對羅氏Cobas Z480基因擴增儀性能的驗證與分析

張 迪, 秦 苑, 左方財

（貴州省興義市人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗科，貴州 興義 562400）

·檢測與診斷·

對羅氏Cobas Z480基因擴增儀性能的驗證與分析

張 迪, 秦 苑, 左方財

（貴州省興義市人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗科，貴州 興義 562400）

目的：評價羅氏Cobas Z480基因擴增儀的性能。方法：貴州省興義市人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗科按照ISO15189：2012[1]和CNAS-CL36[2]的標(biāo)準(zhǔn)要求，選定乙型肝炎病毒DNA（HBV-DNA）作為檢測項目，對羅氏Cobas Z480基因擴增儀檢測系統(tǒng)的準(zhǔn)確度、精密度及靈敏度進行驗證。結(jié)果：使用本儀器對血清標(biāo)本進行檢測的批間精密度高值的平均值為6.19ng/ml，標(biāo)準(zhǔn)差為0.30,CV為4.81%；其批間精密度低值的平均值為3.22 ng/ml，標(biāo)準(zhǔn)差為0.15，CV為4.64%。使用本儀器對血清標(biāo)本進行檢測的批內(nèi)精密度為：其高值的平均值為6.44 ng/ml，標(biāo)準(zhǔn)差為0.09，CV為1.47%；其低值的平均值為3.13 ng/ml，標(biāo)準(zhǔn)差為0.15，CV為4.77%。上述檢測值均處于廠家推薦的允許范圍內(nèi),均滿足《中華人民共和國醫(yī)藥行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)(YY/T 1182-2010)核酸擴增檢測用試劑盒（以下簡稱試劑盒）》[5]技術(shù)要求中“5.7.2”條例的要求。使用本儀器對國家衛(wèi)生部臨床檢驗中心提供的質(zhì)控血清進行HBV-DNA檢測，獲得的數(shù)據(jù)均在衛(wèi)生部臨床檢驗中心推薦的允許范圍內(nèi)。對本儀器檢測系統(tǒng)進行靈敏度驗證的結(jié)果為：平均值為3.43，標(biāo)準(zhǔn)差為0.25，CV為7.29%，CV處于廠家推薦的允許范圍內(nèi)（CV≤10%）。結(jié)論：在檢測HBV-DNA方面，羅氏Cobas Z480基因擴增儀檢測系統(tǒng)的準(zhǔn)確度、精密度及靈敏度均較高，其批內(nèi)精密度和批間精密度的變異系數(shù)均在可接受的范圍內(nèi)，其性能指標(biāo)均與廠家提供的性能參數(shù)相符合。該儀器可以在實驗室被用于進行臨床檢測工作。

羅氏Cobas Z480；基因擴增儀；性能驗證

基因擴增儀是一種具有基因擴增功能的檢測儀器。“ISO 15189：2012”規(guī)范中指出,實驗室只能使用已確認(rèn)的適用于預(yù)期用途的檢驗程序，以滿足給定用途或某特定領(lǐng)域的應(yīng)用要求。“GB/T22578-2008”規(guī)范[3]中指出，在臨床實驗室使用廠家嚴(yán)格評估的檢驗方法或試劑盒前，應(yīng)驗證其分析性能，以證實其能達到廠家聲明的性能指標(biāo)。我國衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)“WS/T420-2013”標(biāo)準(zhǔn)[4]中指出，臨床實驗室應(yīng)對所用的檢驗方法或商品試劑盒進行驗證。“CNASCL36”準(zhǔn)則中指出，對臨床實驗室所用的檢驗方法、儀器或商品試劑盒進行性能驗證的項目至少應(yīng)包括其準(zhǔn)確度、精密度等。筆者根據(jù)最新的相關(guān)文件、“ISO 15189：2012”規(guī)范、“YY/T 1182-2010”說明書中的相關(guān)要求及對HBVDNA試劑盒產(chǎn)品性能的基本要求，使用本實驗室的羅氏Cobas Z480基因擴增儀定量測定HBV-DNA，以驗證該儀器檢測系統(tǒng)的性能。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1）本試驗所用的儀器為羅氏Cobas Z480熒光擴增儀、廣東珠海黑馬醫(yī)學(xué)儀器有限公司生產(chǎn)的16K型臺式高速離心機、杭州奧盛儀器有限公司生產(chǎn)的干式恒溫器、生物安全柜等。2）本試驗所用的試劑為廣州中山達安基因股份有限公司提供的“乙型肝炎病毒核酸定量檢測試劑盒”，國食藥監(jiān)械（準(zhǔn)）字2012第3400078號，有效期為四年；試劑批號為2016001（有效期為20170111）；校準(zhǔn)品批號為20160503（有效期至20170502）。3）本試驗中標(biāo)本的來源為廣州中山達安基因HBV-DNA檢測試劑盒自帶標(biāo)準(zhǔn)品（濃度為2.0E6）。質(zhì)控血清由國家衛(wèi)生部臨床檢驗中心提供。本試驗中所用的樣本來源于在本院進行健康體檢者的100份新鮮血清標(biāo)本。

