正交實驗法優選理氣復胃口服液的醇沉工藝探討

帥小翠，王 婷，徐菲飛

(四川省醫學科學院·四川省人民醫院藥學部，四川 成都 610072)

正交實驗法優選理氣復胃口服液的醇沉工藝探討

帥小翠，王 婷，徐菲飛

(四川省醫學科學院·四川省人民醫院藥學部，四川 成都 610072)

目的優選理氣復胃口服液的醇沉除雜質工藝，為提升制劑質量及規模化生產提供參考。方法以理氣復胃口服液水提取藥液醇沉后大黃結合蒽醌轉移率、醇沉后干膏收率為測定指標，采用正交實驗法，考察水提濃縮藥液相對密度、乙醇濃度、醇沉時間對醇沉工藝的影響。結果以大黃結合蒽醌轉移率為指標，各考察因素對測定值的影響程度為：乙醇濃度>醇沉時間>相對密度；以干膏率為指標時，各考察因素對其影響程度為：相對密度>乙醇濃度>醇沉時間。結論依據試驗結果，平衡各種影響因素并結合生產實際，優選出的醇沉除雜工藝為：藥液相對密度為1.20～1.25，乙醇濃度為75%，醇沉時間為24小時。該工藝可改善理氣服胃口服液的澄明度，也為其規模化生產提供了數據支撐。

理氣復胃口服液；正交試驗；醇沉工藝

理氣復胃口服液為我院自制制劑，由木香、熟大黃、枳實、陳皮等7味中藥制成的口服液，具有行氣導滯，除濕消痞的功效，用于運動障礙型功能性消化不良，臨床收效良好。研究表明，理氣復胃口服液作為純中藥制劑在治療功能性消化不良(functional dyspepsia，FD)方面，其促進胃排空，改善各種胃排空延遲的作用與胃動力藥莫沙必利療效相當；在預防化療后便秘及腹脹方面療效顯著，且不良反應輕微[1～2]。理氣復胃口服液制備過程為：含揮發性成分的原藥材如木香、枳實、陳皮等先行水蒸汽蒸餾提取芳香水，殘渣合并其他中藥行水煎提取，除去雜質，再進行配液。前期我們對該口服液的水提取工藝進行了研究，確定了最佳水提工藝[3]。

中藥口服液的純化/除雜質不但影響其外觀，也與口服液的內在質量密切相關，通過純化可除去鞣質、果膠、樹脂、蛋白質、多糖等相關雜質，一方面可使制劑達到澄明度要求，同時也可增加口服液的穩定性；中藥口服液的純化方法較多，如醇沉法、高速離心法、澄清劑純化工藝、膜分離法、大孔樹脂法等[4，5]。為提升理氣復胃口服液的質量，改善其澄明度，2015年7～9月，本研究利用傳統工藝醇沉法對其水提取液進行純化，以醇沉后藥液中大黃結合蒽醌轉移率、干膏率為檢測指標，通過正交試驗設計優化理氣復胃口服液的醇沉工藝，為不斷提高該制劑的工藝水平及口服液的質量提供參考，同時也為該口服液的規模生產奠定技術支撐。

1 材料與方法

1.1儀器與試藥電子天平(JJ500型 d=0.01 g)、waters 2690 seporation module；waters 996 photodiode Array Detector，電磁爐、BP211D電子天平(d=0.01 mg，德國Sartorius公司)、蒸發皿、水浴鍋、電烘箱等。藥材：木香、熟大黃、枳實、陳皮等7味中藥飲片，購于四川省中藥飲片有限責任公司，經檢驗，均符合《中國藥典》2010版標準。對照品：大黃酸(中國藥品生物制品檢定所，批號：110757-200206)，大黃素(中國藥品生物制品檢定所，批號：110756-200210)，大黃酚(中國藥品生物制品檢定所，批號：110796-200208)，大黃素甲醚(中國藥品生物制品檢定所，批號：110758-200611)，蘆薈大黃素(中國藥品生物制品檢定所，批號：110795-200806)。

1.2方法

1.2.1指標選擇 理氣復胃口服液的主要功效為行氣導滯、除濕消痞。文獻資料顯示[6，7]，與該功效密切相關的組分有揮發油類(行氣)和大黃所含蒽醌類成分(導滯)；大黃氣味重濁，直降下行，走而不守，有斬關奪門之力，專攻心腹脹滿，胸胃蓄熱。在行醇沉法除去雜質時，應充分考慮口服液中有效成分的保留，故將蒽醌類有效成分的含量作為考察的主要指標，以減少或避免此類物質的損失，影響療效；醇沉后的干膏收率對口服液的澄明度乃至有效成分的含量均有一定影響，故亦將干膏收率作為檢測指標。

