菖蒲藥材的鑒別研究及含量測定

(1.首都醫科大學附屬北京婦產醫院，北京 100006；2.中國中醫科學院廣安門醫院，北京100053；3.中國中醫科學院中醫基礎理論研究所，北京100700)

菖蒲藥材的鑒別研究及含量測定

馮艷彬1張婷2李淑莉3*

(1.首都醫科大學附屬北京婦產醫院，北京 100006；2.中國中醫科學院廣安門醫院，北京100053；3.中國中醫科學院中醫基礎理論研究所，北京100700)

目的：建立菖蒲藥材中主要成分β-細辛醚、α-細辛醚的HPLC含量測定方法，并對石菖蒲、水菖蒲藥材進行質量評價。方法：采用外標法計算菖蒲藥材中β-細辛醚、α-細辛醚的含量。色譜條件：Zorbax SB-C18(250 mm×4.6 mm，5μm)，流動相：0.1%甲酸水-甲醇(65:35)等度洗脫，檢測波長：257 nm，柱溫：30°C，流速：1 mL·min-1。結果 β-細辛醚含量在0.090 45～1.809 μg范圍內、α-細辛醚含量在0.006 75～0.135 μg范圍內與峰面積呈良好的線性關系，石菖蒲中β-細辛醚、α-細辛醚平均含量分別為2.18%、0.13%，水菖蒲中β-細辛醚、α-細辛醚平均含量分別0.33%、0.04%。結論：應對市場流通中的菖蒲藥材應該進行嚴格的審查鑒別，避免以次充好、影響臨床用藥安全及療效。

菖蒲 含量測定 β-細辛醚 α-細辛醚

菖蒲來源于天南星科植物石菖蒲Acorus tatarinowii Schott 的干燥根莖，為臨床上較常用的芳香開竅藥，具開竅豁痰，醒神益智，化濕開胃之功。用于神昏癲癇[1]，健忘失眠，耳鳴耳聾，脘痞不饑，噤口下痢等癥。始載于《神農本草經》，被列為上品。明代李時珍謂：“菖蒲凡五種……服食入藥須用二種石菖蒲，余皆不堪?！睔v代本草記載和2010版《中國藥典》記載均為天南星科植物石菖蒲的干燥根莖[2]，目前臨床上常用的菖蒲有3種：石菖蒲、水菖蒲、九節菖蒲，而由于各個品種間價格相差懸殊，市場上出現一些藥商將幾種菖蒲混淆出售，以次充好的現象，對于臨床用藥安全造成威脅。

石菖蒲中揮發油含量為0.5～0.9%，其中主要成分為β-細辛醚、α-細辛醚等[3-5]。石菖蒲和水菖蒲揮發油中主要化學成分均有β-細辛醚、α-細辛醚，但它們的2種成分含量有一定差異，而九節菖蒲中主要含有棕櫚酸、琥珀酸、5-羥基乙酰丙酸、β-谷甾醇、銀花素等化合物[6, 7]，其中不含β-細辛醚、α-細辛醚[7]。

在2010年版《中國藥典》中，對石菖蒲的質量要求是測定其總揮發油的總量，不得低于0.1% ml·g-1，此外，對幾種菖蒲的鑒別還有紫外光譜法[8-10]、高效液相色譜法[11, 12]、氣相色譜法[13]、蛋白電泳法[14]、DNA條形碼技術[15]等，其中氣相色譜法主要是對菖蒲中揮發性成分組成進行定性分析和定量分析，液相色譜法主要是對藥材中有效成分進行準確的定量分析。

因此本實驗對多批次的石菖蒲、水菖蒲藥材中β-細辛醚和α-細辛醚進行HPLC含量測定，此方法簡單、準確、可重復性高，可用于菖蒲藥材的質量控制。

1 儀器與試藥

美國Agilent 1100高效液相色譜儀，二級陣列檢測器，1100色譜工作站。

β-細辛醚和α-細辛醚對照品購自中國藥品生物制品檢定所(采用面積歸一化法測定，其含量分別為97.28%、98.03%)；14批石菖蒲、水菖蒲藥材均購自各藥店、藥材公司及藥材市場，上述藥材均已經過鑒定。甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法和結果

2.1 供試品的制備

精密稱取石菖蒲(水菖蒲)粉末(過60目篩)，約0.2 g，置于錐形瓶中，精密加入95%乙醇50 ml，稱重，超聲處理30 min，放冷，補重，過0.45 μm微孔濾膜，進樣。

