食管癌CD34 VEGF表達(dá)與CT強(qiáng)化幅度的關(guān)系

邢媛媛， 趙佳佳， 曹宏偉， 王勝林， 吳薇娜， 李春暉

(承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院， 河北 承德 067000)

食管癌CD34VEGF表達(dá)與CT強(qiáng)化幅度的關(guān)系

邢媛媛， 趙佳佳， 曹宏偉， 王勝林， 吳薇娜， 李春暉

(承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院， 河北 承德067000)

目的分析食管癌CD34、VEGF表達(dá)與CT強(qiáng)化幅度的關(guān)系。方法采集我院收治的40例食管癌患者和20例健康人群的食管粘膜組織，應(yīng)用免疫組化的方法檢測粘膜組織中CD34和VEGF的蛋白表達(dá)水平，并對MVD值進(jìn)行計數(shù)，測量CT增強(qiáng)掃描癌灶的CT強(qiáng)化值，進(jìn)一步分析各指標(biāo)之間的關(guān)系及其與腫瘤臨床分期的關(guān)系。結(jié)果與健康對照組相比，患病組組織CD34和VEGF的表達(dá)陽性率均較高(P<0.05)，且二者的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.451，P<0.05)；食管癌組織中VEGF的表達(dá)和MDV均與食管癌的浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、細(xì)胞分化程度和TNM分期相關(guān)(P<0.05)；食管癌組織中VEGF(r=0.434，P<0.05)和MVD(r=0.463，P<0.05)均與螺旋CT強(qiáng)化幅度呈正相關(guān)，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論食管癌組織中CD34和VEGF均呈高表達(dá)，并且與CT強(qiáng)化幅度呈正相關(guān)，聯(lián)合檢測CD34和VEGF的表達(dá)可以作為食管癌的侵襲轉(zhuǎn)移和預(yù)后評估的重要指標(biāo)。

食管癌； CD34； VEGF； MVD； CT強(qiáng)化幅度

食管癌是一種發(fā)病率與死亡率均較高的惡性腫瘤，在我國較為常見且嚴(yán)重威脅人類生命健康[1]。我國癌癥協(xié)會統(tǒng)計數(shù)據(jù)顯示，近年來我國食管癌的新發(fā)病例數(shù)占全球的一大半，且食管癌患者的預(yù)后差[2]。食管癌多為鱗狀細(xì)胞癌，目前尚無具體清晰的發(fā)病機(jī)制，近年來對于的研究熱點問題是食管癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移和血管生成[3]，食管癌的主要轉(zhuǎn)移方式為淋巴道轉(zhuǎn)移。腫瘤的增殖、轉(zhuǎn)移過程中血管新生是必須的，血管內(nèi)皮生長因子(Endothelial growth factor，VEGF)是與血管生成相關(guān)的重要細(xì)胞因子[4]，其作用是促進(jìn)血管生成和內(nèi)皮細(xì)胞分裂；腫瘤內(nèi)微血管密度(Microvessel density，MVD)目前作為衡量腫瘤血管生成的一個金標(biāo)準(zhǔn)，可以影響腫瘤強(qiáng)化表現(xiàn)[5]，VEGF和MVD均與腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。目前，CT檢查是食管癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與否的首選判定方案，研究表明由于影像學(xué)與分子生物學(xué)之間存在著一定的聯(lián)系，CT灌注成像可以反映腫瘤內(nèi)微血管情況[6、7]。本研究通過檢測CT強(qiáng)化幅度、VEGF以及CD34在食管癌組織中的表達(dá)檢測，并計算腫瘤微血管密度(MVD)，以探索食管癌組織中VEGF和CD34的表達(dá)與腫瘤血管生成的關(guān)系，現(xiàn)報道如下：

1 資料與方法

1.1一般資料:根據(jù)如下納入標(biāo)準(zhǔn)和排除標(biāo)準(zhǔn)收集了我院收治的食管癌患者40例，所有患者均依據(jù)2011年我國抗癌協(xié)會的食管癌規(guī)范化診治指南[8]，基本臨床資料齊全，見表1。研究對象滿足下列條件：納入標(biāo)準(zhǔn)：①患者均符合2011年我國抗癌協(xié)會的食管癌規(guī)范化診治指南規(guī)定的食管癌診斷標(biāo)準(zhǔn)；②患者均未進(jìn)行任何的放、化療及其他特殊治療；③患者的原始資料基本齊全；④患者及家屬充分了解研究內(nèi)容，簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①患者存在嚴(yán)重的慢性心臟、肝膽和腎臟疾病；②患者存在免疫缺陷病史，或有器官移植史等；③患者于入院前已進(jìn)行過化療、放療以及其他特殊治療。

