釀酒酵母不同培養(yǎng)方式和生長(zhǎng)階段的代謝組差異分析

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(浙江工業(yè)大學(xué) 生物工程學(xué)院，浙江 杭州 310014)

釀酒酵母不同培養(yǎng)方式和生長(zhǎng)階段的代謝組差異分析

孫杰，于欣君，王微，朱有貴，姜杰，汪釗

(浙江工業(yè)大學(xué) 生物工程學(xué)院，浙江 杭州 310014)

與液態(tài)發(fā)酵相比，對(duì)固態(tài)發(fā)酵過(guò)程中酵母生長(zhǎng)期轉(zhuǎn)換前后的生理狀態(tài)研究較少.細(xì)胞內(nèi)的代謝物組成變化與生理狀態(tài)密切相關(guān).研究了釀酒酵母固態(tài)和液態(tài)發(fā)酵狀態(tài)下，指數(shù)生長(zhǎng)期和二次生長(zhǎng)期菌體的胞內(nèi)代謝組差異.結(jié)果表明生長(zhǎng)階段的轉(zhuǎn)換伴隨著中心代謝的復(fù)雜變化.液態(tài)和固態(tài)發(fā)酵過(guò)程中，分別檢測(cè)到了131種和117種不同生長(zhǎng)階段的差異代謝物.兩個(gè)生長(zhǎng)階段的主要代謝差異均反映在蛋白質(zhì)合成、氨基酸代謝和三羧酸循環(huán)等代謝途徑上，與培養(yǎng)方式無(wú)關(guān).本研究為進(jìn)一步闡明不同發(fā)酵方式下酵母的代謝調(diào)控機(jī)制奠定了基礎(chǔ).

釀酒酵母；代謝組分析；固態(tài)發(fā)酵；指數(shù)生長(zhǎng)；二次生長(zhǎng)

釀酒酵母是研究微生物生理代謝的模式生物[1]，并且廣泛應(yīng)用于釀酒、面包烘焙和飼料工業(yè)[2]等領(lǐng)域.在生物催化領(lǐng)域也有廣泛的應(yīng)用[3].在酵母發(fā)酵的初始階段，利用糖作為碳源，細(xì)胞迅速生長(zhǎng)和分裂，生物質(zhì)得到指數(shù)生長(zhǎng)，該階段稱(chēng)為指數(shù)生長(zhǎng)階段.當(dāng)培養(yǎng)基中碳源為限制因素時(shí)，細(xì)胞生長(zhǎng)速率下降，從發(fā)酵代謝轉(zhuǎn)變?yōu)楹粑x，生長(zhǎng)階段轉(zhuǎn)變至二次生長(zhǎng)階段，此時(shí)細(xì)胞開(kāi)始利用培養(yǎng)基中產(chǎn)生的乙醇作為新的碳源.最終，當(dāng)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)耗盡，細(xì)胞進(jìn)入靜止期，生長(zhǎng)停滯，生物量保持恒定[4].固態(tài)發(fā)酵(Solid-state fermentation，SSF)是在無(wú)水或接近無(wú)水狀態(tài)下的固態(tài)基質(zhì)上進(jìn)行的發(fā)酵過(guò)程[5].固態(tài)發(fā)酵經(jīng)常用于發(fā)酵食品[6]、生產(chǎn)酶[7]以及抗生素、真菌毒素等次生代謝產(chǎn)物[8].與液態(tài)發(fā)酵(Submerged fermentation，SmF)相比，固態(tài)發(fā)酵過(guò)程中細(xì)胞移動(dòng)、胞內(nèi)代謝產(chǎn)物和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的擴(kuò)散均受到限制.另外，固態(tài)發(fā)酵期間微生物的生長(zhǎng)、基因表達(dá)和代謝情況均不同于液態(tài)發(fā)酵[9-10]，這使得兩種發(fā)酵過(guò)程中微生物胞內(nèi)營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)截然不同.

與液態(tài)培養(yǎng)相比，對(duì)固態(tài)發(fā)酵過(guò)程中酵母生長(zhǎng)期轉(zhuǎn)換前后的生理狀態(tài)研究較少.細(xì)胞內(nèi)的代謝物組成變化與生理狀態(tài)密切相關(guān).筆者觀察了釀酒酵母固態(tài)和液態(tài)發(fā)酵狀態(tài)下，指數(shù)生長(zhǎng)期和二次生長(zhǎng)期菌體內(nèi)代謝組差異，為進(jìn)一步深入闡明固態(tài)發(fā)酵的代謝調(diào)控機(jī)制奠定了基礎(chǔ).

