正交試驗優選蒙藥烏珠莫口服液制備工藝

宋曉玲 潘俊英 閆 暾 宋 淼 劉全禮*

(1.包頭醫學院，內蒙古 包頭 014060；2.呼和浩特市中蒙醫院，內蒙古 呼和浩特 010030)

工藝與制備

正交試驗優選蒙藥烏珠莫口服液制備工藝

宋曉玲1潘俊英2閆 暾1宋 淼1劉全禮1*

(1.包頭醫學院，內蒙古 包頭 014060；2.呼和浩特市中蒙醫院，內蒙古 呼和浩特 010030)

目的：用正交試驗法優選烏珠莫口服液的制備工藝。方法在單因素試驗的基礎上，選取烏珠莫口服液的提取次數、醇沉濃度、pH值為考察因素和水平，以甘草酸的含量作為指標，正交試驗設計優化烏珠莫口服液的制備工藝。結果烏珠莫口服液的最佳制備工藝為溶劑用量為10倍量水，提取次數2次，醇沉濃度為70%，pH值為5.0，此條件下制備的烏珠莫口服液中甘草酸含量為1004.61 mg·L-1。結論優化得到的烏珠莫口服液穩定、制備工藝可靠，沉淀較少。

烏珠莫;口服液;正交試驗;制備工藝

烏珠莫口服液為內蒙古蒙藥制劑規范2007版(第一冊)所收載[1]。處方由內蒙古中蒙醫院提供，全方由甘草32kg、紅花12kg、石榴皮20kg、木香24kg、沙棘29kg、梔子10kg、白葡萄干40kg、香附23kg、石膏24kg、肉桂12kg 10味藥材組成的口服制劑，具有清肺、止咳、化痰、定喘等功效，主要用于感冒咳嗽、急慢性支氣管炎、肺炎等病癥。原規范記載制備工藝缺少部分具體制備工藝參數，我們對其制備工藝進行研究，以期獲得有效成分含量高、沉淀較少、質量穩定的口服液制劑。本研究以方中主藥甘草中的甘草酸為主要考察指標，采用正交試驗法進行了烏珠莫口服液工藝條件的優選，確定了最佳制備工藝條件。

1 材料與儀器

1.1 材料： 甘草酸對照品(含量測定用，批號：111685-200802 ) 由中國藥品生物制品檢定研究院提供；處方中所有藥材均購于內蒙古華聚醫藥有限責任公司，經生藥教研室董永和鑒定均為符合2015版《中國藥典》規定的合格藥材及飲片；乙醇(分析純，南京化學試劑有限公司)，乙腈(色譜純，德國默克公司)，水(杭州娃哈哈公司)，其他試劑均為分析純。

1.2 儀器： 高效液相儀及其色譜工作站LC-20AT，CBM-20A9 (島津企業管理(中國)有限公司)；DGG-9053A型電熱恒溫鼓風干燥箱(上海森信試驗儀器有限公司)；RE-52AA旋轉蒸發儀(上海亞榮生化儀器廠)；BS2242S 電子天平(北京賽多利斯器系統有限公司)；DHT型磁力加熱攪拌電熱套(山東甄城華魯電熱儀器有限公司)。

2 方法與結果

2.1 制備方法： 將以上藥材分別粉碎成粗粉。稱取處方量的肉桂、木香、香附藥材粗粉，置1000mL圓底燒瓶，10倍蒸餾水浸泡后，圓底燒瓶上連接揮發油提取器和回流冷凝器，進行加熱回流提取，揮發油及提取液備用。剩余藥渣與剩余處方量的藥材粗粉一同置5000mL圓底燒瓶，適量蒸餾水浸泡后，回流提取。合并提取液，過濾。提取液用旋轉蒸發儀濃縮至相對密度為1.10、醇沉、靜置、濾過。濾液回收乙醇至無醇味，加入揮發油、調節液體總量至200mL，靜置、過濾，用NaOH調節pH，分裝，既得。

