赤芍藥材中芍藥苷含量測定方法的改進(jìn)

張 艷 ，申麗莎 ，楊 帆 ，王禎旭 ，鄧開英

（1．重慶市中藥研究院，重慶 400061； 2．重慶市食品藥品檢驗(yàn)檢測研究院，重慶 401121；3．重慶市藥物過程與質(zhì)量控制工程技術(shù)研究中心，重慶 401121）

赤芍藥材中芍藥苷含量測定方法的改進(jìn)

張 艷1，申麗莎1，楊 帆2，3，王禎旭2，3，鄧開英2，3

（1．重慶市中藥研究院，重慶 400061； 2．重慶市食品藥品檢驗(yàn)檢測研究院，重慶 401121；3．重慶市藥物過程與質(zhì)量控制工程技術(shù)研究中心，重慶 401121）

目的對測定赤芍藥材中芍藥苷含量的高效液相色譜（HPLC）法進(jìn)行優(yōu)化。方法色譜柱采用Waters SunFire C18柱(150mm×4．6mm，5 m)，以乙腈－0．1% 磷酸（14 ∶86）為流動相，流速為 2．0mL ／min，檢測波長為 230 nm。結(jié)果芍藥苷進(jìn)樣量在 0．06104 ～1．2208 g范圍內(nèi)與峰面積積分值線性關(guān)系良好（r＝0．9999），平均加樣回收率為97．65%，RSD為1．47%（n＝6）。結(jié)論該方法簡便，快速，結(jié)果準(zhǔn)確，可用于赤芍藥材的質(zhì)量控制。

赤芍藥材；芍藥苷；高效液相色譜法；含量測定

赤芍為常用中藥，具有清熱涼血、散瘀止痛的功效，主治熱入營血，溫毒發(fā)斑，吐血衄血，目赤腫痛，肝郁肋痛，經(jīng)閉痛經(jīng)，跌撲損傷，癰腫瘡瘍[1]。赤芍收載于2015年版《中國藥典（一部）》，在歷版藥典中均采用甲醇－0．05mol／L磷酸二氫鉀溶液（40∶65）為流動相測定其中芍藥苷含量，該流動相含緩沖鹽，對儀器系統(tǒng)和色譜柱損傷較大；供試品溶液制備樣品0．5 g需采用甲醇浸泡4 h后再超聲處理30 min。參照2015年版《中國藥典（一部）》白芍藥材含量測定項(xiàng)下芍藥苷含量測定方法，經(jīng)試驗(yàn)研究，對赤芍中芍藥苷含量測定方法進(jìn)行了改進(jìn)，優(yōu)化流動相的組成，簡化供試品溶液制備方法，為完善赤芍的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，并與白芍藥材含量測定方法統(tǒng)一提供參考。現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

1．1 儀器

Agilent－1100型高效液相色譜儀（美國Agilent公司）；BP211S型電子天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）；Simplicity－185型超純水機(jī)（美國 Millipore公司）。

1．2 試藥

芍藥苷對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號為110736－201035，含量為 96．5%）；赤芍藥材(3 批，重慶市中藥飲片廠有限公司、鑫斛藥莊、重慶桐君閣大藥房各1批），經(jīng)重慶市食品藥品檢驗(yàn)檢測研究院楊帆副主任中藥師鑒定，均為毛茛科植物芍藥 Paeonia lactiflora Pall．的干燥根；乙腈（色譜純，美國 Fisher公司），水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Waters SunFire C18柱（150 mm × 4．6 mm，5 μm）；流動相：乙腈－0．1% 磷酸（14 ∶86）；流速：2．0 m L ／min；檢測波長：230 nm；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：10μL。在此色譜條件下，供試品溶液中芍藥苷色譜峰分離良好。色譜圖見圖1。

2．2 溶液制備

稱取芍藥苷對照品0．01265 g，精密稱定，置100m L容量瓶中，加50%乙醇溶解并定容，作為對照品貯備液；精密量取該貯備液5 mL，置 10 m L容量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液。取赤芍藥材，粉碎，研細(xì)，取0．1 g，精密稱定，置50mL容量瓶中，加稀乙醇35mL，超聲處理30min，放冷，加稀乙醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