1 材料與方法

1.1 材 料

1.1.1 菌株與培養(yǎng)基

SaccharomycescerevisiaeWZS017，為本實(shí)驗(yàn)室分離得到的二倍體野生型酵母.YPD液體培養(yǎng)基組成為2%葡萄糖，1%酵母提取物，2%蛋白胨.

1.1.2 主要儀器

氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀(LECO Corporation, St Joseph, MI, USA)、冷凍離心機(jī)(德國(guó)SIGMA 2-16PK)、負(fù)壓烘箱(上海博迅實(shí)業(yè)有限公司).

1.1.3 主要試劑

甲氧胺鹽酸鹽、吡啶、2-氯苯丙氨酸、N,O-雙(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺(BSTFA)和三甲基一氯硅烷(TMCS)均購(gòu)自Sigma；甲醇和正己烷為國(guó)產(chǎn)色譜純.

1.2 方 法

1.2.1 酵母培養(yǎng)條件

釀酒酵母30 ℃過(guò)夜預(yù)培養(yǎng)于YPD液體培養(yǎng)基中.將預(yù)培養(yǎng)液600 nm吸光度調(diào)至0.25.在液態(tài)培養(yǎng)中，1 mL酵母預(yù)培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移至30 mL YPD液體培養(yǎng)基中，30 ℃，150 r/min進(jìn)行培養(yǎng).在固態(tài)培養(yǎng)中，使用直徑2～3 mm的發(fā)泡聚苯乙烯顆粒作為惰性固態(tài)載體，121 ℃滅菌15 min，顆粒會(huì)縮小約2/3(Brydson，1982).將3.2 g滅菌的發(fā)泡聚苯乙烯顆粒置于100 mL三角瓶中，接種1 mLOD600調(diào)至0.25的酵母預(yù)培養(yǎng)物，再加入1.8 mL YPD液體培養(yǎng)基，接種后沒(méi)有觀察到游離水存在，30 ℃靜置培養(yǎng).

1.2.2 生長(zhǎng)曲線繪制

通過(guò)測(cè)量600 nm的光密度進(jìn)行酵母細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線測(cè)定.固態(tài)發(fā)酵過(guò)程中酵母生長(zhǎng)曲線的測(cè)定是將培養(yǎng)物中液體加至30 mL，劇烈振蕩10 min后，進(jìn)行測(cè)定.生長(zhǎng)速率計(jì)算公式為

μ=(lnX2-lnX1)/(t2-t1)

式中：X1，X2分別為培養(yǎng)物在培養(yǎng)時(shí)間t1和t2的OD600吸光度.實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次.

1.2.3 胞內(nèi)代謝物提取

1.2.4 GC-MS測(cè)定

取1 μL衍生化后的樣品注入GC-TOF/MS系統(tǒng)進(jìn)行測(cè)定.柱子為非極性DB-5毛細(xì)管柱(30 m×250 μm I.D., J&W Scientific, Folsom, CA)，氦氣作為載氣，流速1.0 mL/min.GC溫度程序?yàn)?5 ℃/min從50 ℃升到125 ℃, 然后5 ℃/min升到210 ℃,10 ℃/min升到270 ℃，15 ℃/min升至305 ℃，305 ℃保持6 min.離子源溫度230 ℃.質(zhì)譜設(shè)置為全掃描模式，掃描范圍為m/z=50～600.通過(guò)ChromaTOF軟件使用標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫(kù)和Feinh數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行代謝產(chǎn)物鑒定.相似度大于70%被認(rèn)定為參考標(biāo)準(zhǔn)代謝物.

1.2.5 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析

液態(tài)發(fā)酵21 h的樣本個(gè)數(shù)為5個(gè)，其余每組樣品個(gè)數(shù)為6個(gè).每個(gè)樣品平行測(cè)定兩次.每個(gè)樣品各個(gè)代謝物的峰面積除以該樣品所有代謝物峰面積之和，得到該代謝物的細(xì)胞內(nèi)相對(duì)量.使用SPSS 13.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行t檢驗(yàn).p<0.05代表差異顯著，p<0.01代表差異極顯著.

