抗心律失常藥丙吡胺的分光光度測定新法

(四川大學華西藥學院，成都 610041)

抗心律失常藥丙吡胺的分光光度測定新法

方梅龍雯

(四川大學華西藥學院，成都 610041)

建立了一種用于抗心律失常藥丙吡胺的分光光度測定新法。此法基于下述4個步驟：(1)丙吡胺分子中的氮原子能與過量四苯硼鈉(Ph4B-Na+)定量反應生成沉淀；(2)濾液中余量的四苯硼鈉(Ph4B-Na+)負一價大陰離子(Ph4B-)與Cu+-2,9-二甲基-1,10-菲羅啉(正一價大陽離子)螯合物生成締合物；(3)這黃色的締合物經異戊醇定量地萃取；(4)在最大吸收波長470納米處相對于參比溶液測定吸光度。在最佳條件下，校正曲線的線性關系良好，線性回歸系數R2=0.9991,遵守比爾定律的濃度范圍是0～2×10-4mol/L的, 丙吡胺。此法用于丙吡胺模擬注射液的測定，其標準加入的回收率范圍為99.76%～100.66%，日內和日間變異系數分別是0.25% 和0.42%。測定3×10-4mmol的 Ph4B-時，≦ 2×10-4mmol量的Na+,K+,Ag+,Mg2+,Zn2+,Co2+,Cd2+,Al3+及≦ 5×10-5mmol量的Ca2+,Sr2+,Ba2+,Fe2+,Fe3+和≦ 5×10-4mmol量的Cl-，NO3-不干擾。而5×10-5mmol量的Cu2+能搶奪Cu+-2,9-二甲基-1,10-菲羅啉螯合物中的2,9-二甲基-1,10-菲羅啉，從而有干擾，但加入鹽酸羥胺將Cu2+還原成Cu+，即可消除此干擾。本法簡便，可靠，未見國內外報道。

抗心律失常藥 丙吡胺(對映體混合物) 分光光度測定法、四苯硼鈉 2,9-二甲基-1,10-菲羅啉 締合物 溶劑萃取

丙吡胺(Disopyramide),別名雙異丙吡胺、吡二丙胺、異脈停、達舒平、諾佩斯(Norpace)、Pythmodan,屬IA類抗心律失常藥，鈉離子通道阻斷劑(抑制劑)，即使鈉離子通道狹窄或關閉，阻止鈉內流。丙吡胺是廣譜抗心律失常藥，比奎尼丁(Qninidine)用途廣，且副作用小。可替代最早用于臨床的奎尼丁和普魯卡因胺(Procainamide)，用于各型早搏，各型心動過速、房顫、房搏等，對伴有某些癥候群的心動過速療效尤佳[1]。

丙吡胺的測定，可用高效液相色譜法[2-11]、傳感器[12,13]毛細管電動色譜[14]等，但高效液相色譜儀價格相對貴許多，根據需要，試用和更換不同色譜柱也并非十分簡便，作為流動相的有機溶劑用量較大。毛細管電泳法更方便，用途也廣[15-17]，但毛細管電泳儀價也貴，且用于分離丙吡胺的對映體更能體現其長處[18-23]。對于丙吡胺總量(對映體混合物)的測定，我們認為分光光度法是最方便的方法之一。因此，新建分光光度法測定丙吡胺總量的方法很必要。但丙吡胺分子中無發色團，不能在可見光區測，只能在紫外光區測，但紫外分光光度計價格相對于可見區分光光度計昂貴，且在紫外區測定所受的干擾成分(包括各種溶劑、雜質等)很多。因此，制定一種能在可見光區測定它的方法是既有實用意義(各種測定方法各有長處和短處及其最佳適用范圍。給相關工作者提供可視實際需要選用的多種方法中之又一種，不斷豐富科技文獻寶庫，是廣受歡迎的)，又有學術意義(如何把看似不可能的狀況轉變為可能？而欲實現這種轉變，需設計和探索出哪些切實的歩驟? 建成的方法用于樣品分析，考察其效果是否令人較為滿意?)的工作。本文即旨在于此。