1.2.2因素水平選擇 經預實驗，影響醇沉工藝的因素主要有：水提濃縮藥液相對密度、乙醇濃度(醇沉時乙醇體積分數)、醇沉時間[8]，為此，采用正交試驗設計考察此3因素對理氣復胃口服液醇沉工藝的影響，各因素均設三個水平，因素水平見表1，以L9(34)正交表安排實驗，見表2。

表1 醇沉工藝因素水平表

表2 醇沉工藝正交實驗安排表和結果

1.2.3樣品制備 藥材經水提取后，量取等量的提取液，按照正交設計的安排表(表2)方法進行試驗，所得藥液經過濾，濃縮，定容50 ml，作為干膏率測定和含量測定的供試藥液。

1.2.4干膏率測定 精密量取供試藥液10 ml，置干燥恒重的蒸發皿中，于105 ℃電熱恒溫干燥箱中干燥3 h，取出放入干燥器中冷卻至室溫，迅速稱重，計算干膏率(干膏率=10 ml提取液的干膏質量×5/對應量藥材質量×100%)。

1.2.5含量測定方法[9]①色譜條件：色譜柱Phenomenex Gemini C18(250 × 4.6 mm，5 μm，110 A)，保護柱Security Guard Cartridges Gemini C18(4×3.0 mm)，柱溫35 ℃；流動相為甲醇-乙腈-0.01 mol/L，NaH2PO4(pH1.5)(2：5：3.5)，流速1 ml/min，檢測波長435 nm。②對照品配制：精密稱取各對照品適量，配制成每1 ml約含大黃素、大黃酚、大黃酸、蘆薈大黃素各4 μg，大黃素甲醚2 μg的混合工作溶液，置4 ℃冰箱避光儲存備用。③供試品溶液制備與測定 總蒽醌測定：精密量取混勻的供試品溶液5 ml，置25 ml容量瓶中，加水稀釋至刻度，混勻。精密量取稀釋液5 ml，置圓底燒瓶中，加入8%鹽酸10 ml，混勻，再加入三氯甲烷10 ml，混勻，置沸水浴上回流1小時，放冷，置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗滌燒瓶，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷層，酸液再用三氯甲烷液液提取3次，每次10 ml，合并三氯甲烷提取液，置37 ℃水浴上氮氣揮干，殘渣加甲醇使溶解，轉移至10 ml容量瓶中，甲醇定容至刻度，混勻，以微孔濾膜(0.425 μm)過濾后進樣10 μl。游離蒽醌測定：取樣品40 μl，加入3倍量甲醇，混勻，高速離心后取上清液，過濾，進樣10 μl。

1.2.6結合蒽醌轉移率計算 結合蒽醌=總蒽醌-游離蒽醌。結合蒽醌轉移率=醇沉后結合蒽醌含量/醇沉前結合蒽醌含量×100%。

1.3統計學方法將所得干膏率、結合蒽醌轉移率，數據采用SPSS 13.0軟件分析處理。對正交結果采用方差分析。P< 0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1各因素對醇沉工藝的影響醇沉工藝正交實驗安排與結果見表2、表3，直觀分析，以干膏率為指標，各因素對醇沉的影響程度A>B>C，干膏率越低越好，最佳組合為A3B3C3；以大黃結合蒽醌轉移率為指標，各因素對醇沉的影響程度B>C>A，轉移率越高越好，最佳組合為A3B2C1。由表4可知，因素A、因素B能夠顯著影響醇沉工藝的干膏率；由表5可知，因素B對結合蒽醌轉移率的影響具有統計學意義。鑒于口服液澄明度的要求，重點考慮干膏率的影響，且經分析，醇沉工藝的乙醇濃度65%和75%所得結合蒽醌轉移率沒有顯著性差異，結合生產實際，擬定醇沉工藝為A3B3C1：即醇沉時藥液相對密度為1.20～1.25，乙醇濃度為75%，醇沉時間為24小時。

表3 不同因素下正交結果分析

注：表3中K1、K2、K3為對應因素1水平、2水平、3水平干膏率之和，R為極差。K*1、K*2、K*3為對應因素1水平、2水平、3水平結合蒽醌轉移率之和，R*為極差。

表4 醇沉工藝干膏率方差分析

表5 醇沉工藝結合蒽醌轉移率方差分析

2.2醇沉工藝驗證按正交優選出的工藝進行3批樣品的驗證實驗，結合蒽醌轉移率均值為83.10%，RSD為1.91%；干膏率均值為11.78%，RSD為0.42%，可見該醇沉工藝穩定可行。結合蒽醌轉移率、干膏率實驗結果見表6。

