表皮生長因子在胃腸胰腺神經內分泌腫瘤中的表達水平與臨床病理特征的關系

茍佳麗

【摘要】 目的：檢測胃腸胰腺神經內分泌瘤中表皮生長因子（EGF）水平，并分析EGF與臨床病理特征的關系。方法：選取在筆者所在醫院確診的胃腸胰神經內分泌瘤（GEP-NEN）患者，采用免疫組織化學法檢測組織EGF表達，分析其與淋巴結轉移及淋巴管密度（LVD）的關系。結果：對于出現淋巴結轉移的GEP-NEN組，其LVD值高于淋巴結未轉移組患者，差異有統計學意義（P<0.05）；淋巴結轉移組EGF陽性率占52.6%，淋巴結未轉移組EGF陽性率僅占18.2%，差異有統計學意義（P<0.05）；EGF陽性表達的患者，其LVD顯著高于EGF陰性表達的患者，差異有統計學意義（P<0.05）；EGF的表達與LVD呈正相關（P<0.05）。結論：對于胃腸胰腺神經內分泌腫瘤患者，其EGF表達陽性率高，其表達水平與LVD呈正相關，尤其對于出現淋巴結轉移的晚期患者，其EGF水平更明顯。

【關鍵詞】 胃腸胰腺神經內分泌腫瘤； 表皮生長因子； 淋巴管密度； 淋巴結

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2017.28.003 文獻標識碼 A 文章編號 1674-6805（2017）28-0005-03

【Abstract】 Objective：To detect the level of epidermal growth factor（EGF） in gastrointestinal neuroendocrine tumors and to analyze the relationship between EGF and clinicopathological features.Method：Patients admitted to our hospital and confirmed with gastrointestinal neuroendocrine tumor（GEP-NEN） adopted immunohistochemical method to test the expression of EGF and to analyze its relationship with lymphatic metastasis and lymphatic vessel density （LVD）.Result：Regarding the GEP-NEN group with lymphatic metastasis transferring，the LVD value of which was higher than that of patients with non-lymphatic metastasis transferring and the difference was statistically significant（P<0.05）；the positive rate of EGF in lymph node metastasis transferring group was 52.6%，and was only about 18.2% in non-lymphatic metastasis transferring group，and the difference between the two groups was statistically significant（P<0.05）；regarding patients with EFG positive expression，the LVD of which was significantly higher than that of patients with EGF negative expression，and the difference was statistically significant（P<0.05）.The expression of EGF was positively correlated with LVD（P<0.05）.Conclusion：Regarding patients with gastrointestinal neuroendocrine tumors，it has higher positive rate of EGF expression and the expression level is positively correlated with LVD，especially for lymph node metastasis patients in advanced stage.

【Key words】 Gastrointestinal pancreatic neuroendocrine tumor； EGFR； LVD； Lymph node

First-authors address：The Peoples Hospital of Anyue，Anyue 642350，China

胃腸胰神經內分泌腫瘤（gastroenteropancreafic neuroendocrine neoplasm，GEP-NEN）發病率僅次于大腸癌，在消化系統惡性腫瘤中占第二位，由于其早期的臨床表現缺乏特異性，患者常常忽視，待癥狀加重就診時，多數已經進展為轉移性的NENs。對于晚期的胃腸NENs患者，目前臨床常常采用的治療手段包括手術、藥物、介入、靶向等[1-3]。表皮生長因子（endothelial growth factor，EGF）于20年前被分離并純化，其能夠發揮誘導其受體酪氨酸激酶細胞內的酪氨酸殘基磷酸化的作用[4]。現已經過檢測發現，EGF是一種最早的淋巴管內皮細胞標記物，在成年人體內被發現，其表達水平可能與在淋巴管的發育水平及正常與否均密切相關[5-6]。本研究通過檢測胃腸胰腺NENs患者組織中EGF水平的變化，分析其與患者淋巴結轉移及淋巴管密度的關系。endprint

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取于2016年1月-2017年1月在筆者所在醫院接受治療，并經過病理學診斷確診為GEP-NEN的患者60例作為研究對象，其中男30例，女30例，年齡30～70歲，平均（50.5±4.2）歲，根據是否發生淋巴結轉移，將入組患者分為淋巴結轉移組38例，淋巴結未轉移組22例。兩組患者的性別、年齡等一般資料比較，差異均無統計學意義（P>0.05），有可比性。

1.2 方法

1.2.1 試驗試劑及器材 EGF ELISA試劑盒，EGF封閉液+一抗，兔抗鼠二抗試劑盒（北京中杉金橋生物技術有限公司）；離心機（上海飛鴿）；顯微鏡（日本Olympus）；酶標儀（英國TECNA）；脫水機（日本TIYODA）；切片機（德國Leica）；計算機圖像分析系統（美國惠普）。

1.2.2 檢測淋巴管密度（LVD） 淋巴管密度的判定：在腫瘤的區域范圍內，凡未成腔的EGF陽性即鏡下觀察到胞漿含有棕黃色顆粒的內皮細胞或細胞團，以及EGF呈陽性，但已經形成管腔，形態尚不規則的單層內皮細胞。鏡下取3個染色豐富區，200倍視野下計數3個不重疊區每個視野內的陽性淋巴管數，取平均值。