如何建立一種在可見光區,間接分光光度測定無色藥物丙吡胺的新體系呢?這要作者隨時廣泛掌握分析科學發展動態,知己知彼,并調用多種知識且將它們綜合運用,以解決指定難題。

高鴻院士曾帶領他的研究團隊,用四苯硼鈉標準溶液直接示波滴定多種分子中含氮的藥物,并將其專著寄贈我們兩本[24-26]。

我們從中頗受啟發,并看出三點: (1) 四苯硼鈉可能與所有含氮藥物反應生成沉淀；(2)四苯硼鈉標準溶液與含氮藥物的反應是定量進行的,否則,不能在滴定終點時按四苯硼鈉的消耗量以當量定律計算含氮藥物的含量；(3) 四苯硼鈉標準溶液與含氮藥物的反應是瞬間進行的,否則,不能直接滴定而只能回滴或代滴。

據此, 我們推測四苯硼鈉標準溶液還可能與尚未報道過的其它含氮藥物(例如我們正在研究的丙吡胺)發生定量和快速的反應。

若簡單地將四苯硼鈉標準溶液直接示波滴定含氮藥物含氮藥物,應是很易成功之事,僅增加將四苯硼鈉標準溶液直接示波滴定又一含氮藥物而已。

但我們的目的是只想借鑒四苯硼鈉可能與丙吡胺進行瞬間,定量的反應,卻不用滴定方式完成測定,而設計出以間接分光光度的方式完成含氮藥物丙吡胺的測定。增添一類可供有關人員酌情選用的新方法。為此,可向丙吡胺待測試液中加入定量過量的四苯硼鈉溶液, 瞬間定量反應完成后,分光光度測定剩余四苯硼鈉。由于四苯硼鈉與丙吡胺一樣,分子中不含發色團,也是無色化合物,而紫外分光光度測定受干擾的情況多,因此,需建立可見區分光光度測定法。這關鍵是讓無色的四苯硼鈉 (在其水溶液中電離為四苯硼陰離子和鈉離子)轉變成有色化合物，而希望這種有色化合物也能瞬間,定量生成,且其生色分子的截面積盡量大,使測定的靈敏度盡量高。要達此目的,就讓剩余的四苯硼陰離子與有色的螯合物(比一般配合物穩定得多)大陽離子瞬間,定量地締合成有色的大締合物。再將此大締合物溶解于適宜的有機溶劑或分散于膠束介質中,成為均勻透明的體系,以利于分光光度準確測定。

1 儀器與試劑

1.1 儀器

721分光光度計，四川分析儀器廠出品。

1.2 試劑

(1)丙吡胺標準溶液: 準確稱取丙吡胺固體(美國Sigma公司出品)7.30mg，用去離子水溶解并定容至50mL，濃度為3.34×10-4mol/L。

(2)四苯硼鈉標準溶液: 準確稱取四苯硼鈉固體56.0mg，用20mL去離子水溶解。稱取硝酸鋁固體0.3g，溶于20mL去離子水，用0.1 mol/L氫氧化鈉溶液調節pH至8～9，將此膠狀液體倒入此四苯硼鈉溶液中，過濾，將此濾液調節pH至8～9，用去離子水定容至100mL，用標準硝酸銀溶液標定，得到四苯硼鈉標準溶液，其濃度為3.13×10-3mol/L。

(3)硫酸銅標準溶液: 準確稱取CuSO4.5H2O固體102.10mg,用加有2mL0.1 mol/L稀鹽酸溶液的去離子水溶解并用水定容至100mL，Cu2+濃度為4.09×10-3mol/L。

(4)硫酸高鐵銨標準溶液: 準確稱取硫酸高鐵銨固體1.0038g,置于燒杯中，加入濃硫酸5.0mL溶解，移入已有30mL去離子水的100mL容量瓶中，搖勻后，從容量瓶中倒出少許溶液洗滌燒杯中殘留物，重復一次，倒回容量瓶中，再用去離子水稀釋至容量瓶刻度,搖勻。

