醋酸纖維薄膜電泳法分離蛋白質實驗材料比較

武 洋，李顏敏

（1.甘肅醫學院，甘肅 平涼 744000；2.南方醫科大學，廣東 廣州 510515）

醋酸纖維薄膜電泳法分離蛋白質實驗材料比較

武 洋1，李顏敏2

（1.甘肅醫學院，甘肅 平涼 744000；2.南方醫科大學，廣東 廣州 510515）

在醫學院校，醋酸纖維薄膜電泳實驗以其分離速度快、區帶清晰、操作簡單等優點，深受教師的歡迎，很多學校都有此項實驗。但人血清存在致病風險，近年來，醫學院校因學生操作失誤等原因，造成學生感染疾病的事件屢見不鮮，本實驗選擇兔血清和雞蛋卵蛋白兩種實驗材料，與人血清做出的實驗結果進行對比。最終認為兔血清作為實驗材料更接近人血清做出的結果，并具有一定的安全性，因此，兔血清是本實驗較為理想的實驗材料。但如果是藥學等專業，只學習電泳技術，雞蛋卵蛋白比較好制備，也是一個較好的實驗材料。

醋酸纖維薄膜電泳法；蛋白質；實驗材料

醋酸纖維薄膜電泳可將人血清蛋白分為：清蛋白、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白和γ-球蛋白5條區帶，固定染色之后，可看到清晰的色帶，還可用光密度計掃描進行定量測定，計算出各種蛋白的構成百分比。

由于試劑盒中的標準血清做出的效果不好，不能清晰地看到5條區帶，因此，該實驗必須采用人血清。眾所周知，人血清存在致病風險，近年來，醫學院校因學生操作失誤等原因，造成學生感染疾病的事件屢見不鮮，因此，選擇一種能與人血清做出實驗結果相近又較為安全的材料，是醫學院校教師較為關注的一個問題。

本實驗選擇了兔血清和雞蛋卵蛋白兩種實驗材料，與人血清做出的實驗結果進行對比，現介紹如下。

1 實驗流程

1.1 實驗儀器

DYY－6C型電泳儀、DYCP－388型電泳槽（北京市六一儀器廠）、乙酸纖維素薄膜（2×8 cm，厚度約100 μm，臺州市路橋四甲生化塑料廠），鉛筆，尺子，燒杯，濾紙，鑷子。

1.2 實驗試劑

巴比妥－巴比妥鈉緩沖液（pH8.6，離子強度 0.06）；偶氮胭脂紅染液（偶氮胭脂紅B0.75 g，加甲醇50 ml、醋酸 10 ml、加蒸餾水40 ml混勻）；漂洗液（乙醇45 ml、冰乙酸5 ml、蒸餾水50 ml，混勻）；透明液（石蠟）。

1.3 實驗材料

人血清、兔血清、雞蛋清（1倍蒸餾水稀釋）。

1.4 實驗步驟

本實驗參照了韓昌洪[1]、薛莉珠[2]和北京大學生物系生物化學教研室[3]的實驗方法。

將浸泡了20分鐘的乙酸纖維素薄膜在粗糙面一端1.5 cm處畫上點樣線，將3種樣品分別點在3個薄膜的點樣線上，倒置于紗布做成的鹽橋上，點樣端至于負極，并與鹽橋有一定距離，待平衡好后，接通電源，電壓選擇150 V，時間為50分鐘。

電泳結束后，關閉電源，取出薄膜，在染色液中浸泡5分鐘，取出用漂洗液洗至背景無色，再用蒸餾水浸泡。

2 實驗結果

3種樣品的實驗結果見圖1。

圖1 3種材料電泳圖譜

從圖1中可以看出，應用醋酸纖維膜電泳法可將人和兔血清蛋白質分為5條區帶，從正極到負極依次為清蛋白、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白和 γ-球蛋白[4-5]。經過漂洗、透明后以雞蛋清作為材料的薄膜上呈現清晰的5～6條區帶，由正極起依次為清蛋白、T1-球蛋白、T2-球蛋白、U1-球蛋白、U2-球蛋白、V-球蛋白[6]。

3 結語

通過實驗結果可以看出，兔血清作為實驗材料更接近人血清做出的結果，而且兔子是醫學院校常用動物，比較常見，具有一定的安全性，因此，兔血清是本實驗較為理想的實驗材料。但如果是藥學等專業，只學習電泳技術，雞蛋卵蛋白比較好制備。

[1]韓昌洪．生物化學[M]．北京：人民衛生出版社，2005．

[2]薛莉珠．生物化學實驗[M]．北京：中國醫藥科技出版社，1998．

[3]北京大學生物系生物化學教研室．生物化學實驗指導[M]．北京：高等教育出版社，1986．

[4]丁正梁，舒家模，王楠田，等．各種實驗動物的血清蛋白電泳值[J]．上海實驗動物科學，1984，4（1）：43-47．

[5]陳書明，曹新鵬，胡軍，等.6種血清的醋酸纖維素薄膜電泳分析[J]．山西農業科學，2010（6）：18-20．

[6]董彩霞，黃建華，祝勇，等.醋酸纖維素薄膜電泳分離禽卵蛋白質[J]．光譜實驗室，2007，24（5）：800-802．

G424.31

B

1671-1246（2017）24-0084-02