外周血T-SPOT.TB與胸腔積液ADA活性檢測對結核性胸腔積液的診斷價值

黃華，姜欣，王衛華

(九江市第三人民醫院，江西九江332000)

外周血T-SPOT.TB與胸腔積液ADA活性檢測對結核性胸腔積液的診斷價值

黃華，姜欣，王衛華

(九江市第三人民醫院，江西九江332000)

目的探討外周血結核感染T細胞斑點試驗(T-SPOT.TB)與胸腔積液腺苷脫氨酶(ADA)活性單獨或聯合檢測對結核性胸腔積液的診斷價值。方法選取結核性胸腔積液患者110例作為結核組、非結核性胸腔積液患者60例作為非結核組。兩組均于治療前采集外周靜脈血進行T-SPOT.TB，計數斑點形成細胞數；采集胸腔積液進行ADA活性檢測。根據外周血T-SPOT.TB檢測的斑點形成細胞數及ADA活性繪制ROC曲線，比較二者單獨檢測或聯合檢測對結核性胸腔積液的診斷效能。結果結核組外周血T-SPOT.TB陽性率、胸腔積液ADA陽性率高于非結核組(P<0.05)；結核組外周血T-SPOT.TB陽性率高于胸腔積液ADA陽性率(P<0.05)。兩組外周血T-SPOT.TB的A、B孔斑點形成細胞數及胸腔積液ADA活性比較差異有統計學意義(P<0.05)。結核組外周血T-SPOT.T的ROC曲線下面積大于胸腔積液ADA活性檢測(P<0.05)，其敏感度高于胸腔積液ADA活性檢測(P<0.05)。二者聯合檢測診斷結核性胸腔積液的敏感度高于單獨檢測(P均<0.05)。結論外周血T-SPOT.TB與胸腔積液ADA活性聯合檢測對結核性胸腔積液的診斷效能高于二者單獨檢測。

結核性胸腔積液；結核感染T細胞斑點試驗；腺苷脫氨酶活性檢測

結核性胸腔積液是臨床常見的肺外結核病，診斷與鑒別診斷較難，尤其是與惡性胸腔積液鑒別困難。其診斷主要通過病史、臨床表現、影像學及胸腔積液常規檢查，準確率低，易誤診漏診[1]。胸腔積液抗酸桿菌涂片陽性率低；結核分枝桿菌(MTB)培養是診斷結核性胸腔積液的金標準，但培養時間較長；胸膜病理學檢測特異度高，但有創傷[2]。結核感染T細胞斑點試驗(T-SPOT.TB)是目前診斷結核病具有較高靈敏度與特異度的細胞學檢測技術，其通過檢測因MTB抗原刺激而活化的效應T細胞所釋放的干擾素，確認是否存在MTB感染[3]。在臨床胸腔積液腺苷脫氨酶(ADA)檢測可用于結核性胸膜炎輔助診斷，但其敏感度略低[4]。本研究對外周血T-SPOT.TB與胸腔積液ADA活性檢測在結核性胸膜炎中的診斷價值進行探討，為臨床選擇高效診斷方法提供依據。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2014年10月～2017年4月本院治療的結核性胸腔積液患者110例為結核組，均經病理學檢查確診，均未經抗結核藥物治療。其中，男76例、女34例，年齡27～60(45.15±10.72)歲；經菌型鑒定為MTB感染57例，經胸膜病理檢查可見干酪性肉芽腫伴抗酸桿菌陽性53例。同期選擇入院治療的非結核性胸腔積液患者60例為非結核組，均經病理檢查證實。其中男39例、女21例，年齡36～62(46.90±8.85)歲，胸膜轉移癌47例、肺炎旁胸腔積液6例、原發性胸膜惡性病變7例。兩組性別、年齡具有可比性。兩組納入標準：入院后均經胸腔積液常規生化、細胞學和涂片檢測，胸腔積液和胸膜組織中細菌、真菌培養及改良羅氏培養或胸腔鏡檢查；排除標準：胸腔積液性質為漏出液，人免疫缺陷病毒和急性病毒感染、惡性腫瘤、合并其他嚴重感染及其他嚴重慢性疾病，有結核病史和結核病接觸史、免疫抑制劑用藥史，妊娠及哺乳期。