(5)1,10-菲羅啉溶液；0.15%溶液。

(6)2,9-二甲基-1,10-菲羅啉溶液: 稱取2,9-二甲基-1,10-菲羅啉固體67.30mg，用5%稀鹽酸溶液溶解后，用去離子水定容至50mL，濃度為6.20 ×10-3mol/L。

(7)2,2-聯吡啶無水乙醇溶液: 稱取2,2-聯吡啶固體678.5毫克，用無水乙醇溶解并定容至50毫升，濃度為 8.688×10-2mol/L。

(8)鹽酸羥胺溶液: ①5%溶液；②稱取鹽酸羥胺固體693.0mg，用去離子水溶解并定容至50mL，濃度為 1.995×10-1mol/L。

(9)抗壞血酸溶液: 5%。

(10)二苯硫巴腙(雙硫腙)儲備溶液: 稱取雙硫腙固體約50mg，用無水乙醇溶解并定容至50mL，濃度為約0.1%。

(11)醋酸-醋酸鈉緩沖溶液: 將0.2 mol/L的醋酸與0.2 mol/L的醋酸鈉溶液，按1:4的體積比混合，制得pH約5.8的緩沖溶液，用去離子水溶解100mL，搖勻。

(12)氯化鈉注射溶液。

(13)阿拉伯樹膠溶液: 1%。

(14)吐溫-80溶液: 5%。

(15)十六烷基三甲基溴化胺溶液: 1%。

(16)曲拉通溶液: 10%。

(17)乙酸乙酯；正丁醇；異丁醇；異戊醇；氯仿。

2 結果與討論

2.1 實驗過程

準確吸取丙吡胺標準溶液進入，加入過量、定量的四苯硼鈉標準溶液，與其反應生成沉淀，干過濾或濕過濾或離心沉降，分離并洗滌此沉淀，洗滌液并入濾液中，向濾液中加入銅(II)或鐵(III)、還原劑鹽酸羥胺或抗壞血酸、N,N-螯合劑(生成溶于水有色的螯合物大陽離子)，使其與剩余的四苯硼鈉陰離子生成不溶于水，而溶于有機溶劑的有色締合物沉淀。加入季銨鹽表面活性劑使締合物沉淀分散成均勻的膠束溶液或加入有機溶劑萃取，使締合物沉淀溶解入有機相中，定容。倒入吸收池中，相對于參比溶液，在有色締合物溶液的最大吸收波長處，測定吸光度。

2.2 實驗條件的優化

由于本法基于待測成分丙吡胺與過量定量的四苯硼陰離子反應后，測定剩余四苯硼陰離子含量，而為要測剩余四苯硼陰離子含量，是利用四苯硼陰離子與螯合物大陽離子瞬間定量生成有色締合物后，分光光度測定所生成此締合物的含量。而測此締合物時的靈敏度和選擇性越高越好。因此，就需優選幾方面的條件。包括：

(1)螯合物大陽離子的選擇;

(2)有機溶劑或表面活性劑的選擇：為便于分光光度法(只適于)測定透明而均勻的體系,就要考慮如何將締合物溶解或分散為均勻體系,即選擇有機溶劑(溶解)萃取方式還是選擇膠束增溶(分散)？就存在選擇什么有機溶劑,或選擇什么表面活性劑.以靈敏度,選擇性,再現性,準確性,簡便性幾方面為標準作選擇標準的問題。