2.2 甘草酸的含量測定： 采用HPLC測定甘草酸的含量[2]。

2.2.1 色譜條件：Diamonsil C18色譜柱(250mm*4.6mm，250μm)；流動相：甲醇(A)-0.2moL·L-1醋酸銨溶液(B)-冰醋酸(C)(66:33:1)；流速：1.0mL·min-1;檢測波長：250nm；柱溫：25℃；進樣量：20μl。

2.2.2 溶液的制備

2.2.2.1 對照品溶液：取甘草酸單銨對照品10.215mg于50mL容量瓶中，精密稱定，加甲醇配成204.3μg·mL-1的對照品溶液(甘草酸單銨對照品20μg，折算成甘草酸19.32μg)。

2.2.2.2 供試品溶液： 精密量取烏珠莫口服液2.0mL，置于水浴上蒸干，加入甲醇使溶解、定容、濾過，取續濾液作為供試品溶液。

2.2.3 系統適應性試驗： 取對照品溶液、供試品溶液適當稀釋在上述色譜條件進樣25μL，得HPLC圖譜，結果見圖1?？芍什菟釂武@保留時間約為12.7min，基線平穩，甘草酸單銨與其它組分分離較好，理論塔板數以甘草酸單銨計算為3000。

2.2.4 線性關系考察： 精密稱取“2.2.2”項下的甘草酸單銨對照品貯備液加甲醇稀釋成質量濃度為4.086μg·mL-1、8.172μg·mL-1、16.344μg·mL-1、32.688μg·mL-1、49.032μg·mL-1、65.376μg·mL-1的一系列對照品溶液，按2.2.1項下色譜條件進行測定，以峰面積積分值為縱坐標、樣品質量濃度為橫坐標繪制標準曲線。結果表明甘草酸單銨進樣濃度在4.086～65.376μg·mL-1范圍內與峰面積線性關系良好。回歸方程為Y=22.87X-112.9(r=0.9998)

2.2.5 精密度試驗： 取上述甘草酸對照品貯備液按上述色譜條進行測定6次，記錄峰面積A，計算RSD值，結果RSD值為1.38% ，說明該儀器精密度良好。

2.2.6 穩定性試驗： 取供試品溶液，分別在0h，2h，4h，8h，12h，24h進樣，連續測定甘草酸的峰面積A，計算RSD值為0.85%，表明供試品液在24h內穩定。

2.2.7 回收率試驗： 取甘草酸對照品溶液6份，各加入當量的甘草酸對照品，甲醇定容至刻度HPLC測定，計算平均回收率101.8%，RSD為0.45%(n= 6)。說明該方法穩定性良好。

2.3 制備工藝的單因素試驗

2.3.1 溶劑用量對烏珠莫口服液中甘草酸的影響： 以水為提取溶劑，加水量分別是藥材量的6倍，8倍，10倍，12倍，14倍，16倍，18倍，20倍，按照2.1項下制備方法操作，HPLC測定烏珠莫口服液中甘草酸的含量。結果見圖2。

由圖2可知，在加水量10倍以上時，烏珠莫口服液中甘草酸的含量變化不大，故選擇加水量10倍，12倍，14倍為正交試驗加水量因素的3個水平。

2.3.2 提取次數對烏珠莫口服液中甘草酸的影響 固定溶劑用量為10倍量水，提取次數分別為1次、2次、3次、4次、5次，按照2.1項下制備方法操作，HPLC測定烏珠莫口服液中甘草酸的含量。結果見圖3。

由圖3可知，提取次數對烏珠莫口服液中甘草酸的含量影響變化并沒有明顯趨勢范圍，故選擇提取次數為1、2、3次作為正交試驗提取次數因素的3個水平。

2.3.3 醇沉濃度對烏珠莫口服液中甘草酸的影響 ： 固定溶劑用量為10倍量水，提取次數為3次，按照2.1項下制備方法操作，醇沉濃度分別為40%、50%、60%、70%、80%、90%，HPLC測定烏珠莫口服液中甘草酸的含量。結果見圖4。

由圖4可知，醇沉濃度對烏珠莫口服液中甘草酸的含量影響較大，當醇沉濃度大于70%時，甘草酸含量明顯下降，可能是大量沉淀包裹有效成分所致，而醇沉濃度為40%時沉淀較少，口服液較渾濁，說明雜質較多；故選擇醇沉濃度為50%、60%、70%作為正交試驗因素的3個水平。