使用SIMCA軟件(Umetrics，Umea，Sweden)進(jìn)行非監(jiān)督的主成分分析(PCA)區(qū)分不同培養(yǎng)方式下不同生長(zhǎng)階段的酵母樣本.使用PLS-DA根據(jù)代謝物輪廓差異對(duì)樣品進(jìn)行分組，并指出差異代謝物.使用R2和Q2評(píng)估所構(gòu)建的PCA和PLS-DA模型的質(zhì)量.通過(guò)PLS-DA模型，選擇VIP>1的代謝物作為指數(shù)生長(zhǎng)和二次生長(zhǎng)階段的候選差異代謝物.將候選差異代謝物的相對(duì)量進(jìn)行t檢驗(yàn).只有p<0.05的代謝物定義為差異代謝物.為進(jìn)一步闡明差異代謝物的生物學(xué)意義，使用MetaboAnalyst 3.0(http://www.metaboanalyst.ca)的Enrichment Analysis模塊，將差異代謝物富集在代謝途徑上，使用超幾何分布法計(jì)算富集p值.

2 結(jié)果與分析

2.1 釀酒酵母固態(tài)發(fā)酵和液態(tài)發(fā)酵的生長(zhǎng)曲線

為了確定酵母指數(shù)生長(zhǎng)和二次生長(zhǎng)階段代謝物提取的時(shí)間點(diǎn)，首先繪制了固態(tài)發(fā)酵和液態(tài)發(fā)酵的生長(zhǎng)速率曲線.在接種量相同的條件下，固態(tài)發(fā)酵過(guò)程中酵母細(xì)胞的生物量遠(yuǎn)低于液態(tài)發(fā)酵(圖1a).如圖1(b)所示，釀酒酵母的生長(zhǎng)期分為指數(shù)期和二次生長(zhǎng)期，不同的生長(zhǎng)階段，生長(zhǎng)速率差異較大.在本實(shí)驗(yàn)條件下，固態(tài)發(fā)酵酵母細(xì)胞在15 h結(jié)束指數(shù)生長(zhǎng)，之后的二次生長(zhǎng)階段在29 h結(jié)束.而液態(tài)發(fā)酵的這兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)分別是17 h和33 h.兩種培養(yǎng)方式下酵母的生長(zhǎng)速率均在接種后7 h達(dá)到最高，在指數(shù)生長(zhǎng)階段，固態(tài)發(fā)酵細(xì)胞的生長(zhǎng)速率低于液態(tài)發(fā)酵，然而到了二次生長(zhǎng)階段，兩種培養(yǎng)方式的生長(zhǎng)速率則相差不大.在兩種發(fā)酵培養(yǎng)方式中，11 h和21 h均分別位于指數(shù)生長(zhǎng)期和二次生長(zhǎng)期，將這兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)確定為兩個(gè)生長(zhǎng)階段的取樣時(shí)間點(diǎn).

圖1 酵母液態(tài)發(fā)酵和固態(tài)發(fā)酵的生長(zhǎng)曲線和生長(zhǎng)速率曲線Fig.1 Growth curve and growth rate of yeast in with solid-state and submerged fermentation

2.2 酵母液態(tài)和固態(tài)發(fā)酵的胞內(nèi)代謝物輪廓

酵母細(xì)胞兩種發(fā)酵方式下的樣品進(jìn)行代謝物提取和GC-MS測(cè)定后，PCA分析表明各個(gè)樣品可以根據(jù)重新組合后的變量進(jìn)行正確分組(R2X=0.678,Q2=0.561)，由于發(fā)酵方式和生長(zhǎng)階段的不同導(dǎo)致了67.8%的樣品數(shù)據(jù)差異見(jiàn)圖2(a).