以下便是這一系列試驗的情況.為提高選擇的效率,先作簡便的、初步的定性選擇,在此基礎上大幅度減小了進行定量選擇的工作量。

2.2.1 以定性試驗來選擇

本法中所測定的締合物，是由與待測成分丙吡胺反應后剩余的四苯硼陰離子與有色的螯合物大陽離子生成仍然有色物質。

四苯硼鹽的選擇：常見四苯硼鹽有鈉、鉀、銣、銫、鉈、銨、銀等鹽，其中，四苯硼鈉在水中溶解度較大(8.8×10-1mol/L)。而它的其他一價金屬鹽水中溶解度皆小，小3～4個數量級(×10-4mol/L～10-3mol/L)，因此，四苯硼鈉溶液是測定其他一價金屬的好試劑。也是沉淀含氮有機化合物季銨鹽(生成白色沉淀)的好試劑[3]。但尚無人用它測定丙吡胺。四苯硼鈉在水中完全電離為四苯硼陰離子和鈉離子。設計本方案時就先指定用它，所以，就不用通過實驗來選擇了，丙吡胺是一分子含三個氮原子的有機化合物[1]，本項目就研究四苯硼鈉在測定丙吡胺中的應用。

上述有色物質并不是孤立的，而是存在于顯色體系中。所以，顯色體系包括：一定價數的金屬陽離子(若用高價金屬陽離子，則還要同時用還原劑)、螯合劑、四苯硼陰離子)的選擇是決定性的。

而螯合物大陽離子由中性螯合劑與金屬陽離子(也稱為中心離子)兩部分構成。所以，螯合物大陽離子的選擇，就包括：既要選中性螯合劑(以便它與金屬陽離子生成帶正電荷的螯合物大陽離子，后者才與剩余四苯硼陰離子瞬間定量生成有色的締合物，從而分光光度測定此有色的締合物量，據以計算剩余四苯硼陰離子量。由定量過量加入的四苯硼陰離子總量減去剩余四苯硼陰離子量，即得到與丙吡胺定量反應的四苯硼陰離子量。從而按丙吡胺與四苯硼陰離子反應的比例算出樣品中的丙吡胺含量。實驗后來設計出直接查丙吡胺含量的工作曲線，而不需繁瑣的計算。)又要選金屬陽離子。

(1)中性螯合劑的選擇

世界著名的烏克蘭分析化學家巴布科曾提出: 無色金屬離子與無色絡合劑反應，生成無色絡合物；無色金屬離子與有色絡合劑反應，生成有色絡合物；有色金屬離子與無色絡合劑反應，生成有色絡合物；有色金屬離子與有色絡合劑反應，生成有色絡合物。

1,10-菲羅啉類是很好的中性螯合劑，能與有色的金屬陽離子生成有色的、穩定的螯合物大陽離子，后者很易與四苯硼陰離子瞬間定量生成有色的締合物沉淀。但現還市售有它的類似物2,9-二甲基-1,10-菲羅啉。及其它類似物2,2’-聯吡啶、雙硫腙。在本研究中對它們的效果進行比較是有益的。

1,10-菲羅啉與2,9-二甲基-1,10-菲羅啉兩種中性螯合劑的比較，2,9-二甲基向母體上的加入，提高了選擇性，也增大了分子的摩爾質量，使四苯硼陰離子締合更完全。結果表明：用2,9-二甲基-1,10-菲羅啉為此處的中性螯合劑比所試其它螯合劑更好。

(2)中心離子的選擇

Fe3+、Fe2+、 Cu2+、Cu+均是可被1,10-菲羅啉類和2,2’-聯吡啶類中性螯合劑穩定螯合的中心離子。在本研究中對它們的效果進行比較也是有益的。實驗分別以它們為中心離子，與1,10-菲羅啉、2,9-二甲基-1,10-菲羅啉、2,2’-聯吡啶、雙硫腙組成9種顯色體系。結果表明：Cu+為中心離子更好。

