鴨2型腺病毒感染導致番鴨“肝白化病”的研究

陳仕龍，俞 博，肖世峰，江 斌，程曉霞，林鋒強，王 劭，朱小麗，黃梅清，陳秀琴，陳少鶯*

(1.福建省農業科學院畜牧獸醫研究所， 福建省畜禽疫病防治工程技術研究中心 350013； 2.福建農林大學動物科學學院)

鴨2型腺病毒感染導致番鴨“肝白化病”的研究

陳仕龍1，俞 博2，肖世峰1，江 斌1，程曉霞1，林鋒強1，王 劭1，朱小麗1，黃梅清1，陳秀琴1，陳少鶯1*

(1.福建省農業科學院畜牧獸醫研究所， 福建省畜禽疫病防治工程技術研究中心 350013； 2.福建農林大學動物科學學院)

2015年以來，福建省番鴨飼養區的雛番鴨群流行一種以肝臟腫大、顏色變淡呈黃白色、表面有斑駁狀或散在點狀出血點為特征的疫病，俗稱番鴨“白肝病”“肝白化病”。經流行病學調查、病原排查和分離病毒人工感染試驗，初步表明該病病原為鴨2型腺病毒。

雛番鴨；鴨新型腺病毒；肝白化病

2015年以來，在福建省南平市、漳州市、莆田市及廣東省番鴨飼養區的雛番鴨流行一種以肝臟腫大、顏色變淡呈黃白色、表面有斑駁狀或散在點狀出血點為主要特征的新疫病，俗稱番鴨“肝白化病”“白肝病”。病因不明，現有藥物、疫苗和免疫制劑無防治效果，給番鴨養殖戶造成很大的經濟損失。本團隊從病死鴨臟器勻漿中分離到多株病毒，并經人工感染、流行病學調查和病原排查等方面進行研究，初步證實該病是由一種有別于EDSV和禽腺病毒血清4型的新型鴨腺病毒感染導致的。現將該病毒診斷結果報道如下。

1 流行病學調查

番鴨“肝白化病”在臨床上只發生于番鴨，其他品種鴨未見發病，發病日齡10～40 d，以20～30 d多見。出現臨床病癥后1、2 d開始出現死亡，隨著病情的發展，發病率和死亡率日趨升高，在第5～10 d死亡達到高峰，而后逐漸減少，病程持續10～15 d。總體發病率20%～50%，日均死亡率1%～3%，總體死亡率10%～50%。發病率和死亡率高低與繼發感染和鴨場管理水平密切相關，尤其飼養管理差且發病后使用氟苯尼考、磺胺藥、強力霉素等藥物的鴨群，其發病率和死亡率較高，部分病例能檢測到番鴨小鵝瘟的混合感染。傳染源為病鴨、帶毒鴨及其糞便污染物，該病一年四季均可發生，以春秋兩季多見，目前該病在福建省和廣東省番鴨飼養地區普遍流行。

2 臨床癥狀和剖檢變化

病鴨表現為精神萎頓、縮頭弓背、食欲減少或廢絕、拉黃白色稀糞，發病后1、2 d開始出現死亡。病死鴨膘情尚好，剖檢可見肌肉蒼白，肝臟腫大、呈黃褐色或黃白色、質地較脆(圖1 A)；脾臟有不同程度的腫大(圖1 D)，膽囊腫大，有些可見點狀壞死；腎臟腫大，表面有不同程度的出血點或出血斑(圖1 E)，法氏囊萎縮變小。病情中后期，肝臟表面有散在出血點或出血斑(圖1 B、C)，有些肝臟表面出現大小不等的壞死點或壞死斑，長骨骨髓呈黃褐色。

圖1 臨床病死鴨的剖檢病變注：A、B、C為肝臟腫大、散在出血點；D為脾臟腫大；E為腎臟腫大、出血。

3 病原檢測

3.1 IFA檢測

取病死番鴨肝、脾等組織制備冰凍切片，應用本研究室制備的特異性單克隆抗體進行IFA檢測，結果表明部分病料番鴨小鵝瘟呈陽性反應，其他病原(番鴨細小病毒、番鴨呼腸孤病毒、新型鴨呼腸孤病毒、鴨副粘病毒、禽坦布蘇病毒)檢測均為陰性。

3.2 PCR檢測

應用實驗室建立的鴨病毒性肝炎(DHAV1和DHAV3)、番鴨細小病毒、番鴨呼腸孤病毒、新型鴨呼腸孤病毒、鴨副粘病毒、禽坦布蘇病毒的RT-PCR或PCR檢測方法對送檢的60多份病料進行檢測，結果僅有少量病料出現番鴨小鵝瘟、番鴨呼腸孤病毒陽性。

根據GenBank數據庫中鴨2型腺病毒法國GR 株(登錄號：NC_024486.1 )和廣東CH-GD-12-2014 株(登錄號：KR135164.1 )的22K蛋白核苷酸序列設計引物并進行PCR擴增(引物序列為F:CGAGGACACGTATTCGGAGG；R:CGCCCGTAGTATGCCAAGAT)，預期擴增片段為396bp。PCR檢測絕大部分病料均為鴨2型腺病毒陽性，陽性率達92%，取陽性PCR產物送測核苷酸序列，其核苷酸序列與CH-GD-12-2014株和GR株的同源性分別為90%～100%和88%～90%，與產蛋下降綜合征病毒(EDSV-76)和禽腺病毒4型(FAV-4)的同源性很低。

4 病毒分離

將PCR檢測為鴨2型腺病毒陽性的病料，制備勻漿，取上清接種11日齡番鴨胚后，分離到多株病毒，經PCR檢測均為鴨2型腺病毒陽性，分離毒不能凝集雞紅細胞，其中1株命名為FJ034-DAdV-2，用于人工感染試驗。