2.2 對照品溶液的配制

準確配制每1 mL含β-細辛醚0.180 9 mg和α-細辛醚0.054 mg的甲醇混合對照品溶液。

2.3 色譜條件

Zorbax SB-C18(250 mm×4.6 mm，5μm)，流動相：0.1%甲酸水-甲醇(65∶35)等度洗脫，檢測波長：257 nm，柱溫：30℃，流速：1 mL·min-1，對照品和供試品的色譜圖見圖1。

圖1 對照品及供試品HPLC色譜圖A．對照品；B.供試品；1. β-細辛醚；2. α-細辛醚

2.4 方法學考察

2.4.1 線性關系考察

精密吸取上述混合對照品溶液1，2，4，6，8，10，16，20 μL依次進樣，測定峰面積，以峰面積(Y)和進樣量(X)進行回歸，求得β-細辛醚回歸方程為Y=196 9.8X-29.924，r=0.9999，線性范圍0.090 45～1.809 μg，α-細辛醚回歸方程為Y=4168.9X-1.6967，r=0.9999線性范圍為0.006 75～0.135 μg。

2.4.2 精密度實驗

精密吸取上述混合對照品溶液，在上述色譜條件下連續進樣6次，分別測定β-細辛醚和α-細辛醚的峰面積，結果RSD分別為0.56%，0.48%。

2.4.3 重復性實驗

取石菖蒲樣品6份各約0.2 g，精密稱定，制備供試品溶液，在上述色譜條件下測定峰面積，分別測定并計算β-細辛醚和α-細辛醚的含量，結果RSD分別為2.01%，1.83%。

2.4.4 穩定性實驗

取石菖蒲供試品溶液，分別于0、1、2、4、8、10、12、24 h在上述色譜條件下進樣，分別測定β-細辛醚和α-細辛醚的峰面積，結果RSD分別為1.32%，1.57%，表明供試品溶液在24 h內穩定。

2.4.5 加樣回收率實驗

取石菖蒲藥材粉末約0.1 g，精密稱定，根據其中β-細辛醚和α-細辛醚含量，按1∶1比例加入β-細辛醚和α-細辛醚對照品，制備供試品溶液，按上述色譜條件進行測定，計算加樣回收率，結果見表1。

表1 加樣回收率結果

2.5 樣品含量測定

取各批次石菖蒲、水菖蒲藥材制備供試品溶液，進行測定，以外標法計算β-細辛醚和α-細辛醚的含量，結果見表2、圖2。

表2 石菖蒲、水菖蒲藥材中β-細辛醚和α-細辛醚的測定結果(n=3)

圖2 菖蒲樣品的主成分分析

3 討論

(1)在菖蒲藥材提取方法考察中，比較了回流提取和超聲提取兩種方法，二者差別不大，本實驗采用超聲提取法。采用單因素考察法對提取溶劑(95%乙醇、70%乙醇、50%乙醇)、提取時間(15 min、30 min、45 min)、溶劑用量(25 ml、50 ml、100 ml)進行了對比，最后確定的供試品制備方法為取石菖蒲藥材0.2 g，加入95%乙醇50 mL，超聲處理30 min。

(2)歷代本草中有記載“一寸九節”之菖蒲，與現代市場中流通的九節菖蒲為同名異物，因此本實驗對九節菖蒲也進行了測定，九節菖蒲為毛茛科阿爾泰植物銀蓮花Anemone altaica Fisch ex C.A.Mey的干燥根莖，本實驗對收集的6批九節菖蒲樣品同樣進行了HPLC分析，結果顯示，各批次九節菖蒲中均不含有β-細辛醚和α-細辛醚等主要成分。

(3)從上述測定結果可知，石菖蒲與水菖蒲中的主要化學成分β-細辛醚和α-細辛醚的含量差異較大。其中石菖蒲中β-細辛醚的平均含量為2.18%，α-細辛醚的平均含量為0.13%；而水菖蒲中β-細辛醚的平均含量為0.33%，α-細辛醚的平均含量為0.04%，石菖蒲中主要有效成分的含量明顯高于(Plt;0.05)水菖蒲，從主成分分析也能看出1～6號樣品石菖蒲聚為一類，7～14號樣品水菖蒲聚為一類。

綜上所述，3種菖蒲藥材在化學成分組成和的含量上有較大區別，在臨床上不可相互替代使用。可根據其中各成分含量特征，利用本方法將其鑒別開來，從而避免市場上相互混雜、以次充好的現象發生，為臨床用藥安全及療效提供保障。