1.2 方法

1.2.1 精密度驗證 根據(jù)試劑說明書、本實驗室制定的標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP）及美國臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會（CLSI）制定的評價標(biāo)準(zhǔn)EP15A中的相關(guān)要求，以1：10的比例將100份血清標(biāo)本的濃度分別稀釋為E6、E3，并在同一天、同一條件下對這些血清標(biāo)本進行20次的批內(nèi)精密度測定。所有試驗均在5個小時內(nèi)完成，并計算平均值和變異系數(shù)（CV）。對本組標(biāo)本每天進行一次的批間精密度測定，連續(xù)檢測20天，并計算平均值和變異系數(shù)。

1.2.2 準(zhǔn)確度驗證 對國家衛(wèi)生部臨床檢驗中心發(fā)放的5份室間質(zhì)控品血清進行檢測，分析本實驗室的測定值是否處于國家衛(wèi)生部臨床檢驗中心給定靶值的允許范圍內(nèi)。

1.2.3 靈敏度驗證 取廣州中山達安基因HBV-DNA檢測試劑盒自帶（濃度為2.0E6）的標(biāo)準(zhǔn)品，嚴(yán)格按照試劑說明書的要求進行操作，將標(biāo)本上機連續(xù)檢測10次，計算平均值、標(biāo)準(zhǔn)差及變異系數(shù)（CV），并根據(jù)廠家提供的檢測限(1.00×103IU/ml),檢測其CV是否處于廠家提供的允許范圍內(nèi)（CV≤10%）。

2 結(jié)果

2.1 進行精密度驗證試驗的結(jié)果

使用本儀器對血清標(biāo)本進行檢測的批間精密度高值的平均值為6.19ng/ml，標(biāo)準(zhǔn)差為0.30,CV為4.81%；其批間精密度低值的平均值為3.22 ng/ml，標(biāo)準(zhǔn)差為0.15，CV為4.64%。使用本儀器對血清標(biāo)本進行檢測的批內(nèi)精密度為：其高值的平均值為6.44 ng/ml，標(biāo)準(zhǔn)差為0.09，CV為1.47%；其低值的平均值為3.13 ng/ml，標(biāo)準(zhǔn)差為0.15，CV為4.77%。上述檢測值均處于廠家推薦的允許范圍內(nèi),均滿足《中華人民共和國醫(yī)藥行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)(YY/T 1182-2010)核酸擴增檢測用試劑盒（以下簡稱試劑盒）》[5]技術(shù)要求中“5.7.2”條例的要求。該條例明確規(guī)定，標(biāo)本的精密度應(yīng)符合檢測濃度對數(shù)值的變異系數(shù)（CV≤5%）。

2.2 進行準(zhǔn)確度驗證試驗的結(jié)果

使用本儀器對2015年9月由國家衛(wèi)生部臨床檢驗中心提供的質(zhì)控血清進行HBV-DNA檢測，檢測結(jié)果均在衛(wèi)生部臨床檢驗中心提供的上限、下限允許的范圍內(nèi)。詳情見表1。評均通過審核,準(zhǔn)確度均符合標(biāo)準(zhǔn)。

表1 進行本次HBV-DNA測定結(jié)果的分析

2.3 進行靈敏度驗證試驗的結(jié)果

對本儀器檢測系統(tǒng)進行靈敏度驗證的結(jié)果為：平均值為3.43，標(biāo)準(zhǔn)差為0.25，CV為7.29%，CV處于廠家推薦的允許范圍內(nèi)（CV≤10%）。

3 討論

《醫(yī)學(xué)實驗室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則》（ISO15189準(zhǔn)則）中指出，實驗室必須對其所用的檢測系統(tǒng)進行性能驗證。筆者根據(jù)ISO15189準(zhǔn)則及CNAS-CL36準(zhǔn)則在基因擴增檢驗方面的相關(guān)要求及羅氏Cobas Z480基因擴增儀性能指標(biāo)的相關(guān)要求，結(jié)合本實驗室質(zhì)量體系在儀器性能指標(biāo)方面的要求，對該儀器的批內(nèi)精密度、批間精密度、檢測的準(zhǔn)確度及靈敏度進行驗證。