圖1 高效液相色譜圖

2．3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：取2．2項(xiàng)下對照品溶液，分別進(jìn)樣1，5，10，15，20 μL，測定峰面積。以進(jìn)樣量（C，μg）為橫坐標(biāo)、峰面積積分值(A)為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 A＝1141．98C ＋1．921，r＝0．9999(n＝5)。結(jié)果表明，芍藥苷進(jìn)樣量在0．06104～1．2208μg范圍內(nèi)與峰面積積分值線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn)：精密吸取2．2項(xiàng)下對照品溶液10μL，連續(xù)進(jìn)樣測定 5次，記錄峰面積。結(jié)果的 RSD為1．04%(n＝5)，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取新制備的同一供試品溶液，分別于0，2，4，8，12 h 時進(jìn)樣測定，每次 10 μL，記錄峰面積。結(jié)果的 RSD為 1．18%(n＝5)，表明供試品溶液在 12 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批赤芍樣品，分別按2．2項(xiàng)下方法共制備供試品溶液6份，測定芍藥苷含量。結(jié)果平均含量為2．0%，RSD為1．46%(n＝6)，表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：稱取已含量的同一批赤芍樣品（同重復(fù)性試驗(yàn)樣品）0．05 g，共6份，精密稱定，分置50m L容量瓶中，分別精密加入對照品溶液適量，按2．2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，測定，計算回收率。結(jié)果見表1。

表1 芍藥苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）

2．4 樣品含量測定

取3批赤芍藥材，分別按本研究中擬訂的改進(jìn)方法和2015年版《中國藥典（一部）》收載方法測定，結(jié)果芍藥苷的含量分別為 2．0% ，2．2% ，2．5% ，以及 2．1% ，2．3% ，2．4% ，兩者結(jié)果基本一致。

3 討論

流動相選擇：文獻(xiàn)[2－14]報道，高效液相色譜（HPLC）法測定中藥芍藥苷含量的流動相系統(tǒng)有乙腈－0．1%磷酸溶液、乙腈－水、甲醇－水、甲醇－0．1%磷酸溶液、甲醇－0．05mol／L磷酸二氫鉀溶液等。本研究中主要比較了《中國藥典》赤芍藥材含量測定用流動相（甲醇－0．05 mol／L磷酸二氫鉀溶液）和《中國藥典》白芍藥材含量測定用流動相（乙腈－0．1%磷酸溶液），結(jié)果赤芍藥材中芍藥苷色譜峰均達(dá)到基線分離，峰形良好，但乙腈－0．1% 磷酸溶液（14 ∶86）組成簡單，不含緩沖鹽，利于色譜柱和儀器系統(tǒng)的保護(hù)，故選定為流動相。

供試品溶液制備方法的考察：減少赤芍藥材的取樣量，制備溶劑由甲醇改為稀乙醇（降低毒性），經(jīng)過對提取時間進(jìn)行考察發(fā)現(xiàn)，樣品經(jīng)超聲提取30min，已將樣品中芍藥苷提取完全。

采用改進(jìn)后的方法測定3批赤芍藥材中芍藥苷的含量，結(jié)果與《中國藥典》方法測定結(jié)果一致，色譜峰經(jīng)二級管陣列檢測器（DAD）檢測，樣品中芍藥苷色譜峰與芍藥苷對照品色譜峰紫外光（UV）光譜一致。

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[4]楊慈海，范常龍．高效液相色譜法測定斑禿丸中芍藥苷的含量[J]．海峽藥學(xué)，2014，26 （3）：45．

[5]趙 劍，陳玉蘭，蒲清榮，等．茵陳四苓顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J]．中成藥，2014，36（4）：763．

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Improvement of the Determination Method of Paeoniflorin in Radix Paeoniae Rubra

Zhang Yan1， Shen Lisha1， Yang Fan2，3， Wang Zhenxu2，3， Deng Kaiying2，3
（1．Chongqing Academy of Chinese Materia Medica， Chongqing， China 400061； 2．Chongqing Institute for Food and Drug Control， Chongqing，China 401121； 3．Chongqing Engineering Center for Pharmaceutical Process and Quality Control，Chongqing，China 401121）

Objective To improve the HPLC method for the content determination of paeoniflorin in Radix Paeoniae rubra．Methods The Waters SunFire C18column（150 mm ×4．6 mm，5 μm） was adopted with the mobile phase of acetonitrile－0．1% phosphoric acid（14 ∶86），the flow rate was 2．0 m L ／min，and the detection wavelength was 230 nm．Results The linear range of paeoniflorin was 0．06104－1．2208 μg（r＝0．9999），the average recovery was 97．65% ，the RSD was 1．47% （n ＝ 6）．Conclusion The method is simple，rapid and accurate，which can be used for the quality control of Radix Paeoniae rubra．

Radix Paeoniae rubra；paeoniflorin；HPLC；content determination

R284．1;R282．6

A

1006－4931(2017)24－0028－03

10．3969 ／j．issn．1006－4931．2017．24．009

張艷，女，副研究員，研究方向?yàn)橹兴幉囊?guī)范化種植、組織培養(yǎng)、基地建設(shè)規(guī)劃、中藥質(zhì)量控制等，（電子信箱）cqzy01＠163．com。

鄧開英，女，主任藥師，研究方向?yàn)樗幤焚|(zhì)量控制，（電子信箱）dengkaiying6811＠sina．com。

2017－08－11)