1.2 外周血T-SPOT.TB檢測 兩組均于治療前采集外周靜脈血5 mL，并于2 h內用T-SPOT.TB試劑盒進行檢測。外周靜脈血離心，分離外周血單核細胞，制成濃度為2.5×106/mL的細胞懸液。取出微孔板條，加入單個核細胞懸液0.1 mL，設置4個孔，分別向4個孔內加入陰性對照(無血清培養基)、抗原A(ESAT-6抗原)、抗原B(CFP-10抗原)和陽性對照(植物血凝素)各50 μL，經孵育、洗滌后加入標記抗體工作液50 μL，孵育、洗滌后加入顯色液50 mL，繼續孵育7 min后終止反應，干燥，用Elispot自動分析儀計數。結果判定：在陰性對照孔斑點數≤10個且陽性對照孔斑點數>20個條件下，當陰性對照孔斑點數為0～5個時，抗原A或B斑點數-陰性對照斑點數≥5個為結果陽性；或當陰性對照孔斑點數為6～10個，抗原A或B斑點數≥2倍陰性對照孔斑點數為結果陽性。

1.3 胸腔積液ADA活性檢測 收集胸腔積液10 mL，離心(1 000 g、5 min)，取上清液，用酶法(全自動生化分析儀)測定血清ADA活性。以ADA≥45 U/L為檢測結果陽性。

2 結果

2.1 兩組外周血T-SPOT.TB與胸腔積液ADA檢測結果比較 結核組外周血T-SPOT.TB陽性率、胸腔積液ADA陽性率高于非結核組(P均<0.05)；結核組外周血T-SPOT.TB陽性率高于胸腔積液ADA陽性率(P<0.05)。見表1。結核組A、B孔斑點形成細胞數分別為(20±3)、(7±1)/2.5×105個，非結核組均為0；結核組胸腔積液ADA活性為(50±4)U/L，非結核組為(12±1)U/L。兩組外周血T-SPOT.TB的A、B孔斑點形成細胞數及胸腔積液ADA活性比較差異有統計學意義(P均<0.05)。兩組外周血T-SPOT.TB的A、B孔斑點形成細胞數及胸腔積液ADA活性比較差異有統計學意義(P均<0.05)。見表1。

表1 兩組外周血T-SPOT.TB、胸腔積液ADA檢測結果比較[例(%)]

2.2 外周血T-SPOT.TB與胸腔積液ADA檢測的診斷效能 建立ROC曲線。計算外周血T-SPOT.TB診斷結核性胸腔積液的曲線下面積為0.912(95%CI：0.847～0.956)，胸腔積液ADA活性檢測診斷結核性胸腔積液的曲線下面積為0.790(95%CI：0.748～0.950)，二者曲線下面積比較差異有統計學意義(P<0.05)。外周血T-SPOT.TB診斷結核性胸腔積液的敏感度(89.09%，95%CI：76.14%～93.72%)高于胸腔積液ADA活性檢測(80.00%，95%CI：74.05%～92.16%)，比較差異有統計學意義(P<0.05)，特異度(80.00%，95%CI：74.05%～92.16%)低于胸腔積液ADA活性檢測(95.45%，95%CI：82.11%～98.75%)，但二者比較差異無統計學意義(P>0.05)。外周血T-SPOT.TB與胸腔積液ADA活性檢測任意一項結果陽性診斷為陽性，二者均為陰性診斷為陰性。二者聯合檢測診斷結核性胸腔積液的敏感度為93.64%(103/110，95%CI：8:0.18%～98.27%)，特異度為83.33%(50/60，95%CI：70.04%～95.37%)。聯合檢測敏感度高于二者單獨檢測(P均<0.05)。