(3)還原劑的選擇

抗壞血酸與鹽酸羥胺的比較：結果表明：以乙酸乙酯萃取時，用抗壞血酸和鹽酸羥胺作還原劑，均可使螯合物大陽離子上層和下層為黃色透明，不帶電的有色締合物上層為黃色透明，下層為無色透明，效果最不好。用正丁醇、或異丁醇萃取時，用抗壞血酸和鹽酸羥胺作還原劑，均可使螯合物大陽離子上層為無色透明，下層為黃色透明，不帶電的有色締合物上層為痕黃色透明，下層為無色透明。異戊醇萃取時，用抗壞血酸和鹽酸羥胺作還原劑，均可使螯合物大陽離子上層為無色透明，下層為黃色透明，而不帶電的有色締合物上層為黃色透明，下層為無色透明。所以，用異戊醇萃取最好。但用抗壞血酸作還原劑不如用鹽酸羥胺作還原劑好，因有機層為半透明，使測得到吸光度比實際值高，且抗壞血酸在空氣中很不穩定，極易被氧化變黃。故選用鹽酸羥胺作還原劑。

(4)緩沖溶液使用的必要性

為避免金屬離子水解為氫氧化物類沉淀，也避免中性螯合劑有效濃度發生變化，此螯合反應宜在近中性的醋酸-醋酸鈉緩沖溶液中進行，不宜在任何介質中進行。

總起來比較，以Cu2+-鹽酸羥胺-2,9-二甲基-1,10-菲羅啉-醋酸-醋酸鈉為選定的顯色體系，

(5)反應物的加入量

為保證待測的丙吡胺被完全反應，在Cu2+-鹽酸羥胺-2,9-二甲基-1,10-菲羅啉-醋酸-醋酸鈉-四苯硼鈉顯色體系中，鹽酸羥胺-2,9-二甲基-1,10-菲羅啉是過量的，保證Cu2+被完全反應，有良好的線性關系。它們對于剩余的四苯硼鈉又都是足夠過量的，保證剩余的四苯硼鈉完全反應。而剩余的四苯硼鈉又對于待測的丙吡胺是足夠過量的，以保證待測的丙吡胺被完全反應生成締合物。所測得的結果才能反映丙吡胺的含量。經試驗和計算，確定測定時應加入過量的各反應物Cu2+、鹽酸羥胺、2,9-二甲基-1,10-菲羅啉、四苯硼鈉的摩爾數比為1∶8∶10∶0.5。

2.2.2 以定量試驗來優選測定條件

2.2.2.1 膠束增溶與溶劑萃取的比較

基于螯合物大陽離子是帶電荷，可溶于水，而不溶于極性弱的有機溶劑中的；不帶電的有色締合物則是不溶于水，而溶于極性弱的有機溶劑中的；借此，用某種有機溶劑萃取，可望將不帶電的有色締合物與余量的帶電荷螯合物大陽離子分離(希望不帶電的有色締合物完全進入有機溶劑，而希望余量的帶電荷螯合物大陽離子完全留在水層中)，避免后者對測定前者時的干擾。

另一方面，表面活性劑卻可將不溶于水的沉淀分散為均勻透明的膠狀體系。操作比有機溶劑萃取更簡單，但表面活性劑在將不溶于水的有色締合物沉淀分散為均勻透明的膠狀體系(顯色試液)時，也使余量的帶電荷螯合大陽離子(應僅存在于空白溶液中，但卻有部分留在顯色試液中)存在于同一膠狀體系中，即不易將余量的帶電荷螯合物大陽離子與不帶電的有色締合物截然分開，造成顯色試液與空白溶液顏色區別小，而對有色締合物的光度測定造成干擾。

為檢驗這兩方式哪種實際效果，實驗試用了陽離子表面活性劑十六烷基三甲基溴化胺、非離子表面活性劑阿拉伯樹膠溶液、吐溫-80溶液曲拉通溶液幾種表面活性劑來分散有色締合物和余量的帶電荷螯合物大陽離子，以及乙酸乙酯、正丁醇、異丁醇、異戊醇、氯仿幾種極性不同的有機溶劑來萃取有色締合物。結果表明：用所試任何表面活性劑效果都不如用所試有機溶劑萃取好。進一步考察了所試幾種有機溶劑的效果，介電常數：異戊醇14.7；乙酸乙酯6.02、正丁醇17.1、異丁醇17.7、氯仿4.8，結果表明異戊醇沸點較高，難揮發，在吸收池中測定時，不必加蓋萃取有色締合物效果最好，與水分層最清楚，萃取層顏色也最穩定，且與氯仿相比，無毒。基于此本實驗未對氯仿效果進行實驗。