1.2方 法

1.2.1檢查方法:全部患者均于術(shù)前一周使用64排西門子多層螺旋CT機(jī)進(jìn)行掃描。常規(guī)胸部平掃，掃描參數(shù)：掃描厚度5.0mm，螺距為1.5mm，管電壓140kV，管電流219mA，增強(qiáng)造影時，應(yīng)經(jīng)肘靜脈高壓注射1.5mL/kg的優(yōu)維顯掃描厚度為5.0mm，螺距為1.5mm。患者進(jìn)行掃面前必須為空腹。進(jìn)行CT檢測后，按照病灶增強(qiáng)的程度患者可分為輕度：增強(qiáng)后CT值≤20Hu為輕度強(qiáng)化；重度20Hu40Hu為重度強(qiáng)化，認(rèn)為中度強(qiáng)化以上為明顯強(qiáng)化。獲取患者和正常對照組的食管粘膜組織標(biāo)本，做4mm連續(xù)切片。食管癌組織切片經(jīng)蘇木素-伊紅(HE)染色后，需兩位資深病理醫(yī)師在雙盲的條件下確診患者為食管癌。患者的食管粘膜組織切片均進(jìn)行免疫組化染色，檢測CD34和VEGF的表達(dá)，實驗操作完全依照試劑盒說明書。VEGF抗體和CD34抗體均購自武漢博士德公司，免疫組化試劑盒購自福州邁新公司。

1.2.2觀察指標(biāo)及判定標(biāo)準(zhǔn):采用免疫組化的方法檢測患者食管癌組織中CD34和VEGF的蛋白表達(dá)情況。其中，VEGF和CD34的蛋白定位于細(xì)胞漿和/或包膜，以細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞，按陽性細(xì)胞的比例及顯色強(qiáng)度綜合評分。按照Kitadai[9]標(biāo)準(zhǔn)，其中，陰性：無著色，0分；弱陽性：淺黃色，1分；陽性：棕黃色，2分；強(qiáng)陽性：棕褐色，3分。當(dāng)陽性細(xì)胞所占比例<25%為1分，25%<陽性細(xì)胞所占比例<50%為2分，陽性細(xì)胞所占比例>50%為3分。綜上所述，兩者得分乘積的積分>14分，為陽性，即高表達(dá)，其余為陰性，即低表達(dá)。MVD的計數(shù)采用Weidner[10]方法，首先在40倍光鏡下尋找3個腫瘤MVD最高的區(qū)域，然后在200倍光鏡下計數(shù)微血管的數(shù)目。

2 結(jié) 果

2.1不同組織中的CD34和VEGF表達(dá)情況比較:根據(jù)表2可知，與健康對照組相比，患病組內(nèi)患者組織CD34和VEGF的表達(dá)陽性率均較高，組間進(jìn)行χ2統(tǒng)計，P<0.05，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

表2 兩組患者組織CD34和VEGF表達(dá)情況比較n(%)

表3 患者組織中的CD34和VEGF表達(dá)的相關(guān)性

2.2患者組織中的CD34和VEGF表達(dá)的相關(guān)性:由表3可知，食管癌組織中CD34的表達(dá)與VEGF的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.451，P<0.05)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2.3食管癌臨床病理因素與MVD、VEGF表達(dá)的關(guān)系:由表4可知，食管癌組織中VEGF的表達(dá)和MDV數(shù)均與食管癌的細(xì)胞分化程度、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況和臨床TNM分期相關(guān)(P<0.05)，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。

2.4食管癌螺旋CT與MVD、VEGF表達(dá)的相關(guān)性:由表5可知，食管癌組織中VEGF的表達(dá)與螺旋CT強(qiáng)化幅度呈正相關(guān)(r=0.434，P<0.05)；根據(jù)表6可知，食管癌組織中的MVD與螺旋CT強(qiáng)化幅度也呈正相關(guān)(r=0.463，P<0.05)，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義。

表4 食管癌臨床病理因素與MVD、VEGF表達(dá)的關(guān)系

表5 食管癌螺旋CT與VEGF表達(dá)的相關(guān)性

表6 食管癌螺旋CT與MVD的相關(guān)性

3 討 論

食管癌是一種常見的消化道惡性腫瘤[1]，全世界范圍內(nèi)每年約有30萬人死于食管癌。我國是食管癌的高發(fā)地區(qū)，其死亡率居我國常見惡性腫瘤的第四位[3]。食管癌具有病情發(fā)展迅速、轉(zhuǎn)移性高、預(yù)后較差的特點[2]，因此對食管癌發(fā)病機(jī)制的研究，有效預(yù)防措施的探索以及治療的方案開發(fā)具有重要意義[11]。食管癌患者的典型臨床癥狀為進(jìn)行性咽下困難，從干性食物咽下困難逐漸發(fā)展為半流質(zhì)食物，最后是水和唾液的難以下咽[12]。

