移液槍在小鼠內眥取血中的應用

張 穎，任 波，田 楓

(北京大學醫學部實驗動物科學部，北京 100191)

移液槍在小鼠內眥取血中的應用

張 穎，任 波，田 楓*

(北京大學醫學部實驗動物科學部，北京 100191)

目的介紹移液槍用于小鼠內眥取血的方法。方法20只C57BL/6J雄性小鼠，分為移液槍組和毛細管組，分別用移液槍和毛細管進行小鼠內眥定量取血3次，記錄兩組采血完成時間和采血成功率。結果兩組采血成功率為100%，但移液槍組采血完成時間快于毛細血管組，且差異有顯著性(P< 0.05)。結論直接應用移液槍為小鼠內眥取血提供了一種簡便易行且相對安全的方法。

小鼠；內眥取血；移液槍

小鼠采血是動物實驗中常用的操作技術之一，常見的小鼠采血方法有內眥采血、下頜靜脈采血、斷頭采血、心臟采血、斷尾采血等[1]，其中內眥采血是動物在活體情況下，能夠采到相對多的血量且操作簡便的方法，采血時一般采用毛細管刺破小鼠內眥取血。在實際工作中，我們嘗試使用移液槍和槍頭替代毛細管進行內眥取血，取得了較好的效果。本文以C57BL/6J小鼠為例，探討移液槍及槍頭在內眥取血中的應用。

1 材料和方法

1.1實驗動物

SPF級C57BL/6J小鼠，20只，雄性，6～8周，18～22 g，購自北京大學醫學部實驗動物科學部[SCXK (京) 2016-0010],飼養于北京大學醫學部實驗動物科學部屏障環境中[SYXK (京) 2016-0041],飼喂全價SPF級大、小鼠繁殖飼料(北京科澳協力飼料有限公司生產)[SCXK (京) 2014-0010]。

1.2主要儀器

20 μL移液槍(大龍興創實驗儀器公司生產)，無菌槍頭，無菌毛細管(華西醫科大學生產)。

1.3實驗方法

注：A：采血前；B：采血中。圖1 移液槍用于內眥取血Note. A: Before blood sampling; B: Blood sampling.Fig.1 Blood collection from the inner canthus using a pipettor

實驗分為移液槍組和毛細管組兩組，每組10只小鼠。應用移液槍取血時，左手抓取、保定小鼠，將一側眼球突出，右手持20 μL移液槍將槍頭約水平角度插入小鼠內眼瞼(感覺有落空感)，即拔出槍頭，血液自行流入EP管內(圖1)。應用毛細管取血時，左手抓取、保定小鼠，將一側眼球突出，右手持已備好的毛細管沿45°角插入小鼠內眼瞼(感覺有落空感)，后捻轉毛細管，血液延管壁流入EP管內(圖2)。小鼠每隔7 d采血一次，共采血3次。本實驗研究經由實驗動物使用與管理委員會批準(IACUC：LA2013-18)，實驗操作過程中按實驗動物使用的3R原則給予人道主義關懷，取血前眼部滴加普魯卡因局麻藥，取血結束用干棉球壓迫止血。每次取血記錄完成的時間，并觀察取血成功率。單次取血量> 0.1 mL，且無溶血，經離心獲得清亮血清即為采血成功。

1.4統計學方法

注：A：采血前；B：采血中。圖2 毛細管用于內眥取血Note. A: Before blood sampling; B: Blood sampling.Fig.2 Blood collection from the inner canthus using a glass capillary

2 結果

2.1內眥取血所用時間及成功率

實驗結果顯示，使用移液槍和毛細管均能100%成功完成小鼠內眥取血，移液槍組完成時間快于毛細管組，且差異有顯著性(P< 0.05)，見表1。

Tab.1Time consumption and success rate of blood collection from the inner canthus of mice

組別Groups取血所用時間/sTimeconsumption成功率/%Successrate移液槍組Pipettor10.2±0.6*100毛細管組Glasscapillary10.9±0.8100

注：與毛細管組相比，*P< 0.05。

Note. Compared with the capillary group,*P< 0.05.

