某一易位節段的增多或減少，并產生相應的遺傳效應。染色體倒位是由染色體片斷旋轉180度后重新連接造成的。其遺傳效應目前仍未有確切定論，但有研究表明[3]其與不孕不育、反復流產以及新生兒畸形和智力低下有關。羅伯遜易位是指兩條染色體在著絲粒處斷裂重組后，其中一條因缺乏著絲?；蜻z傳物質而丟失。研究表明[4]羅伯遜易位攜帶者和正常者結合其子代中約有18%是正常合子，其余均為不平衡合子，可引起流產或畸形。衍生染色體多為親代染色體發生異常改變后遺傳給子代的結果。其家系具有較高的研究價值[5]，對其進行追蹤有助于判斷各類染色體異常的遺傳學效應。

3.2性染色體異常與男性不育:男性性染色體異常中最常見的為47,XXY，即Klinefelter綜合征[6]。典型臨床表現為第二性征發育差，有女性化表現，雙側睪丸發育不良從而導致無精癥，少數患者精液中偶見精子或僅在睪丸活檢時可發現精子。其發病機制為卵細胞在成熟分裂過程中，性染色體不分離，形成含有兩個X的卵子。

3.3染色體多態性與男性不育:染色體多態性，是指正常人群中常見的各種染色體形態的微小變異如：隨體增大或缺如；次縊痕增加或缺失；9號染色體倒位；大Y染色體等。隨體增大和次縊痕增加，屬于異染色質區DNA片段過度重復，其會影響細胞分裂的啟動識別，和同源染色體配對，從而導致子代非整倍體或者不平衡配子情況的出現，臨床表現為反復流產、不孕不育等。

研究表明[7～9]9號染色體倒位在我國的發生率約為0.82%～1.8%，其中inv(9)(p11；q13)和inv(9)(p12；q13)的發生率最高，且與男性精子形態和男性不育癥存在聯系。Morel等研究發現[10]，當倒位片段比例小于整條染色體長度30%時，不產生重組精子；倒位片段比例升高到整條染色體的30%～50%時，將會產生部分重組精子，并且重組精子的比率將隨著倒位所占長度比例的增加而增加；當倒位片段占到50%以上時，將會產生大量重組精子，而重組精子和少弱精癥以及男性不育有著密切聯系。

陳亮等的研究發現[11]大Y染色體(即Yqh+)的DNA過度重復，有可能產生劑量效應影響，導致分裂錯誤發生的頻率增高或影響細胞的分化，最終影響生殖細胞的發育，從而導致少弱精癥、無精癥。

綜上所述，從優生優育的角度而言，男性不育癥患者不僅需要進行常規精液分析，還應進行細胞遺傳學檢測，因為這些少弱精、甚至精液正常的患者中，存在部分染色體異常或染色體多態性攜帶者，這些染色體異?；蚨鄳B性是會變成衍生染色體遺傳給下一代的。其不但會造成攜帶者本身的不育和其配偶妊娠過程中的流產、畸形、死胎，更會影響到下一代的基因，造成后代的不孕不育。同時針對這類患者的家系研究，在染色體異常和染色體多態性遺傳效應方面是十分有有價值的。

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[11] 陳亮，付杰，陳菲,等.Y染色體長度變異對男性生育功能的影響[J].北京大學學報(醫學版)，2014，46(2)：211～214.

CytogeneticAnalysisof1032MaleInfertilityPatients

CHAIBeibei,HEPei,WANGHuiying,etal

(MedicalCollegeofDaliUniversity,YunnanDali671000,China)

Objective: To investigate the detection rate and abnormal type of abnormal chromosome karyotype in infertile patients.Methods1032 infertile patients' peripheral blood lymphocytes were detected by G banding karyotype analysis.Results51 cases of chromosomal abnormalities were found in 1032 male patients, the detection rate was 4.94%. Among them, there are 3 cases of sex chromosomal abnormalities, 11 cases of autosmal abnormalities, 37 cases of chromosome polymorphism changed, the 37 cases state including 8 cases of sex chromosomal polymorphism changed and 29 cases of autosomal polymorphic changed. Most clinical manifestations are weak symptoms, azoospermia and spouse repeated abortion.ConclusionIn male infertility patients, not only need to carry out routine analysis of semen, but also carry their abnormal chromosomes or chromosome polymorphisms detected to prevent patients from transmitting these abnormal chromosomes to the next generation, resulting in its offspring of infertility.

Chromosome polymorphism; Chromosomal abnormality; Infertility

1006-6233(2017)12-1937-04

大理大學博士科研啟動費項目，(編號KYBS201612);大理大學第一附屬醫院第二批重點學(專)科建設項目，(編號2017ZD02)

袁 彩

A

10.3969/j.issn.1006-6233.2017.12.001