5 人工感染試驗

7日齡雛番鴨注射FJ034-DAdV-2，感染后3 d開始發病，表現為精神沉郁、吃料減少、打堆、拱背、羽毛蓬松，感染后4 d死亡1羽，4～6 d再現死亡高峰。死亡鴨多見嘴角出血(圖2 A)，剖檢死亡鴨肝臟顏色變淡(黃白色或淡黃色)、表面有大量散在出血點(圖2 C、D、E)；脾臟腫大(圖2 G)；腎臟腫大，顏色發黃，有B出血(圖2 I)；法氏囊萎縮(圖2 K)。人工感染鴨出現與臨床相似的病癥和剖檢病變。與攻毒鴨同居感染的雛番鴨也能發病和死亡。同時，將人工感染病死鴨肝脾勻漿接種11日齡番鴨胚，能從死胚尿囊液中回收到相同病毒。

圖2 人工感染鴨的剖檢病變注：A為病死鴨嘴角出血；B、F、H、J為正常鴨肝臟、脾臟、腎臟和法氏囊；C、D、E為病死鴨肝臟發白、出血；G為病死鴨脾臟腫大；I為病死鴨腎臟出血；K為病死鴨法氏囊萎縮。

6 討論

福建省是全國番鴨的主產區，根據養殖戶反饋和調查結果，該病近年來在福建省大面積流行，病因不明，給養殖戶帶來巨大損失。本團隊采集了60多份典型病料，經病原分離、動物回歸、PCR檢測、流行病學調查和病原排查，初步研究結果表明，該病與鴨2型腺病毒感染密切相關。

鴨2型腺病毒感染最早出現在法國番鴨養殖場[1]，從消瘦、坡腳和急性死亡的1月齡番鴨中分離到1株與現有血清型都不同的鴨腺病毒，命名為鴨2型腺病毒，但由于沒有病毒基因序列數據，確切的分類地位存在爭議。Ana Marek等采用高通量測序技術獲得了法國株的全基因序列[2]。接著國內學者在雛番鴨急性死亡、肝臟出血和發黃的病料中檢測到鴨2型腺病毒，并獲得了病毒全基因序列[3-5]。本研究從福建省多個肝白化病死雛番鴨病料中分離到多株鴨2型腺病毒，PCR產物的測序表明FJ034-DAdV-2分離株的22K蛋白核苷酸序列與廣東株CH-GD-12-2014 和法國株GR的同源性分別為99%～100%和88%～90%。腺病毒為線狀雙股 DNA 病毒，26～45 kbp，周鎮海等發現廣東CH-GD-12-2014株有fiber-1和fiber-2兩個基因，而法國 GR 株只有1個fiber基因[6]，因此FJ034-DAdV-2的確切分類定位還有待主要基因序列和其他生物學特性的進一步鑒定。

[1]BOUQUET J F,MOREAU Y,MCFERRAN J B,et al.Isolation and characterisation of an adenovirus isolated from Muscovy ducks[J].Avian Pathology Journal of the Wvpa.1982,11(2):301.

[2] MAREK A, KAJáN GL, KOSIOL C, et al. Complete genome sequences of pigeon adenovirus 1 and duck adenovirus 2 extend the number of species within the genus Aviadenovirus[J].Virology,2014,462-463(1):107-114.

[3]ZHANG X, ZHONG Y, ZHOU Z, et al.Molecular characterization, phylogeny analysis and pathogenicity of a Muscovy duck adenovirus strain isolated in China in 2014[J].Virology,2016,493:12.

[4]陳峰,招麗嬋,覃健萍,等.應用宏基因組學鑒定國內第一株鴨2型腺病毒[J].中國預防獸醫學報，2015，37(12):903-907.

[5]陳亮,黃路生，劉曉文，等.鴨2型腺病毒的分離鑒定及hexon基因的序列分析[J].中國獸醫科學，2016(12)：1538-1542.

[6]周鎮海.鴨腺病毒3型基因組序列分析及致病性研究[D].廣州：華南農業大學， 2016.

Primarystudyonduckadenovirus2infectionresultedinMuscovyducklings’paleliverdisease

CHEN Shi-long1, YU Bo2, XIAO Shi-feng1, JIANG Bin1, CHENG Xiao-xia1, LIN Feng-qing1,WANG Shao1, ZHU Xiao-li1, HUANG Mei-qing1, CHEN Xiu-qin1, CHEN Shao-ying1*
(1.InstituteofAnimalHusbandryandVeterinaryMedicine,FujianAcademyofAgriculturalSciences;FujianAnimalDiseasesControlTechnologyDevelopmentCenter, 350013;2.CollegeofAnimalSciences,FujianAgricultureandForestryUniversity)

Since 2015, an unknown epidemic disease was being emerged in Muscovy duck flocks in Fujian Province of China. The dead ducklings’ livers were swelling, brittle and pale, scattered much hemorrhagic spot on the surface， This disease was named “Pale liver disease” according the autopsy features. Basing on etiology screening, epidemiological investigation and artificial infection studies, the pathogen of this disease was a duck adenovirus 2-related adenovirus, which is different from EDSV and avian adenovirus serotype 4.

Muscovy duckling; new duck adenovirus; liver albinism

陳仕龍，男，1979年生，博士，副研究員。

并列第一作者：俞博，男，1991年生，碩士研究生。

*通訊作者：陳少鶯，女，1962年生，碩士，研究員

(E-mail:chensy58@163.com)。

福建省農業科學院青年英才項目(YC2016-1)；福建省農業科學院創新團隊項目(2016PI-6)。

10.13651/j.cnki.fjnykj.2017.08.001

(責任編輯：林玲娜)