1.2.3 免疫組織化學法檢測組織中EGF的表達 福爾馬林固定、脫水、透明；包埋、切片；熱修復；過氧化氫阻斷；正常山羊血清封閉；加一抗（濃度1∶100）50 μl靜置1 h；加二抗（濃度1∶100）50 μl 靜置10 min；顯色、終止；復染、分化；封片。EGF陽性結果判定以細胞核不染色，胞膜或胞質出現棕黃色顆粒為陽性，染色細胞數陰性（-）：≤10%；弱陽性（+）：11%～25%；陽性（++）：26%～50%；強陽性（+++）：>50%。

1.3 統計學處理

本研究數據采用SPSS 17.0統計學軟件進行分析和處理，計量資料以（x±s）表示，采用t檢驗，計數資料以率（%）表示，采用字2檢驗，多因素用Logistic回歸模型，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 入組GEP-NEN患者LVD的表達

根據入組GEP-NEN患者是否存在淋巴結轉移分為兩個亞組，均進行EGF的表達檢測，結果發現，淋巴結轉移組的LVD均值達（0.83±0.14）個，明顯高于淋巴結未轉移組（0.23±0.11）個，差異有統計學意義（P<0.05）。

2.2 入組胃腸胰神經內分泌瘤患者組織中EGF的表達水平變化

根據入組GEP-NEN患者是否存在淋巴結轉移分為兩個亞組，均進行EGF的表達檢測，結果發現，對于出現了淋巴結轉移的NENs患者，EGF陽性20例，陽性率達到52.6%，而對于淋巴結未轉移的NENs患者，其出現EGF陽性4例，陽性率占18.2%，兩組比較，差異有統計學意義（P<0.05），見表1。

2.3 入組GEP-NEN患者EGF與LVD的關系

EGF陽性表達的患者，其LVD為（1.33±0.15）個，EGF陰性表達的患者為（0.43±0.11）個，EGF陽性者高于EGF陰性者，差異有統計學意義（P<0.05），且EGF的表達與LVD呈正相關（r=0.360，P=0.012）。

3 討論

胃腸神經內分泌腫瘤（neuroendocrine tumors，NET）是消化道常見的腫瘤，對于分布在胃腸道NET的主要來源于胃腸道神經內分泌細胞，而胰腺NET主要來源于胰島細胞[7]。在胚胎期發育時期，尤其是淋巴管發育、形成及病理狀態下淋巴管生成的過程中，EGF發揮著非常重要的作用，EGF不僅能夠選擇性地促進淋巴管形成，還能夠增加淋巴管的通透性，促進腫瘤細胞經淋巴管向遠處擴散[8-10]。本研究選取了在筆者所在醫院確診并接受治療的GEP-NEN患者作為研究對象，檢測其EGF的表達，觀察LVD的情況，分析EGF表達與NETs患者是否存在淋巴結轉移及與LVD的關系。

文獻[11-12]顯示，EGF在包括肺癌、乳腺癌、胃癌、結腸癌、惡性黑色素瘤等多種不同類型的人類惡性腫瘤中均存在，且表達陽性率較高。在本研究中，首先根據入組的GEP-NEN患者是否出現淋巴結，將試驗對象分為兩組，檢測入組GEP-NEN患者的LVD，出現淋巴結轉移的GEP-NEN患者其LVD均值明顯高于未出現淋巴結轉移的患者。進一步對入組患者EGF的表達情況進行檢測發現，淋巴結轉移組出現EGF陽性率高達52.6%，但淋巴結未轉移組EGF陽性率僅占18.2%。這提示，對于出現淋巴結轉移的GEP-NEN患者，其EGF表達陽性率顯著升高，LVD值明顯升高。關于EGF的生物學作用，有研究者指出，EGF-C能夠特異性的作用于淋巴管內皮細胞，EGF與淋巴結轉移及淋巴管形成可能存在一定的關聯，但具體機制未闡明[13]。這與本研究結果近似。

最后，本研究對胃腸胰神經內分泌瘤患者組織中EGF的表達與LVD的關系及淋巴結轉移與否進行了分析，對于EGF呈現陽性表達的GEP-NEN患者，其LVD值明顯高于EGF陰性表達的患者，EGF的表達水平與LVD呈正相關。關于EGF表達與淋巴管形成的關系分析上，既往有研究者指出，EGF能夠與其受體發生特異性結合，酪氨酸激酶發生磷酸化，細胞骨架蛋白進一步激活，活化細胞內的多條信號傳導通路，從而發揮了促進淋巴管內皮細胞增殖、分化、遷移，誘導淋巴管內皮細胞及蛋白發生重組，刺激新生淋巴管形成的作用[15]。這與本研究結果相一致。

綜上所述，對于胃腸胰腺神經內分泌腫瘤患者，其EGF表達陽性率高，其表達水平與LVD呈正相關，尤其對于出現淋巴結轉移的晚期患者，其EGF水平升高更明顯。EGF可能成為判斷胃腸胰腺神經內分泌腫瘤預后的新指標，但具體作用機制仍需進一步基礎研究證實。endprint

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（收稿日期：2017-06-30）endprint