牛羊活體采集O—P液的技術要點

文│杜平麗（河北省定州市農業局）

牛羊活體采集O—P液的技術要點

文│杜平麗（河北省定州市農業局）

在口蹄疫病原學檢測工作中，牛、羊等反芻動物在發病前期、恢復期、無臨床癥狀的可疑情況下，其食道—咽部位的分泌物即O—P液中口蹄疫病毒能夠繼續繁殖及存活，常被用于病原學檢測。O—P液樣品的采集、處理、保存、運送等技術環節是否嚴格把關，直接關系到樣品質量、檢驗結果及結論的準確性和可靠性。

切實掌握O—P液的采集技術，是當前基層獸醫工作者及實驗室技術人員的一項基本技能。

一、前期準備要充分

1.器具。金屬探杯（由采集杯、拉桿和把柄環組成）、滅菌廣口瓶（或毫升大離心管）、采樣箱、記號筆、標簽、封口膜、一次性手套、口罩、標簽紙、簽字筆、冷藏箱、干冰/液氮、采樣單等。

2.試劑。生理鹽水、0.2%檸檬酸或2%氫氧化鈉、磷酸鹽緩沖液（0.04 摩爾/升、pH7.4）或細胞培養液（0.5%水解乳蛋白-Earle液）。

二、如何采集到高質量的樣本

1.明確采樣部位。O—P液主要收集被采動物食管開始部、咽喉壁、隱窩以及軟腭表面的上皮細胞，口蹄疫病毒能夠在這些部位存活和繁殖。

2.采樣前準備工作。

（1）清洗器具。采樣探杯在使用前需經0.2%檸檬酸或2%氫氧化鈉溶液浸泡至少5分鐘，再用與動物體溫一致的自來水反復沖洗幾次，以減少機體應激。為避免交叉感染，每采完一頭動物，探杯就應重復進行消毒與沖洗。

（2）動物禁食。被檢動物在采樣前禁食(可飲水)12小時，以避免反芻胃內容物嚴重污染O—P液。

（3）做好采樣人員的個人安全防護，提高防護意識。

3.采樣技術。被采動物站立保定，頭微上仰。操作人員洗手消毒，左手打開動物口腔，將開口器平伸進口腔，下壓手柄豎立保持不動，另一手持采樣探杯，沿開口器伸進動物口腔，達到咽部時輕輕抽送幾下刺激動物吞咽，順勢動作輕緩地將消毒過的探杯伸到食道上部約15厘米處，前后稍微用力來回拉3～5次。最后，拉出探杯，確保杯中的咽部—食道刮取物不少于8毫升。

4.樣品保存。將探杯涮洗幾次，使O—P液樣品全部放入等量的細胞培養液或磷酸鹽緩沖液中，加蓋密封后充分振蕩搖勻，貼上標簽。按體系文件中采樣登記表要求，詳細記錄樣品日期和編號等信息。

收集O—P液樣品后，最好立即進行檢測，如果不是立即檢測，應該立即冷凍。如果運輸時間較長，應當把樣品放到干冰或者液氮中。冷凍前瓶口要求密封不漏氣。特別注意，如果是干冰保存，若有二氧化碳進入瓶內會降低pH 值，由于口蹄疫病毒在酸性環境中很脆弱，很可能使口蹄疫病毒失活。在整個運輸途中，避免樣品解凍。

樣品的正確采集及合理保存直接影響著檢測結果和分析判定，不容忽視。

三、后期無害化處理工作

采樣結束后，采樣人員要進行消毒更衣，對采樣中使用的器材及環境及時進行消毒，并對廢棄物進行無害化處理，確保環境安全。