MicroRNA- 124在急性腦梗死患者血清中表達的研究

保玉蓮 朱榆紅 鮑天昊 李 勤

1)個舊市人民醫院神經內科，云南 個舊 661000 2)昆明醫科大學第二附屬醫院神經內科，云南 昆明 650101

·論著科研之窗·

MicroRNA- 124在急性腦梗死患者血清中表達的研究

保玉蓮1)朱榆紅2)△鮑天昊2)李 勤1)

1)個舊市人民醫院神經內科，云南 個舊 661000 2)昆明醫科大學第二附屬醫院神經內科，云南 昆明 650101

目的探討microRNA- 124在急性腦梗死患者血清中的表達，并分析其與急性腦梗死相關臨床因素的關系。方法收集同時期住院的急性腦梗死患者及健康體檢者各30份血清標本，測定microRNA- 124相對表達量，比較2組間microRNA- 124表達量的變化，同時進行急性腦梗死患者相關臨床資料研究，探討microRNA- 124與急性腦梗死相關臨床因素的關系。結果與正常體檢者相比，microRNA- 124在急性腦梗死患者血清中的表達升高(P<0.05)，其表達量與梗死面積、發病時間有關(P<0.05)，而與性別、年齡、高血壓史、空腹靜脈全血葡萄糖水平(FPG)、低密度脂蛋白水平(LDL- C)、既往腦血管病史、MRA提示顱內動脈狹窄等因素無明顯相關性(P>0.05)。結論microRNA- 124在急性腦梗死患者血清中的表達量較正常人升高，梗死面積越大，表達量越高，在發病24～72 h較發病72 h以后表達升高。

microRNA- 124；表達量；急性腦梗死；血清；臨床因素

隨著社會經濟發展與我國人口老年化的到來，腦血管病目前已成為我國人口致殘和死亡的首位原因，且發病率有逐年升高的趨勢。缺血性腦血管病(腦梗死)占腦血管病的60%～80%，其高致殘率、高病死率給社會和家庭帶來了沉重的負擔。目前對腦梗死的診斷僅限于臨床表現及頭顱影像學檢查，尚無敏感的生化指標能提示腦梗死的發生、發展及預后，使腦梗死在微觀世界里缺乏客觀有效的評價指標。2008年以來，多項[1- 3]研究均表明，血清、血漿及其他體液中存在著穩定的microRNA，這就為microRNA作為某一疾病的生物學標記物進行檢測提供了可能。本文通過對急性腦梗死患者血清microRNA- 124表達量的測定，探討microRNA- 124在急性腦梗死患者體內的變化及意義。

1 資料與方法

1．1一般資料

1．1．1 研究對象：選取個舊市人民神經內科及ICU 2013- 05—08住院的急性腦梗死(發病7 d內)患者30例，男17例，女13例，年齡42～84歲，平均64.73歲。全部病例均經過病史及頭顱CT或MRI檢查確診，并排除短暫性腦缺血發作(TIA)，同時排除免疫性、感染性及血液系統等疾病因素所致者。

1．1．2 對照組：選取同時期在個舊市人民醫院進行健康體檢的正常人30例，男16例，女14例，年齡40～80歲，平均59.57歲。全部對照均通過詢問病史、體格檢查及相關檢查排除新發腦梗死、高血壓、糖尿病、腫瘤及血液系統等疾病。2組間性別和年齡比較差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1．2研究方法

1．2．1 血清標本留取及保存：取觀察組及對照組晨起空腹靜脈血4～5 mL，靜置1 h后離心取上層血清，置于環氧乙烷消毒過的冷凍管中，標記后于-80 ℃冰箱保存備用。

1．2．2 microRNA- 124表達量測定：按相關試劑盒操作步驟分別進行miRNA提取、cDNA制備、實時熒光定量PCR。以U6 SnRNA作為內參照(U6- F：CTCGCTTCGGCAGCACA，U6- R：AACGCTTCA- CGAATTTGCGT)。PCR儀自動給出樣本擴增曲線及溶解曲線、CT值，每份標本重復PCR試驗3次，取平均值。目的miRNA的Ct值減去U6的CT值作為△Ct值。目的miRNA的相對表達量采用相對于U6的2-△△Ct表示[4]。

2 結果

2．1 2組間血清miRNA- 124相對表達量比較2組間miRNA- 124相對表達量有差異，觀察組大于對照組(P≤0.05)。見表1。

表1 血清miRNA- 124的相對表達量

2.2急性腦梗死患者血清miRNA- 124相對表達量與臨床因素相關性分析收集30例急性腦梗死患者的臨床資料進行分析整理，包括性別、年齡、抽血時間(指從發病至抽血間隔時間)、梗死面積(腔隙性、多發性、大面積)、高血壓史、空腹靜脈全血葡萄糖水平(FPG)、低密度脂蛋白水平(LDL- C)、既往腦血管病史、MRA提示顱內動脈狹窄(包括單支或多支)等因素，急性腦梗死患者血清中miRNA- 124相對表達量與梗死面積及發病時間有關，大面積腦梗死中表達量最高，多發性腦梗死中次之，腔隙性梗死中表達量最少。發病24～72 h內表達較發病72 h以后要高。miRNA- 124表達量與性別、年齡、高血壓史、空腹血漿葡萄糖水平、低密度脂蛋白水平、既往腦血管病史、MRA提示顱內動脈狹窄等因素無明顯相關性。見表3。