2.2移液槍和毛細管用于內眥取血的比較

從固定方法、完成時間、反復采血性、小鼠掙扎程度、出血量、對眼部損傷、動物疼痛感七個方面對移液槍和毛細管用于內眥取血進行比較(見表2)。移液槍較毛細管應用于小鼠內眥取血具有一定的優勢，可以在小鼠采血時選擇應用。

表2 移液槍和毛細管用于內眥取血的比較

3 討論

動物實驗中最基本的實驗技術，如抓取與固定方法、采血方法等，雖然已經有較完整的實驗方法，但在實際工作中操作者往往會摸索出更有效、更簡便易行的的實驗技巧[2-4]。

小鼠體積小，血量有限，如果需要在小鼠清醒的情況下，能夠反復采血，采到相對多的血量，而且操作簡便的方法，內眥取血法是首選。內眥取血法一般選取毛細管進行，但是毛細管較脆，在取血時易折斷在眼球內。另外。有時毛細管會掉落在EP管內，這種情況下一是使采血時間延長，二是可能造成溶血。同時對于那些內眥取血不使用局麻藥的小鼠，毛細管對動物造成的疼痛感較強，動物掙扎現象比較明顯，亦增加了采血難度。另外由于毛細管較硬，易造成小鼠失明、眶周感染等相關眼部損傷。

王召波等[5]采用自制取血管用于內眥取血，取得了較好的效果。該方法是取200 μL的吸頭1支，視具體情況剪去前端長0.3～0.4 cm部分。取直徑約1 mm的毛細玻璃管1支，沿吸頭上端插入并從下端拔出至吸頭與玻璃管套疊部分長0.3～0.5 mm，經酒精燈適當燒灼，兩部分可緊密連接。使用小砂輪在適當長度切割，掰斷去除冗長部分毛細管，裸露毛細管長度以2.0～2.5 cm為佳。經過實驗分析，其取血效果較佳。我們則直接使用20 μL移液槍進行內眥取血，亦取得了較理想的效果。

本文選用C57BL/6J雄性小鼠作為實驗對象，是由于C57BL/6J雄性小鼠性格活潑，易逃脫，抓取、固定較BALB/C、ICR等小鼠更困難，內眥取血時有一定的難度，以C57BL/6J雄性小鼠為例介紹移液槍用于內眥采血的方法具有一定的代表性和說服力。

由此可見，移液槍直接用于內眥取血，方法簡便易行，只要實驗人員掌握內眥取血的技術，不需要訓練，直接應用此法即能快速順利完成采血過程。

[1] 陳霆, 李楓棣, 鄧巍, 等. 小鼠內眥靜脈叢注射與尾靜脈注射比較 [J]. 中國比較醫學雜志, 2014, 24(1): 72-73.

[2] 余琛琳, 趙樂, 湯球, 等. 一項小鼠采血新技術——頜下靜脈叢采血法 [J]. 中國比較醫學雜志, 2008, 18(12): 53-54.

[3] 崔潔, 朱玲玉, 陳興智, 等. 一種自制的小鼠斷尾采血簡易裝置 [J]. 蚌埠醫學院學報, 2013, 38(8): 1050-1051, 1055.

[4] 李軼倞, 張娜, 田楓. 一種簡易小鼠尾靜脈注射固定法——籠蓋壓制法 [J]. 中國比較醫學雜志, 2016, 26(10): 79-81.

[5] 王召波, 董靜. 自制內毗采血器用于小鼠采血效果分析 [J]. 齊魯醫學雜志, 2015, 30(1): 82-83.

Useofapipettorforbloodcollectionfromtheinnercanthusofmice

ZHANG Ying， REN Bo， TIAN Feng*

(Department of Laboratory Animal Science, Peking University Health Science Center, Beijing 100191, China)

ObjectiveTo explore the practical value of a modified method for blood collection from the inner canthus of mice using a pipettor.MethodsA total of 20 male C56BL/6J mice were divided into two groups, the pipettor group and the capillary group (10 mice in each group). Blood samples were taken 3 times from the inner canthus of the mice with a pipettor or glass capillary, respectively, and the time-consumption and success rate of the two groups were recorded and compared.ResultsThe success rates of both the blood collection methods were 100%. However, in the pipettor group, the blood collection was completed faster than the capillary group with a significant difference (P< 0.05).ConclusionsIt is a relatively simple and safe method for blood collection from the inner canthus of mice using a pipettor.

Mice; Blood collection from the inner canthus; Pipettors

北京高等學校青年英才計劃項目(編號：YETP0057)。

張穎(1994 -)，女，技士，專業：動物實驗及管理。E-mail: 1146878172@qq.com

田楓(1973 -)，女，博士，副主任技師，研究方向：實驗動物研究與管理方面研究。E-mail: fengtian_38@163.com

R-33

A

1671-7856(2017) 11-0084-03

10.3969.j.issn.1671-7856. 2017.11.017

2017-03-07