一種羊肚菌的菌種分離和母種培養基篩選

杜忠偉，胡志強，亢學平，王旭，李健，王鑫

(延邊朝鮮族自治州農業科學院，吉林 延邊 133000)

一種羊肚菌的菌種分離和母種培養基篩選

杜忠偉，胡志強，亢學平，王旭，李健，王鑫*

(延邊朝鮮族自治州農業科學院，吉林 延邊 133000)

對采自延邊地區的一種羊肚菌子實體，通過組織分離幼時和成熟的子實體不同部位(子囊盤、子囊盤和菌柄連接部、菌柄部)獲得菌種，制作4種(PDA，黃豆粉，玉米粉，黃豆芽)培養基配方，對菌絲體生長情況(萌發時間、顏色、菌絲長勢)進行觀察記錄，結果得出：幼時子囊盤和菌柄連接部位分離成活率最高；黃豆芽培養基適宜做該羊肚菌菌株母種培養基。

羊肚菌;組織分離;菌絲體;培養基

羊肚菌屬(MorchellaDill.ex Fr)，屬于子囊菌門、盤菌綱、盤菌目、羊肚菌科。該屬的特點是子囊盤如海綿狀或羊肚狀，子實層沿子囊盤蓋的下陷部分生長，所有羊肚菌都是食用菌而且味道鮮美[1]。對于羊肚菌分多少種爭論不一，在《真菌詞典》第 10 版中也將其劃分為28個種[2]。羊肚菌營養價值高，作為珍惜的食藥用菌具有重要的經濟價值和研究價值。羊肚菌性平、味甘寒，無毒，具有幫助消化、化痰理氣、補腎壯陽及補腦提神等功效,是一味良好的傳統中藥[3]。現代醫學研究又表明,羊肚菌能增強人體免疫力、抗輻射、抗腫瘤、抗疲勞,并且能夠減輕癌癥患者放療、化療引起的毒副作用[4]。近幾年隨著人工栽培羊肚菌的成功，形成了全國的羊肚菌熱潮，在帶來利益的同時也給很多栽培戶帶來巨大損失。追其原因有菌種的成活率不穩定，栽培技術不規范，盲目跟風，因此進一步對羊肚菌的分類、生活史、繁殖機理等問題和針對不同地域不同種類的羊肚菌的最適培養基和栽培技術進行研究是未來羊肚菌產業發展的關鍵。本文對采自吉林延邊地區的羊肚菌進行菌種的分離和培養基篩選試驗，為進一步開展馴化栽培試驗做準備。

1 材料方法

1.1 研究材料

1.1.1 研究標本。標本：采自延邊州農業科學院院內房檐下雜草地中，分別采集到幼時和成熟后的兩種形態的子實體。采集時間：2017年5月18日，標本保存在延邊州農業科學院食用菌研究所標本室，標本編號YDJ01和YDJ02。

1.1.2 母種培養基配方。選用4種常用的培養基配方進行測定，將其編號為A、B、C、D。

A: 馬鈴薯200g(去皮煮汁)、葡糖糖20g、瓊脂20g、KH2PO41.5g、MgSO43g、水1000mL。

B：黃豆粉5g、麩皮10g、葡萄糖20g、瓊脂20g、水1000mL。

C：玉米粉5g、麩皮10g、葡萄糖20g、瓊脂20g、水1000mL。

D：黃豆芽500g(去皮煮汁)、葡萄糖20g、瓊脂20g、KH2PO41.5g、MgSO43g、水1000mL。

1.2 實驗方法

1.2.1 菌種分離試驗。將采集的幼時和成熟的羊肚菌子實體組織分離獲得的菌株編號為為YDJ-1和YDJ-2，對兩個時期的羊肚菌的子囊盤、子囊盤和菌柄連接處、菌柄部位進行組織分離方法獲得菌株。采集的標本放入超凈工作臺，用75%酒精擦拭子實體表面，用紫外燈對周圍環境消毒30min，接種于事先準備好的PDA試管斜面培養基中，標記后放入恒溫培養箱中，溫度設定為25℃，定期觀察記錄成活率，污染率，每種方法重復5次。