筆者所在單位對羅氏Cobas Z480基因擴增儀檢測系統(tǒng)進行性能驗證的結(jié)果顯示，該儀器的精密度、靈敏度及準(zhǔn)確度均較高，操作的重復(fù)性好，其批內(nèi)和批間變異系數(shù)均在可接受的范圍內(nèi)，能夠有效地進行乙型肝炎病毒定量檢測。我們對該儀器3項性能的驗證結(jié)果與相關(guān)文獻[6-8]報道的結(jié)果相一致。

乙型病毒性肝炎是一種因感染乙型肝炎病毒(HBV)引起的肝炎。我國屬于HBV感染的流行區(qū)。我們居民進行乙型肝炎表面抗原（HBsAg）檢測結(jié)果的陽性率約為9.09%[9]。近年來，我國針對乙型病毒性肝炎的流行情況采取一系列的防疫措施，使該病的流行病學(xué)特點發(fā)生了顯著的變化[10]。傳統(tǒng)的HBV血清學(xué)標(biāo)志物檢測法屬于定性檢測法，可間接了解患者體內(nèi)HBV復(fù)制的情況。但當(dāng)該病毒發(fā)生變異時，對其進行定性檢測的效果可顯著變差。目前，臨床上主要采用PCR技術(shù)進行HBV-DNA檢測，以獲取分子生物學(xué)實驗方面的診斷依據(jù)。該技術(shù)不僅可以對HBV進行定性檢測，還可定量檢測患者體內(nèi)HBV的復(fù)制情況。進行HBV-DNA檢查可從血清中直接檢測HBV的存在與否[11]，其操作快速、靈敏度較高、獲取試驗報告的周期較短。根據(jù)對患者進行HBV-DNA檢查的結(jié)果進行分析，可判斷其體內(nèi)HBV的復(fù)制情況及傳染性，有助于臨床醫(yī)師為其設(shè)計治療方案、選用藥物、觀察療效及評估預(yù)后。

進行儀器性能的驗證是ISO15189準(zhǔn)則中要求完成的重要工作之一。根據(jù)新版ISO15189認(rèn)可準(zhǔn)則和《醫(yī)學(xué)實驗室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則在分子診斷領(lǐng)域的應(yīng)用說明》的要求，筆者對本實驗室羅氏Cobas Z480基因擴增儀檢測系統(tǒng)的準(zhǔn)確度、精密度及靈敏度進行驗證。驗證的結(jié)果顯示，該儀器檢測系統(tǒng)的精密度、敏感度、準(zhǔn)確度均較高，重復(fù)操作性好，其批內(nèi)精密度和批間精密度的變異系數(shù)均在可接受范圍內(nèi)，其3項性能的指標(biāo)均與廠家提供的性能參數(shù)相符合，可以在實驗室被用于進行臨床檢測工作。

[1] 中國合格評定國家認(rèn)可委員會．ISO15189：2012醫(yī)學(xué)實驗室質(zhì)量和能力的專用要求[S]．北京：中國合格評定國家認(rèn)可委員會，2012.

[2] 中國合格評定國家認(rèn)可委員會．CNAS-CL36醫(yī)學(xué)實驗室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則在基因擴增檢驗領(lǐng)域的應(yīng)用說明[S]．北京：中國合格評定國家認(rèn)可委員會，2012.

[3] 中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局，中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員院會．GB／T22576．2008醫(yī)學(xué)實驗室一質(zhì)量和能力的專用要求[S]．北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2008．

[4] 中華人民共和國衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，WS/T420-2013臨床實驗室對商品定量試劑盒分析性能的驗證[S]. 北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2013.

[5] 國家食品藥品監(jiān)督管理局.YY/T 1182-2010核酸擴增檢測用試劑（盒）[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2010.

[6] 羅卉麗,袁杭,毛源,等. 分子診斷定量項目分析性能驗證程序探討[J].國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志, 2015,36(16)： 2360-2362.

[7] 王治國. 臨床檢驗方法確認(rèn)與性能驗證[M]. 北京：人民衛(wèi)生出版社， 2009.

[8] 康鳳鳳，王治國．ISO15189：2012與臨床檢驗定量檢測方法確認(rèn)和性能驗證[J]．臨床檢驗雜志，2013，31(12)：881-884.

[9] Zhang F,Fan YC,Mu NN,et al.Rapid.Exportin 4 gene expression an d DNA promoter methylation status in chronic hepatitis B viru s[J]．J Viral Hepat,2014,21(4)：241-250.

[10] 朱科倫，朱郇憫，曾文鋌，等.乙型肝炎流行病學(xué)的研究新進展[J].廣州醫(yī)藥，2010,41（4）：1-2.

[11] 倪艷，蔣鳳，徐華，等.四環(huán)素調(diào)控表達腫瘤壞死因子α抗乙型肝炎病毒的實驗研究[J]．中華肝病雜志，2014,22（3）：213-218.

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2095-7629-（2017）14-0134-02