2.2.2.2 四苯硼鈉溶液配制方法的比較

本研究中四苯硼鈉起非常重要的作用，但它在水中容易水解，故其水溶液很不穩定。經查閱聊文獻，配制方法有以下4種：

(1)稱取四苯硼鈉固體，直接溶于去離子水中。

(2)稱取四苯硼鈉固體，加入少量氫氧化鈉和去離子水，移入容量瓶中定容。

(3)稱取四苯硼鈉固體，用少量去離子水溶解，加入定量新鮮的氫氧化鋁，攪拌1分鐘，放置片刻，過濾，濾液用0.1N氫氧化鈉調節pH至8～9，加水稀釋定容。

(4)稱取四苯硼鈉固體7.0g，加50mL去離子水，振搖使溶解。加入新配制的氫氧化鋁凝膠，(取三氯化鋁1.0g，溶于25mL水中，在不斷攪拌下，緩緩滴加氫氧化鈉溶液調節pH至8～9)，加氯化鈉16.6g，充分攪勻，加水250mL，振搖15分鐘，靜置10分鐘，過濾，濾液中滴加氫氧化鈉溶液至pH為8～9，再加水稀釋至1000mL，搖勻。此法為藥典所載方法。

在連續幾個時間點，用硝酸銀標準溶液標定對用以上4種配制方法所制得的四苯硼鈉溶液的穩定性進行考察，結果表明上述(3),(4)兩種方法所得四苯硼鈉溶液的穩定性較好。從配制手續簡便上考慮，實驗選用方法(4)配制，然后用硝酸銀標準溶液標定其濃度。

2.2.2.3 締合物沉淀過濾方法的比較

文獻[2、3、4]中對于四苯硼鈉與待測含氮化合物反應生成的沉淀，用干過濾方法(個別地方用吸濾，見該書282頁)處理，即等濃度過濾，再分別量取一定體積的濾液逕行后續實驗，而我們采取濕過濾，即等量過濾過濾，保證了剩余的四苯硼鈉全都進入濾液中，參與后續實驗，兩法各有優缺點。干過濾方法優點是能更好地保證各管的平行操作，且參加反應的濾液體積較小，用于本項測定時，其缺點是因為每管中剩余四苯硼鈉的濃度不同，在量取濾液時，就得使用對應的移液管，不能混淆，故操作較麻煩，為此采取的濕過濾法直接將全部濾液用于實驗，操作較簡便、快速。但為保證剩余四苯硼鈉完全進入濾液，慮完溶液后，就要用定量2.00mL去離子水，沖洗濾紙及試管，這樣就增大了反應液的體積，增加了后面萃取的麻煩。

2.2.2.4 溶劑萃取時間與萃取程度的關系

對以前的文獻報道中，不管其萃取是否完成，實驗僅就所選定的體系在其最佳條件下考察萃取時間與萃取程度的關系。平行作5份，每份的萃取(振搖)時間不同。振搖頻率一律保持每秒2次。結果見表1。

表1 萃取時間與萃取程度的關系

可見，萃取20 至30秒吸光度值已差別不大，即振搖20秒已萃取完全。

2.2.2.5 吸光度與測定時間的關系

加入4.00mL異丁醇萃取有色締合物沉淀，以每秒振搖2次的頻率振搖20秒，使締合物沉淀完全溶入有機相中。立即將此異丁醇有機相吸入吸收池中，相對于參比溶液，在有色締合物異丁醇溶液的最大吸收波長470nm處，于不同時間進行吸光度的測定，結果見表2。