3 討論

T-SPOT.TB作為一種新型的酶聯免疫斑點技術用于結核病的診斷具有較高的敏感度與特異度[5]。國內外已經將其作為診斷結核的主要手段。T-SPOT.TB結合了細胞培養技術與酶聯免疫吸附技術，可從細胞水平檢測細胞因子的一種細胞免疫學檢測技術。抗結核免疫分為天然免疫(NK細胞、中性粒細胞)和獲得性免疫(體液免疫與細胞免疫)。NK細胞直接溶解MTB感染的單核細胞或MTB本身；而中性粒細胞則通過釋放防御素協助巨噬細胞的殺傷作用[6]。機體抗MTB主要依賴T細胞介導的細胞免疫。MTB在體內寄生的主要宿主細胞是肺泡巨噬細胞，可快速殺滅入侵的病原體。巨噬細胞可吞噬溶酶體的溶解作用，從而裂解、加工MTB抗原肽(ESAT-6、CPF-10)，且可聯合MHC類分子遞呈ESAT-6、CPF-10給T細胞，從而致敏T淋巴細胞，使其成為記憶T淋巴細胞[7,8]。記憶T淋巴細胞在機體再次感染MTB時增殖為效應T淋巴細胞并釋放多種細胞因子。輔助T淋巴細胞激活后在結核特異性抗原(ESAT-6、CPF-10)刺激下產生γ-干擾素。γ-干擾素是抗結核感染免疫中的關鍵性細胞因子。經ESAT-6、CPF-10刺激后效應T淋巴細胞分泌γ-干擾素，檢測該類效應T淋巴細胞的水平可作為結核感染的標志[9]。T-SPOT.TB是目前檢測分泌γ-干擾素效應T淋巴細胞水平的有效方法，靈敏度高。T-SPOT.TB用單克隆抗體可捕獲細胞分泌的因子，捕獲的細胞因子與生物素標記的二抗結核，再與堿性磷酸酶標記的親和素結合，加入顯色液后出現紫色斑點[10]，采用斑點分析系統分析結果。本研究結核組外周血T-SPOT.TB陽性率高于非結核組；兩組外周血T-SPOT.TB的A、B孔斑點形成細胞數比較差異有統計學意義。說明外周血T-SPOT.TB對結核性胸腔積液的診斷準確率較高。外周血T-SPOT.TB診斷結核性胸腔積液的曲線下面積為0.912，診斷價值高。

ADA是核酸分解代謝酶類，可特異性催化腺嘌呤核苷產生不可逆脫氨反應，生成次黃嘌呤，最終氧化為尿酸排出體外[11]。ADA在胸腺、脾臟和其他淋巴組織中含量較高。ADA在淋巴細胞分化和單核細胞成熟為巨噬細胞的過程中起一定作用，當發生結核性胸膜炎時，宿主通過細胞免疫抵抗MTB感染，胸膜淋巴細胞增多、活性增強，故ADA在胸腔積液中含量增高[12]。目前，ADA在臨床已成為診斷結核性胸膜炎的常規檢測項目。但也有研究認為ADA診斷敏感度或特異度偏低。本研究參照文獻以45 U/L為截點[13],結核組胸腔積液ADA陽性率高于非結核組，胸腔積液ADA活性檢測診斷結核性胸腔積液的曲線下面積為0.834，說明ADA檢測具有一定診斷價值。

本研究中結核組外周血T-SPOT.TB陽性率高于胸腔積液ADA陽性率，外周血T-SPOT.TB診斷結核性胸腔積液的曲線下面積高于胸腔積液ADA活性檢測，敏感度高于胸腔積液ADA活性檢測，說明外周血T-SPOT.TB比胸腔積液ADA活性檢測準確率更高、更靈敏。但胸腔積液ADA活性檢測診斷結核性胸腔積液的特異度高于外周血T-SPOT.TB、外周血T-SPOT.TB與胸腔積液ADA聯合檢測的診斷效能二者聯合檢測診斷結核性胸腔積液的敏感度與特異度均升高。因此在臨床兩種檢測方法聯合應用，可進一步提高結核性胸腔積液的診斷水平。

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