表6 醇沉工藝驗證實驗結果

3 討論

理氣復胃口服液由多味中藥組成，其成分復雜，不同化學成分理化性質各異，一些雜質的存在，除了影響口服液的外觀如澄明度等，還可能在制備過程中導致有效成分的損失，甚至影響口服液在貯存過程中的穩定性。如何在保留有效成分的前提下盡可能除去雜質，是提升中藥口服液質量的關鍵之一。雖然中藥口服液除雜方法較多，但基于理氣復胃口服液所含組分的特性，同時考慮生產實際的相關成本與效益，本研究最終選擇醇沉法進行理氣復胃口服液的除雜工藝。

在理氣復胃口服液的醇沉工藝優選過程中，為保證其療效及口服液最后的澄明度，我們選擇了大黃所含蒽醌類成分及提取液的干膏率作為測定指標。前者直接反映在醇沉過程中有效成分的保留程度；后者主要反映除雜質程度，與有效成分的保留也有一定關聯。干膏率越低可能更有利于口服液的澄明度，但條件控制不佳則可能影響有效成分的含量。綜合考慮各種因素，結合最后驗證試驗及生產實際，最終確定的醇沉最佳工藝為：藥液相對密度1.20-1.25，乙醇濃度為75%，醇沉24小時。

[1] 榮曉鳳，曹文富，何英，等.理氣復胃口服液治療功能性消化不良II期臨床試驗[J].中國新藥與臨床雜志，2005，24(5)：388-390.

[2] 王曉珊，梁良，劉迪，等.理氣復胃口服液對化療后便秘的預防效果[J].腫瘤研究與臨床，2014，26(7)：476-478，503.

[3] 帥小翠，鄒靜，李晉奇.正交實驗法優選理氣復胃口服液的煎煮工藝[J].實用醫院臨床雜志，2015，12(6)：94-95.

[4] 金國泰，李博，代龍.改善中藥口服液澄清度工藝研究進展[J].遼寧中醫藥大學學報，2013，15(12)：245-247.

[5] 朱磊，劉婉瑩，付利新，等.提高中藥口服液澄明度方法的研究進展[J].藥物評價研究，2013，36(4)：315-318.

[6] 丁玉玲.大黃蒽醌類的研究概況[J].時珍國醫國藥，2005，16(11)：1160-1162.

[7] 國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典.臨床用藥須知(中藥飲片卷)[S].2010年版.北京：中國醫藥科技出版社，2010：377.

[8] 劉光斌，謝六生，隆旭紅，等.大黃通氣口服液的提取純化工藝優選[J].中國實驗方劑學雜志，2012，18(12)：67-70.

[9] 王婷，童榮生，鄒靜，等.高效液相色譜法測定理氣復胃口服液中大黃成分的含量[J].實用醫院臨床雜志，2016，13(4)：111-113

OptimizationofethanolprecipitationprocessforLiqifuweioralliquidbyorthogonaltest

SHUAIXiao-cui，WANGTing，XUFei-fei

(DepartmentofPharmacy，SichuanAcademyofMedicalSciences&SichuanProvincialPeople’sHospital，Chengdu610072，China)

ObjectiveTo optimize the ethanol sedimentation process of Liqifuwei oral liquid in order to provide the reference for improving the quality and large-scale production of the oral liquid.MethodsBy using the anthraquinone transfer ratio of ethanol sedimentation solution and the yield of dry extract as indexes，the effect of the relative density of concentrated liquor extracted by water，the ethanol concentration and the alcohol precipitation time on the ethanol precipitation process was investigated with orthogonal experiment method.ResultsWhen anthraquinone transfer rate as detecting index，the various influence on the ethanol precipitation process were that ethanol concentration > alcohol precipitation time > the relative density.When the yield of dry extract as detecting index，the various influence on the ethanol precipitation process were that relative density > ethanol concentration >alcohol precipitation time.ConclusionAccording to the test results，balancing various influences factors and combining with the actual production，the optimal alcohol sedimentation process is that the relative density of concentrated liquor extracted by water is 1.20～1.25，ethanol concentration was 75% and alcohol precipitation time was 24 hours.The optimized process could improve the clarity of Liqifuwei oral liquid，and provide data supporting its large-scale production as well.

Liqifuwei oral liquid； Orthogonal experiment method； Ethanol precipitation process

R917

A

1672-6170(2017)06-0110-03

2017-03-10；

2017-08-23)