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2017-05-10

馮艷彬，Tel：13671128647，E-mail：fyb3067@163.com。

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李淑莉，E-mail：lisli875@sohu.com。

信息簡訊

蘇州納米所可穿戴汗液傳感器研究獲進展

人體汗液中富含大量潛在的與健康和疾病相關的標志物，相比較常規的血液和尿液檢測，其具有非侵入(Non-invasive)和實時連續監測等優勢，因此可穿戴汗液傳感器的研究成為可穿戴健康電子設備領域發展的重點之一。微型化、集成化的全固態離子選擇性電極和全固態參比電極，是檢測汗液中電解質離子濃度的核心傳感技術。然而，現有的大部分固態離子傳感器多采用導電聚合物作為離子/電子的傳導層材料，存在穩定性差、干擾因素多、使用壽命短等缺點，限制了其在可穿戴汗液檢測領域的應用。

中國科學院蘇州納米技術與納米仿生研究所張珽研究團隊前期研發了可用于皮膚水分檢測的柔性可穿戴離子型濕度傳感器(Advanced Science, 2017, 1600404,1-7, Back Cover)。進而，針對微型化全固態離子傳感器和全固態參比電極穩定性等關鍵科學技術問題，研究團隊結合MEMS微納加工技術設計制備了具有微孔陣列為模板的電極芯片，采用一步電沉積法制備了大比表面積且可調控的三維金納米結構離子/電子傳導陣列電極，相比較基于碳納米管、石墨烯、多孔碳等材料的離子/電子傳導層，其具有制備簡單，重復性好等優勢。通過該電極芯片構建的全固態離子選擇性電極具有穩定的電位響應靈敏度(56.58 ± 1.02mV/decade)、快速的響應時間(lt;10s)和寬線性范圍(10-6～10-1mol/L)，傳感器的電位漂移和水層干擾影響減小。通過優化參比電極聚合物膜和鹽的組分，在傳感器芯片上集成了基于聚合物/氯化鉀的全固態參比電極，獲得的微型化參比電極芯片具有平衡時間短，對不同種類和不同離子強度電解質干擾響應小，對光不敏感，在pH3～10范圍內響應穩定，具有長期穩定性等優勢。同時，研究團隊創新性地設計了具有汗液采集、轉運和排出結構的可穿戴“導汗帶”汗液傳感設備，將傳感器芯片與汗液導汗帶集成封裝，可舒適便捷地佩戴于人體額頭區域，可對人體運動過程中電解質離子進行實時連續地分析監測，對人們健身運動過程中脫水情況的監測，尤其是對運動員、搶險急救人員、軍人在執行高強度任務過程中的生理健康狀況具有預警和指導意義。相關研究成果發表在Analytical Chemistry上。該工作得到了國家自然科學基金、江蘇省杰出青年基金和中國博士后科學基金資助項目等的資助。(蘇州納米技術與納米仿生研究所)

IdentificationanddeterminationofAcorustatarinowiibyHPLC.

FengYanbin1,ZhangTing2,LiShuli3*

(1.BeijingObstetricsandGynecologyHospital,Beijing100026,China; 2.Guang’anmenHospital,ChinaAcademyofChinaAcademyofChineseMedicalSciences,Beijing100053,China;3.TheInstituteofBasicTheory;ChinaAcademyofChineseMedicalSciences,Beijing100700,China)

A HPLC method for determination ofβ-asarone andα-asarone was established and the quality ofAcorustatarinowiiSchott andAcoruscalamusL was evaluated. The quantification content was realized by using the external standard method. The separation was performed on a Zorbax SB-C18(250 mm×4.6 mm, 5 μm) column. The mobile phase was isocratic elution of 0.1% formic acid water-methanol. The detection wavelength was set at 237 nm. The column temperature was maintained at 30°C. The flow rate was 1 mL·min-1. The mass ofβ-asarone andα-asarone showed good linearity in the ranges of 0.090 45—1.809 μg and 0.006 75—0.135 μg. The average content ofβ-asarone andα-asarone inAcorustatarinowiiSchott were 2.18% and 0.13%, while the average content ofβ-asarone andα-asarone inAcoruscalamusL were 0.03% and 0.04%. In market circulation, the medicine “Chang Pu” should be distinguished and examined strictly to avoid the circumstance of adulterate and the damage to safety of drug use.

AcorustatarinowiiSchott; content determination;β-asarone;α-asarone

10.3969/j.issn.1001-232x.2017.06.015