表2 吸光度(470納米處)隨時間的變化

可見，異丁醇萃取后，可在3分鐘至1小時內測定吸光度，相對誤差小于3%。

2.2.2.6 吸收曲線的繪制

對溶劑萃取與膠束增溶分別繪制其最佳條件下波長范圍450～700nm的吸收曲線，對它們的最大吸收波長、對比度、摩爾吸收系數進行比較。最后選定的體系最大吸收波長為470nm，摩爾吸收系數3.86×10-3L·mol-1(圖1)。

(其余各條膠束增溶的吸收曲線、溶劑萃取的吸收曲線在此處從略)圖1 Cu(I)-2,9-二甲基-1，10菲羅啉-異戊醇吸收曲線

2.2.2.7 工作曲線的繪制

(1)測剩余四苯硼陰離子用的工作曲線的繪制：分別繪制了檢測四苯硼陰離子的4種顯色體系的工作曲線。據以比較它們的線性關系范圍．以便從中選擇1種最佳顯色體系，最后選中2,9-二甲基-1,10-菲羅啉-Cu2+-鹽酸羥胺-四苯硼陰離子顯色體系，在此最佳顯色體系下才繪制用于測丙吡胺的工作曲線。

(2)測丙吡胺用的工作曲線的繪制：用2,9-二甲基-1,10-菲羅啉-Cu2+-鹽酸羥胺-四苯硼陰離子顯色體系顯色后，用異戊醇萃取，將此不含丙吡胺的萃取液作測定對象(顏色最深)，而依次用含不同量丙吡胺的異戊醇萃取液分別作參比(顏色依次變淺)，在最大吸收波長測吸光度。

線性回歸系數R2=0.9991

這樣，可由此丙吡胺工作曲線，直接查得試液中丙吡胺含量。而不必從加入的四苯硼陰離子總量減去剩余四苯硼陰離子量(由這樣檢測的吸光度與剩余四苯硼陰離子量成正比。由此工作曲線查出剩余四苯硼陰離子量)的差，來計算丙吡胺含量

2.2.2.8 樣品測定

準確吸取丙吡胺模擬溶液，加入過量、定量的四苯硼鈉標準溶液，與丙吡胺反應生成沉淀，濕過濾，分離并用去離子水充分洗滌此沉淀，將全部洗滌液放在20mL比色管中并入濾液。向此濾液中加入0. 5020mL4.09×10-3mol/L的Cu2+標準溶液、0. 5020mL5%鹽酸羥胺溶液，0. 5020mL醋酸-醋酸鈉緩沖溶液，搖勻，放置1min，使Cu2+完全還原成Cu+，加入1.0020mL6.20 ×10-3mol/L的2,9-二甲基-1,10-菲羅啉溶液(生成橙紅色螯合物大陽離子)，使其與過量(剩余)的四苯硼陰離子生成有色的締合物沉淀。仔細加入去離子水調節液面恰至1020mL刻度線處定容。加入4.0020mL異丁醇萃取，以每秒振搖2次的頻率振搖20s，使締合物沉淀完全溶入有機相中。立即將此異丁醇有機相吸入吸收池中，相對于參比溶液，在有色締合物異丁醇溶液的最大吸收波長470nm處，2～15分鐘內完成吸光度的測定。

2.2.2.9 回收率實驗

準確吸取5.00mL丙吡胺標準溶液，移入10mL量瓶中，用注射用水稀釋至刻度，搖勻。制得丙吡胺人工模擬注射溶液。分別量取丙吡胺人工模擬注射溶液0、1.00、2.00、4.00mL，至4支20mL比色管中，向各管(編號為1、2、3、4)中分別加入1.00mL丙吡胺標準溶液，加入0. 50mL醋酸-醋酸鈉緩沖溶液，1.50mL四苯硼鈉標準溶液，將此含丙吡胺-四苯硼沉淀的渾濁液濕過濾，分離并用去離子水充分洗滌此沉淀，將全部洗滌液放在20mL比色管中并入濾液，加入0. 50mLCu2+標準溶液、0. 50mL5%鹽酸羥胺溶液，搖勻，放置1min后，加入1.00mL6.20 ×10-3mol/L的2,9-二甲基-1,10-菲羅啉溶液。用去離子水調節各管液面恰至10mL刻度線處，用1號管中溶液調吸光度為零，測定2～4號管中溶液調吸光度.。