為了確定差異代謝物，進(jìn)一步使用PLS-DA模型進(jìn)行樣品分類(lèi)見(jiàn)圖2(b，c).建立PLS-DA模型，成對(duì)比較不同培養(yǎng)方式下的兩個(gè)生長(zhǎng)階段的差異代謝物.對(duì)于液態(tài)發(fā)酵的指數(shù)生長(zhǎng)(SmF11 h)和二次生長(zhǎng)階段(SmF21 h)的樣品組PLS-DA模型，R2X=0.656，R2Y=0.998，Q2=0.982；對(duì)于固態(tài)發(fā)酵的指數(shù)生長(zhǎng)(SSF11 h)和二次生長(zhǎng)階段(SSF21 h)的樣品組PLS-DA模型，R2X=0.545，R2Y=0.991，Q2=0.934.說(shuō)明PLS-DA模型成功構(gòu)建，具有很高的擬合度和預(yù)測(cè)能力.不同的生長(zhǎng)階段的代謝物具有很大的差異，可以根據(jù)變量重新組合后的主成分進(jìn)行分辨.

VIP>1的代謝物的相對(duì)量差異使得不同樣品在PLS-DA模型中成功分組[12].將VIP>1且p<0.05的代謝物作為指數(shù)生長(zhǎng)和二次生長(zhǎng)階段的差異代謝物.基于PLS-DA的結(jié)果，液態(tài)發(fā)酵的指數(shù)生長(zhǎng)(SmF11 h)和二次生長(zhǎng)階段(SmF21 h)的差異代謝物共有131種，固態(tài)發(fā)酵的指數(shù)生長(zhǎng)(SSF11 h)和二次生長(zhǎng)階段(SSF21 h)的差異代謝物共有117種.

圖2 酵母液態(tài)和固態(tài)培養(yǎng)條件下酵母胞內(nèi)代謝物的主成分分析Fig.2 Scores plots for yeast metabolites of SmF and SSF

2.3 同一培養(yǎng)方式不同生長(zhǎng)階段的代謝物變化

SmF11 h與SmF21 h和SSF11 h與SSF21 h具有共同的93種差異代謝物，表1列出了其中的一些.代謝物的途徑富集分析表明，這些共同差異代謝物主要涉及蛋白質(zhì)合成和氨基酸代謝等與細(xì)胞生長(zhǎng)密切相關(guān)的代謝途徑(圖3)，因此無(wú)論是液態(tài)培養(yǎng)還是固態(tài)培養(yǎng)，蛋白質(zhì)和氨基酸的代謝差異是指數(shù)生長(zhǎng)階段和二次生長(zhǎng)階段的主要代謝差異.

表1 SmF11 h與SmF21 h和SSF11 h與SSF21 h的一些共同差異代謝物細(xì)胞內(nèi)相對(duì)量1)Table 1 The relative content of some differential metabolites shared by SmF11 h versus SmF21 h and SSF11h versus SSF21 h

注：1) *表示同一培養(yǎng)方式下指數(shù)增長(zhǎng)期與二次生長(zhǎng)期差異顯著(p< 0.05)；**表示差異極顯著(p< 0.01).同表2，3.

圖3 SmF11 h與SmF21 h和SSF11 h與SSF21 h的共同差異代謝物代謝途徑富集Fig.3 Pathway enrichment of differential metabolites shared by SmF11 h versus SmF21 h and SSF11 h versus SSF21 h

上述富集到蛋白質(zhì)合成過(guò)程中的氨基酸包括酪氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸、蘇氨酸、天冬氨酸、半胱氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、谷氨酸和纈氨酸.與指數(shù)生長(zhǎng)期相比，二次生長(zhǎng)階段菌體細(xì)胞更低的生長(zhǎng)速率和更少的蛋白質(zhì)合成量，使得氨基酸在細(xì)胞中得到積累.研究表明：上述氨基酸除半胱氨酸以外，在兩種培養(yǎng)方式下，二次生長(zhǎng)期和指數(shù)期的濃度之比變化不大.鳥(niǎo)氨酸、環(huán)亮氨酸和半胱氨酰甘氨酸等非蛋白質(zhì)氨基酸或氨基酸衍生物也有類(lèi)似的規(guī)律.在液態(tài)培養(yǎng)過(guò)程中，二次生長(zhǎng)階段胞內(nèi)谷氨酸和半胱氨酸相對(duì)量分別為指數(shù)生長(zhǎng)期的168.3和15.4倍，而在固態(tài)培養(yǎng)條件下，二次生長(zhǎng)階段的這兩種氨基酸的量為指數(shù)生長(zhǎng)期的25.7和7.0倍.因此，谷氨酸和半胱氨酸可能在兩種不同發(fā)酵方式下的細(xì)胞代謝網(wǎng)絡(luò)中扮演重要角色.富馬酸、蘋(píng)果酸和琥珀酸等三羧酸循環(huán)的中間代謝物也在二次生長(zhǎng)階段大量積累，這與細(xì)胞在此階段生長(zhǎng)速率降低、能量代謝減少和有氧呼吸受到抑制有關(guān).這與Frick等[13]的報(bào)道一致.另外，作為細(xì)胞膜成分的飽和脂肪酸棕櫚酸在液態(tài)培養(yǎng)時(shí)，二次生長(zhǎng)階段細(xì)胞內(nèi)相對(duì)量顯著低于指數(shù)期，而在固態(tài)培養(yǎng)時(shí)，則在兩階段相差不大.