2.3.4 pH對烏珠莫口服液中甘草酸的影響： 固定溶劑用量為10倍量水，提取次數為3次，按照2.1項下制備方法操作，醇沉濃度為60%，HPLC測定烏珠莫口服液中甘草酸的含量。結果表明隨pH值增加，甘草酸含量下降，當pH超過6.0時，藥液顏色明顯加深且有沉淀產生，說明pH值高藥液不穩定。因此將pH值定為5.0～6.0為宜。

2.4 正交試驗設計[3]：烏莫口服液制備工藝中，將提取揮發油后剩余藥渣與剩余處方量的藥的后續制備工藝采用正交試驗設計優化。在單因素考察的基礎上，選擇提取次數，溶劑用量、醇沉濃度、pH為烏珠莫口服液的提取工藝影響因素。并對每個因素設立3個水平，因素水平見表1，按正交試驗表L9(34)安排試驗，試驗設計及結果見表2，方差分析見表3。

表1 烏珠莫口服液制備工藝優選因素水平表

表2 烏珠莫口服液制備工藝正交試驗設計表

表3 甘草酸含量方差分析表

由表2極差可知，各因素對烏珠莫口服液中甘草酸含量的影響由大到小的順序依次為B>C>A>D；由表3方差分析表明，因素B、C對甘草酸含量的影響差異有統計學意義，因此，因素B選擇2水平、因素C選擇3水平，因素A、D對甘草酸含量的影響差異無統計學意義，從節約成本考慮，溶劑用量選低水平，從單因素考察考慮口服液穩定性，因素D選5.0；優選水平組合為A1B2C3D1。即：烏珠莫口服液最佳制備工藝為加10倍量水提取，提取次數為2次，醇沉濃度為70%，調節pH至5.0。

2.5 驗證試驗： 按處方量稱取藥材，按優選的制備工藝進行3次驗證試驗，結果甘草酸的含量分別為1004.61 mg·L-1、1097.25 mg·L-1、1113.78 mg·L-1，說明該優選的工藝穩定可行。

3 討論

烏珠莫口服液由甘草、紅花、石榴皮、木香、沙棘、梔子、白葡萄干、香附、石膏、肉桂10味藥材組成的口服制劑，其中甘草為主藥且用量較大，因此選取測定甘草酸的含量作為制備工藝考察指標。實驗過程發現pH值會影響口服液的澄清度，一般口服液pH值在5～6.5時，其外觀質量和口感均較好，本品因含沙棘果實等，果酸含量較多，pH較低(調節前實際測得4.2左右)，口感和穩定性差；口服液的相對密度應多在1.03～1.20(25℃)，大于1.20時口服液比較濃稠[4,5]，本實驗制備的烏珠莫口服液的相對密度為1.07，粘稠度適中。

應用優化的工藝制備的烏珠莫口服液外觀紅棕色，澄明度較好，熱壓滅菌后，室溫下放置4wk后，沉淀較少。

[1]內蒙古蒙藥制劑規范注釋一部.[S].2007

[2]中國藥典一部.[S].2015

[3] 斯欽,代那音臺,王青虎.蒙藥皂礬三味漱口液的提取工藝的研究[J].時珍國醫國藥,2013(12):2910-2913.

[4]金國泰,李博,代龍.改善中藥口服液澄清度工藝研究進展[J].遼寧中醫藥大學學報,2013.15(12):245-247

[5]俞泉淑,蔣延明.中藥口服液的制備工藝及澄明度的影響因素[J].長春中醫學院學報,1995.11(49):53-54

宋曉玲(1978-)，女，碩士，講師，研究方向為中蒙藥制劑與質量控制研究。Tel:13664874586 E-mail:songxiaoling0205@163.com

*通訊作者 劉全禮(1963-)，男，碩士，教授，研究方向為中藥制劑研究。Tel:13604720421 E-mail:lql04720421@sina.com

R291.2

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1006-6810(2017)05-0070-03

2017年1月9日收稿