同上操作，但不加丙吡胺標準溶液。計算回收率= [(丙吡胺標準溶液加入量與丙吡胺人工模擬注射溶液中丙吡胺的總量-丙吡胺人工模擬注射溶液中丙吡胺量)除以已知加入的丙吡胺標準溶液中的丙吡胺量]乗以 100% ，結果見表3。

表3 回收率實驗

2.2.2.10 重現性

平行準確量取5.00mL丙吡胺模擬注射液3份，分為3組。按以上過程，在當天每組都重復操作兩次，取平均值；然后在次日每組再重復操作一次。分別計算出各組的日內和日間相對標準偏差RSD，結果見表4。

表4 本法日內和日間相對標準偏差RSD

2.2.2.11 干擾試驗

在最佳條件下測定，考察外來離子存在的影響。結果表明，測定3×10-4mmol的 Ph4B-時，≦ 2×10-4mmol量的Na+,K+,Ag+,Mg2+,Zn2+,Co2+,Cd2+,Al3+及≦5×10-5mmol量的Ca2+,Sr2+,Ba2+,Fe2+,Fe3+和5×10-4mmol量的Cl-，NO3-不干擾。而5×10-5mmol量的Cu2+能搶奪Cu+-2,9-二甲基-1,10-菲羅啉螯合物中的2,9-二甲基-1,10-菲羅啉，從而有干擾，但加入鹽酸羥胺將Cu2+還原成Cu+，可消除此干擾。

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Newspectrophotometryfordeterminationofantiarrhythmicdisopyramide.

FangMei,LongWen

(CollegeofHuaxiPharmacy,SichuanUniversity,Chengdu610041,China)

It is based on the fellowing four steps：(1)The nitrogen atoms in the disopyramide molecule reacts quantitatively with excessive sodium tetraphenylboron to form precipitate；(2)The residual anion of tetraphenylboron in filtrate forms yellow associate molecule with copperion(I)-2，9-dimethyl phenanthroline chelate in the buffer medium of acetic acid-sodium acetate；(3)The yellow associate moleculeis quantitatively extracted by isoamylol；(4)Then absorbance of the isoamylol extact layer of the yellow associated moleculeis determined in comparision with reference solution at 470 nm．. Under optimum conditions, the coefficient of linear regression is R2=0.9991,the Beer＇s law is obeyed in the concentration range of 0-2(×10-4)mol/L of disopyramide． The method is applicated to determinate isopyramide in the simulated inject solution and the recoveries of standard addition are 99.76%-100.66%．Within- and between-day coefficients of variation are 0.25% and 0.42%, respectively. When determing 3×10-4mmol Ph4B-，under the conditions of ≤2×10-4mmol of Na+,K+,Ag+,Mg2+,Zn2+,Co2+,Cd2+,Al3+,≤5×10-5mmol of Ca2+,Sr2+,Ba2+,Fe2+,Fe3+and ≤5×10-4mmol of Cl-，NO3-does not interference with the results. The method is simple and reliable.

antiarrhythmic;disopyramide(mixture of enantiomers); spectrophotometry;sodium tetraphenyl boron; 2,9-dimethyl-1,10-phenathroline;extraction

國家自然科學基金資助項目，項目編號：20475038。

10.3969/j.issn.1001-232x.2017.06.017

2017-09-21

方梅，四川大學化學系學士，碩士，中國科學院北京化學研究所博士，中國科學院大連化學物理研究所博士后，美國印第安納大學伯明翰分校化學系高級研究學者。先后任華西醫科大學藥學院助教、講師，四川大學華西藥學院副研究員，招收三名碩士生，指導多名本科畢業生和進修教師學術論文，E?mail：abc843@163com。