除上述93種共同的差異代謝物外，SmF11 h與SmF21 h之間特有的差異代謝物的數(shù)目為38種，SSF11 h與SSF21 h之間特有的差異代謝物為24種.這些差異代謝物分別決定了液態(tài)和固態(tài)培養(yǎng)方式中，不同生長(zhǎng)階段轉(zhuǎn)化前后的代謝網(wǎng)絡(luò)差異.

如表2所示，在檢測(cè)到的SmF11 h與SmF21 h之間特有的差異代謝物中，不飽和脂肪酸油酸相對(duì)量在二次生長(zhǎng)階段顯著降低.油酸是微生物細(xì)胞膜的組成部分，其顯著降低的細(xì)胞內(nèi)相對(duì)量或與酵母細(xì)胞在二次生長(zhǎng)階段的細(xì)胞生長(zhǎng)速率顯著降低、細(xì)胞膜流動(dòng)性下降有關(guān).天冬氨酸、異亮氨酸及高絲氨酸、正亮氨酸和同型半胱氨酸等一些氨基酸衍生物在二次生長(zhǎng)階段胞內(nèi)大量積累.4-羥基丁酸一些小分子羧酸等次生代謝產(chǎn)物在二次生長(zhǎng)階段開(kāi)始合成或積累.

表2SmF11 h與SmF21 h的一些差異代謝物細(xì)胞內(nèi)相對(duì)量

Table2TherelativecontentofsomedifferentialmetabolitesbetweenSmF11handSmF21h

代謝物細(xì)胞內(nèi)相對(duì)量SmF11hSmF21holeicacid1435．8±531．0442．8±41．2??L?homoserine0．6±0．24．0±0．7??norleucine24．6±10．055．7±13．4??homocystine—18．1±5．0??asparticacid112．2±46．31108．2±115．7??isoleucine324．1±112．7810．9±128．4??4?hydroxybutyricacid—4．7±1．2??adipicacid1．7±0．93．6±0．2??gluconicacid20．9±7．8304．7±173．5??

SSF11 h與SSF21 h之間獨(dú)有的24種差異代謝物，也在生長(zhǎng)階段轉(zhuǎn)變中發(fā)揮重要作用.表3列出了該過(guò)程中一些重要的差異代謝物.在液態(tài)培養(yǎng)過(guò)程中，這些代謝物對(duì)指數(shù)和二次生長(zhǎng)的差異貢獻(xiàn)率較低.而在固態(tài)培養(yǎng)過(guò)程中差異較大，可能與細(xì)胞內(nèi)部水分含量較低，導(dǎo)致的生長(zhǎng)狀態(tài)改變有關(guān).在固態(tài)發(fā)酵二次生長(zhǎng)階段，細(xì)胞內(nèi)積累了更高量的葡萄糖和赤蘚糖，表明該階段的碳源利用效率與液態(tài)發(fā)酵存在較大差異.固態(tài)發(fā)酵條件下，代謝產(chǎn)物無(wú)法擴(kuò)散出細(xì)胞，檸檬酸大量積累，是液態(tài)發(fā)酵相同培養(yǎng)階段的126.4倍，或許與使用固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)檸檬酸有著相似的代謝調(diào)控機(jī)[14].上述現(xiàn)象表明：在固態(tài)發(fā)酵二次生長(zhǎng)階段，葡萄糖的有氧代謝受到了更明顯的抑制.鳥(niǎo)嘌呤核苷、賴(lài)氨酸和琥珀酸半醛等差異代謝產(chǎn)物在固態(tài)發(fā)酵中所受到的調(diào)控機(jī)制現(xiàn)在還不清楚.