3 討論

腦梗死是我國中老年人群的常見病、多發病，近年來呈逐漸上升和低齡化趨勢，農村地區也日益突出。目前對腦梗死的診斷僅限于臨床表現及頭顱影像學檢查，尚無敏感的生化指標能提示腦梗死的發生、發展及預后，使腦梗死在微觀世界里缺乏客觀有效的評價指標。MicroRNA (miRNA) 是一組由動物、植物和病毒基因所編碼的長19～25個核苷酸的小分子單鏈RNA，它們參與了機體的各種重要生理和病理活動，人類約有1/3基因編碼的mRNA受到miRNA的負調控[5]。miRNA不僅參與了細胞的分化、生長、增值及凋亡過程[6]，而且還在一些疾病的發生、發展過程中起著重要的調控作用[7]。目前所涉及的miRNA與疾病相關性研究領域主要集中在腫瘤方面，而miRNA與腦血管病的相關性研究近年來才剛剛起步，主要探討的是與缺血性腦血管病的關系[8]。早已有研究表明，不同miRNA在腦組織中表達的豐度不同，而miRNA- 124為腦組織中表達最豐富的miRNA[9- 10]，2014年Zhu等[11]研究小組已對miRNA- 124與腦缺血/再灌注損傷進行過相關報道，故本研究選取miRNA- 124為研究對象，可以更真實、更特異地反映miRNA的變化與腦梗死之間的關系。

本研究中對比30例急性腦梗死及30例健康體檢者血清中miRNA- 124的相對表達量，腦梗死組血清miRNA- 124的表達較正常組升高，梗死面積越大，血清miRNA- 124的表達越高。考慮原本正常存在于腦組織中高表達的miRNA- 124，在急性腦梗死發生后，腦細胞出現缺血、缺氧、水腫、壞死，miRNA- 124大量釋放入血，從而導致血清中miRNA- 124表達升高，這與林洋等[12]在對大鼠研究中的結果是一致的。同時亦可以解釋梗死面積越大，釋放入血的量越大，故血清中表達量越高。另外，Weng等[13]研究小組發現，miRNA- 124在腦缺血6 h后即開始升高，一直持續到48 h以后。林洋等[12]亦通過研究顯示，在發生缺血性卒中后，大鼠血漿中miRNA- 124 a的表達在8 h后開始顯著升高，24 h達到高峰，約為卒中前的18倍，隨后48 h又逐漸降低，而缺血腦組織區的miRNA- 124表達水平在卒中后24 h較對照組顯著降低，為對照組腦組織中含量的12%～20%。

表2 急性腦梗死患者血清中miRNA- 124的相對表達與各臨床因素之間的關系

注：*F=5.534，P=0.005；**F=12.402，P=0.000

本文中亦有部分結果與上述研究相似。本研究提示，患者血清miRNA- 124的表達與發病時間有一定相關性。發病時間24～48 h及48～72 h 2組患者較發病>72 h患者的表達量升高，即發病24～72 h較發病72 h以后表達升高，這與上述在鼠類研究中所得結論，缺血24～48 h血漿中miRNA- 124表達升高相一致。因臨床上患者對疾病認識不夠，大部分患者不能在發病后及時入院，大多數病例均在發病1 d以上獲得血清標本，故本研究中對于發病6 h、8 h等短期檢測不多。

若能探清急性腦梗死患者血清中miRNA表達譜的動態變化，與發病類型、發病時間及病變面積、其他臨床因素的相關性，就有可能為急性腦梗死設定特異性的血清生物學標記物，從而提高腦梗死的診斷、分型、預后判斷的可靠性，為進一步研究腦梗死后miRNA在腦細胞的一系列病理生理變化中的作用機制奠定基礎，并有可能為腦梗死的預防和治療提供新的作用靶點，為腦梗死的防治提供可靠依據。

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AstudyofmicroRNA- 124expressioninbloodserumofacutecerebralinfarctionpatients

BAOYulian*，ZHUYuhong，BAOTianhao，LIQin

*DepartmentofNeurology，theGejiuPeople’sHospital，Gejiu661000，China

ObjectiveTo investigate microRNA- 124 expression in the serum of acute cerebral infarction patient，and analyze the relationship between the expression and associated clinical factors．MethodsCollect 30 serum specimen of acute cerebral infarction patients and healthy check- up at the same time in the hospital．Detect microRNA- 124 relative expression in serum．Compare the microRNA- 124 expression variation between the two groups，and analyze clinical data of acute cerebral infarction patients．Investigate the relationship between microRNA- 124 and the clinical factors related to acute cerebral infarction．ResultsCompared with the regular check- up，the acute cerebral infarction patients serum microRNA- 124 expression upregulate(P<0.05)．The expression is associated with infarction area and onset time(P<0.05)．Meanwhile，there are no obvious correlation between serum microRNA- 124 expression and other factors in acute cerebral infarction patients，such as gender，age，history of high blood pressure，fasting venous blood glucose (FPG)，low density lipoprotein levels (LDL- C)，cerebrovascular disease history，MRA hint of intracranial artery stenosis (P>0.05)．ConclusionThe serum microRNA- 124 expression in acute cerebral infarction patients is higher than healthy people．The greater infarction area，the higher expression．There is a higher expression in the 24- 72 hours than after 72 hours onset．

MicroRNA- 124；Expression；Acute cerebral infarction；Serum；Clinical factor

10.3969/j.issn.1673- 5110.2017.20.004

國家自然科學基金項目(編號：81060102)；云南省科技計劃項目[編號：2017FE467(-152)]

△通信作者：朱榆紅，女，教授，醫學博士，博士生導師。研究方向：腦血管疾病。Email：yuhong_lilin@yahoo．com．cn

R743.33

A

1673- 5110(2017)20- 0016- 04

(收稿2017- 06- 13)

王喜梅