食管癌患者較低的預(yù)后和較高的致死率多與其有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，研究發(fā)現(xiàn)，食管癌患者的5年生存率無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者高達(dá)88%，而有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者則為33%[13]。因此，采用有效的診斷方法來準(zhǔn)確判斷淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移對于食管癌患者的治療及預(yù)后至關(guān)重要[14]。近年來診斷食管癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移又有了多種新的臨床檢查技術(shù)，如超聲內(nèi)鏡(EUS)，胸腔鏡檢查，PET/CT等，但這些檢查方法花費相對高，并且對受試者進(jìn)行有創(chuàng)檢查，難以廣泛在臨床應(yīng)用[14]。因此，CT仍是判斷淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的首選檢查方法[6]。

目前發(fā)現(xiàn)與腫瘤血管生成有關(guān)的因子中，VEGF的作用最強(qiáng)[15]。VEGF通過對血管內(nèi)皮細(xì)胞的特異性作用，誘導(dǎo)血管形成[15]。癌細(xì)胞的生長、轉(zhuǎn)移都需要依賴血管新生[15]，VEGF是臨床癌癥靶向治療的研究熱點[16]。研究表明，VEGF可以調(diào)節(jié)血管的發(fā)展[17]，一方面它直接刺激血管生成；另一方面又可通過促進(jìn)微血管通透性，為血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移及新血管的形成提供支架[15]。CD34為標(biāo)記單個腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞的良好標(biāo)記物[18]，重復(fù)性好，目前食管癌的腫瘤內(nèi)微血管密度(MVD)的計數(shù)也采用CD34標(biāo)記。有研究報道，MVD的數(shù)量與食管癌的分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況及脈管浸潤存在一定關(guān)聯(lián)，因而MVD也可以作為食管癌生物學(xué)行為的一個檢測指標(biāo)[18]。

本研究結(jié)果顯示，食管癌患者組織CD34和VEGF的表達(dá)陽性率均較高，且二者的表達(dá)呈正相關(guān)(P<0.05)；食管癌組織中VEGF和MDV均與食管癌的浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、細(xì)胞分化程度和TNM分期相關(guān)(P<0.05)；食管癌組織中VEGF和MVD均與螺旋CT強(qiáng)化幅度呈正相關(guān)，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義。綜上所述，食管癌組織中CD34和VEGF均呈高表達(dá)，并且與CT強(qiáng)化幅度呈正相關(guān)，聯(lián)合檢測CD34和VEGF的表達(dá)可以作為食管癌的侵襲轉(zhuǎn)移和預(yù)后評估的重要指標(biāo)。

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TheRelationshipbetweentheExpressionofCD34andVEGFandtheMagnitudeofCTEnhancementinEsophagealCarcinoma

XINGYuanyuan,ZHAOJiajia,CAOHongwei,etal

(TheAffiliatedHospitalofChengdeMedicalCollege,HebeiChengde067000,China)

Objective: To analyze the relationship between the expression of CD34 and VEGF and the enhancement of CT in esophageal carcinoma.MethodsThe organization of esophageal mucosa in 40 cases of esophageal carcinoma and 20 cases of healthy people were collected from our hospital, the expression of CD34 and VEGF protein were detected by immunohistochemistry in tissue, and the MVD was counted, measured CT scan cancer CT enhancement value, will be between the indexes and clinical stages of the tumor and its relation to statistics analysis.ResultCompared with healthy control group, the positive expression rate of CD34 and VEGF in esophageal carcinoma group were higher (P<0.05), and they were positively correlated in esophageal cancer tissues (r=0.451, P<0.05); The expression of VEGF and MDV in esophageal carcinoma were correlated with the degree of cell differentiation, depth of invasion, lymph node metastasis and clinical TNM stage (P<0.05); the expression of VEGF in esophageal cancer tissues (r=0.434, P<0.05) and MVD (r=0.463, P<0.05) with spiral CT enhancement was positively correlated, the differences were statistically significant.ConclusionCD34 and VEGF were highly expressed in esophageal cancer, and CD34, VEGF and CT enhancement in esophageal carcinoma are related, are important indicators of combined detection can be used as the invasion and metastasis of esophageal carcinoma and prognosis judgement.

Esophageal carcinoma; CD34; VEGF; MVD; CT enhancement

1006-6233(2017)11-1779-05

河北省科技指令性課題，(編號:12276104D-20)

A

10.3969/j.issn.1006-6233.2017.11.006