表3SSF11 h與SSF21 h的一些差異代謝物細(xì)胞內(nèi)相對(duì)量

Table3TherelativecontentofsomedifferentialmetabolitesbetweenSSF11 handSSF21 h

代謝物細(xì)胞內(nèi)相對(duì)量SSF11hSSF21hcitricacid20．8±15．5354．5±128．8??glucoheptose3．1±1．212．1±7．7?erythrose140．0±37．3274．2±69．6??glucose969．9±361．62845．3±561．4??guanosine—15．8±4．9??lysine177．3±138．0548．7±84．0??succinatesemialdehyde—46．0±23．8??

3 結(jié) 論

本研究檢測(cè)到了SmF11 h與SmF21 h之間和SSF11 h與SSF21 h之間具有共同的93種差異代謝物.SmF11 h與SmF21h之間特有的差異代謝物的數(shù)目為38種，SSF11 h與SSF21 h之間的特有差異代謝物為24種.這些差異代謝物分別決定了液態(tài)和固態(tài)培養(yǎng)方式中，不同生長(zhǎng)階段轉(zhuǎn)化前后的代謝網(wǎng)絡(luò)差異.無(wú)論是液態(tài)培養(yǎng)還是固態(tài)培養(yǎng)，蛋白質(zhì)和氨基酸的代謝差異是指數(shù)生長(zhǎng)階段和二次生長(zhǎng)階段的主要代謝差異.兩種培養(yǎng)方式下富馬酸、蘋(píng)果酸和琥珀酸等三羧酸循環(huán)的中間代謝物也在二次生長(zhǎng)階段大量積累，這與細(xì)胞在此階段生長(zhǎng)速率降低、能量代謝減少和有氧呼吸受到抑制有關(guān).SmF11 h與SmF21 h之間特有的38種差異代謝物中，油酸和棕櫚酸的相對(duì)量在二次生長(zhǎng)階段顯著降低.SSF11 h與SSF21 h之間特有的差異代謝物表明：在固態(tài)發(fā)酵二次生長(zhǎng)階段，細(xì)胞內(nèi)積累了更高濃度的葡萄糖和赤蘚糖.固態(tài)發(fā)酵條件下，代謝產(chǎn)物無(wú)法擴(kuò)散出細(xì)胞，檸檬酸在胞內(nèi)大量積累.

本文得到了浙江工業(yè)大學(xué)自然科學(xué)基金(1301105071408)的資助.

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(責(zé)任編輯：劉 巖)

MetabolomeanalysisofSaccharomycescerevisiaeindifferentculturepatternsandgrowthphases

SUN Jie, YU Xinjun, WANG Wei, ZHU Yougui, JIANG Jie, WANG Zhao

(College of Biotechnology and Bioengineering, Zhejiang University of Technology, Hangzhou 310014, China)

Compared with submerged fermentation, the physiological status of yeast during the growth swift in solid-state fermentation caught little attention. The change of intracellular metabolite composition is closely related to physiological status. Metabolome analysis ofSaccharomycescerevisiaein exponential growth and post-diauxic growth with solid-state and submerged fermentation was performed. Principal components analysis of metabolite profiles showed that the metabolic shift between different growth phases was accompanied by complex changes of the central metabolism. The amount of the differential metabolites between the two growth stages were 131 and 117 with solid-state and submerged fermentation, respectively. The protein synthesis, amino acid metabolism and Kreb’s cycle are the main difference between the two growth stages in both processes of solid-state and submerged fermentation. This study laid a foundation for further elucidation of the metabolic regulation mechanism of yeast in different fermentation processes.

Saccharomycescerevisiae; metabolome analysis; solid-state fermentation; exponential growth; post-diauxic growth

2017-04-10

浙江省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(LQ14C010002)

孫 杰(1981—)，男，內(nèi)蒙古包頭人，講師，博士，研究方向?yàn)槲⑸锎x，E-mail：jsun@zjut.edu.cn.

Q935

A

1006-4303(2017)06-0654-06