HPLC測定酚麻美敏片中對乙酰氨基酚的含量

江蘇省泰州市食品藥品檢驗所（225300）黃小琴

江蘇蘇中藥業集團股份有限公司（225500）馬繼梅

酚麻美敏片是由對乙酰氨基酚、鹽酸偽麻黃堿、氫溴酸右美沙芬、馬來酸氯苯那敏組成的復方制劑，臨床適用于緩解由感冒或流感引起的發熱、頭痛、咽痛、肌肉酸痛、鼻塞流涕、打噴嚏、咳嗽等癥狀。酚麻美敏片質量標準中，對乙酰氨基酚的含量采用紫外-可見分光光度法測定，該法專屬性差，靈敏度低。本文建立的高效液相色譜法可以準確、高效地測定對乙酰氨基酚的含量。

附圖 HPLC圖

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Waters 2695型高效液相色譜儀，包括Waters 2695泵、2996檢測器、Empower色譜工作站；Mettler AG-135十萬分之一電子天平。

1.2 試藥 對乙酰氨基酚對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：100018-200408，含量為100%）；酚麻美敏片（上海強生制藥有限公司，批號：111123832、120107514、111110814）；甲醇（色譜純，Fisher），水（Milli-Q超純水），冰醋酸為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱：Wters SunFire C18柱（4.6mm×250mm，5μm）；流動相：甲醇-水-冰醋酸（35∶65∶1.5）；流速：1mL/min；檢測波長：257nm；柱溫：35℃；進樣量：20μL。在此色譜條件下，理論板數按對乙酰氨基酚計不低于1000[1]。

附表1 回收率測定結果（n＝9）

附表2 樣品含量測定結果

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液制備 精密稱取對乙酰氨基酚對照品130.26mg，置20mL量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，得對乙酰氨基酚對照品儲備液。精密量取對照品儲備液2mL置10mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，作為對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液制備 精密稱取樣品適量（約相當于對乙酰氨基酚65mg），置50mL量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，取續濾液，得供試品溶液。

2.2.3 陰性對照溶液制備 按處方比例和制劑工藝制備不含對乙酰氨基酚成分的陰性樣品，按供試品溶液制備的方法制備，得陰性對照溶液。以上溶液各進樣20μL，注入液相色譜儀，測定，結果在對乙酰氨基酚吸收峰處，陰性對照溶液無吸收，對測定結果無干擾，見附圖。

2.3 線性關系考察 分別精密吸取對照品儲備液（6.5130mg/mL）1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL，分別置10mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，過濾，分別得0.6513mg/mL、1.3026mg/mL、1.9539mg/mL、2.6052mg/mL、3.2565mg/mL的溶液。依次進樣20μL，按上述色譜條件測定，以峰面積積分值（y）為縱坐標，對照品量（x）為橫坐標，進行線性回歸分析，回歸方程：y＝650.0720x－0.0880，r＝1.0000（n＝5）。結果表明，對乙酰氨基酚在0.6513～3.2565mg/mL范圍內，與峰面積呈良好線性關系。

2.4 精密度試驗 精密吸取濃度為1.3026mg/mL對照品溶液20μL，重復進樣6次，按上述色譜條件測定。對乙酰氨基酚RSD為0.52%（n＝6）。

2.5 重復性試驗 精密稱取同一批號的供試品（111123832）6份，按供試品溶液制備方法制備，得濃度約為1.3mg/mL的供試品溶液。分別精密吸取以上溶液各20μL注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定，對乙酰氨基酚RSD為0.38%（n＝6）。

2.6 穩定性試驗 精密吸取同一份供試品溶液20μL，按上述色譜條件，分別在0，3，6，9，12，24h進行測定，記錄峰面積，結果乙酰氨基酚RSD為0.42%（n＝6），表明供試品溶液在24h內穩定。

2.7 加樣回收率試驗 取同一批次（111123832）已知含量的供試品9份，按大約樣品含量的80%、100%、120%分別精密加入對乙酰氨基酚對照品溶液適量，按供試品溶液制備方法制得加樣回收率溶液9份，按上述色譜條件測定，由測得量與加入量計算回收率（見附表1），表明該方法回收率良好。

2.8 檢測限和定量限 按峰高為噪音的3倍計算，對乙酰氨基酚最低檢測濃度為0.010mg/L。按峰高為噪音的10倍計算，對乙酰氨基酚最低定量濃度為0.027mg/L。

2.9 樣品含量測定 取3批樣品按供試品溶液制備方法制備供試液，按上述色譜條件測定，計算對乙酰氨基酚的含量，并與紫外-可見分光光度法結果比較，見附表2。

3 討論

3.1 筆者利用Waters 2996檢測器對供試品溶液和對照品溶液在200～400nm進行3D圖譜掃描，結果對乙酰氨基酚均在257nm的波長處有最大吸收，因此選擇257nm為測定波長。

3.2 酚麻美敏片臨床應用廣泛。采用HPLC法對酚麻美敏片中對乙酰氨基酚進行定量，可提升檢驗效率，且與原檢驗方法比較，可避免輔料干擾，提高準確性。

3.3 實驗結果顯示，HPLC法測定含量，樣品預處理簡單，陰性對照無干擾，靈敏度高，重現性好，專屬性強，更適用于對乙酰氨基酚含量控制。