1.2.2 培養基對比試驗。將獲得羊肚菌母種進行提純培養獲得純種，按照4種培養基配方制作好培養基放入編號為1、2、3、4的三角瓶中，然后將三角瓶和事先包好的培養皿(直徑9cm)放入高壓蒸汽滅菌鍋滅菌(121℃，30min)，滅菌后平板培養皿和4種培養基轉移至超凈工作臺中，紫外線消毒殺菌20min，放置冷卻，制作成平板培養基放置兩天，經無菌操作將羊肚菌菌種分別接種4種不同培養基中，編號后放入在25℃恒溫培養箱內培養，定期觀察菌絲生長狀況，記錄菌絲密度、色澤、邊緣整齊度、長勢，每個處理重復10次；顯微鏡下觀察菌絲形態和顏色并記錄。

表1 羊肚菌不同時期不同部位對組織成活的影響

注：+代表菌絲稀疏，長勢不好，++代表較濃密，長勢較好，+++代表濃密，長勢好。

圖1 組織分離獲得的部分試管菌種注：圖a為子實體獲組織分離獲得的菌種，b為提純后的菌種；試管培養基內顆粒物為菌核。

2 結果分析

2.1 不同分離部位對組織成活的影響

研究發現不同分離部位菌絲萌發和菌絲長勢不同，但均可生長，子囊盤和菌柄部連接處及菌柄部成活率較高。幼時分離的成活率比成熟后高，污染率低。研究發現利用羊肚菌子實體分離菌種易感染細菌，但通過培養一段時間發現，如果小部分感染細菌的羊肚菌菌絲仍然可以生長，說明羊肚菌的抗雜菌能力強。培養獲得的菌絲絨毛狀，易產生氣生菌絲，菌絲顏色由白色變成淺棕色后期成褐色，隨著培養基內營養物質的消耗，菌絲形成深棕色顆粒狀的菌核。通過顯微鏡對培養獲得菌絲進行觀察發現，菌絲為有隔菌絲，透明，無色至棕色，在菌絲的兩側會形成分枝狀的突起，菌絲之間交錯鏈接構成一個復合的整體。羊肚菌不同分離部位分離對組織成活的影響見表1，分離獲得的菌種如圖1。

2.2 四種培養基對比結果

羊肚菌菌絲在4種配方的培養基中均能生長，在黃豆芽培養基中菌絲長勢最好，菌絲濃密，菌落絨毛狀邊緣，白色至淡褐色，生長快；其次為PDA培養基，菌絲較濃密，菌落絨毛狀邊緣，白色至淡褐色，生長最快；玉米粉培養基菌絲緊貼培養基生長，稀疏，菌落形態不明顯，生長較快；黃豆粉培養基，菌絲弱，稀疏，菌落形態不明顯，生長慢。不同培養基中菌落形態照片見圖2。

圖2 不同培養基下的菌落形態圖注：1號圖為培養第4天的菌落形態，2號圖為培養至7天后的菌落形態，此時菌落已經長滿平板培養皿，其中PDA培養基內氣生菌絲較多，顏色較深，有菌核產生，黃豆芽培養基菌絲濃密，無菌核產生，菌絲活力旺盛，黃豆粉培養基菌絲稀疏，顏色淺，無菌核產生，玉米粉培養基菌絲稀疏，活力弱。

3 總結

通過對采集的羊肚菌子實體進行組織分離、培養，得出子囊盤、子囊盤和菌柄鏈接部、菌柄部分離均能生長，但成活率有差異；同一種菌株在不同的培養基中形成的菌落形態，菌絲長勢不同，黃豆芽培養基最適合羊肚菌菌絲生長，其次為PDA培養基。通過對采集的羊肚菌進行菌種分離和母種培養基篩選試驗，獲得菌種為下一步的馴化栽培試驗奠定基礎。

[1]戴玉成，楊祝良.中國藥用真菌名錄及部分名稱的修訂[J].菌物學報,2008,27：801-824 .

[2]P.M. Kirk,P.F. Cannon,D.W. Minter et al. Dictionary of the fungi(10th ed.)[M].UK:CABI,2008.

[3]孫曉明，張衛明，吳素玲,等.羊肚菌抗疲勞作用研[J].中國野生植物資源，2001， 20(1):12-13,17-18.

[4]邢增濤,孫芳芳,劉景圣.尖頂羊肚菌液體培養條件的研究[J].食用菌學報，2004， 11(4):38-43.

DOI.:10.13268/j.cnki.fbsic.2017.06.006

S646.7

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