豬瘟診斷技術

張乾義/中國獸醫藥品監察所OIE豬瘟參考實驗室

豬瘟診斷技術

張乾義/中國獸醫藥品監察所OIE豬瘟參考實驗室

一、豬瘟臨床癥狀

1.最急性型豬瘟。突然死亡；突然發病，表現為全身痙攣、四肢抽搐，皮膚和粘膜發紺。

2.急性和亞急性型豬瘟。急性發病期為6～20 d，亞急性為21～30 d；發病率、死亡率高達90%；白細胞數量嚴重下降，不及正常豬的1/2；體溫升至41℃～42℃以上；食欲下降或停止；精神極度沉郁、扎堆；病后不久，病豬全身無力、走路不穩，后軀表現明顯。

3.慢性型豬瘟。多發生于老疫區或接種豬瘟疫苗但免疫水平不高的豬群；病程通常在一個月以上；常有嚴重的繼發感染；食欲減退；體溫出現周期性發熱；便秘與腹瀉交替發生；病豬毛色粗亂，生長停滯。皮膚呈現紫色出血斑、出疹或壞死；病豬難以完全康復，常成為僵豬。

4.持續性感染型豬瘟。不表現臨床癥狀，無典型豬瘟的臨床癥狀；死亡率低，病程長，超過一個月甚至長期存在；母豬繁殖障礙，表現為“帶毒母豬綜合征”，產木乃伊胎、死胎、畸形胎，新生仔豬發顫抖病。

持續感染型豬瘟危害最大：（1）帶毒導致免疫失敗。“健康”的先天性帶毒仔豬均不能消除體內的病毒，臨床上表現為仔豬發病、死亡，產生免疫耐受，疫苗之后不產生抗體，導致免疫失敗；（2）惡性循環。帶毒仔豬進入后備豬群體成為種豬，形成惡性循環，成為重要的傳染來源，這是目前對我國規模豬場養豬業危害最大的感染形式；（3）散毒。帶毒仔豬如果逃避病原監測而進入后備豬群體，經水平傳播不斷排向外界，引起易感豬感染、發病和感染，并污染環境，導致再一個豬群內病毒持續存在，難以清除。

二、病理剖檢

1.最急性型豬瘟。無明顯病變，僅見粘膜、腎臟有少量的出血。

2.急性和亞急性型豬瘟。（1）脾臟：脾的邊緣或脾體表面可見從粟粒至黃豆大，數目不等的紫紅色或紫黑色出血性壞死灶。梗死灶組織堅實、表面稍凸于周圍正常組織，切面呈楔形，其檢出率約為占總病例的30%～40%；（2）腎臟：病變明顯，顏色淡有時呈土黃色，有針尖大至米粒大出血點，量少時出血點稀疏甚至只有少數幾個，量多時密布整個腎臟表面，如麻雀蛋外觀；（3）淋巴結：主要表現為淋巴結腫脹，表面呈深紅色至紫黑色。切面呈紅白相間的大理石狀外觀，在頜下、咽背、耳下、支氣管、胃門、腎門、腹股溝及腸系膜等淋巴結病變最明顯；（4）全身多數組織和器官：表現出血，喉頭和會厭軟骨上多數有小出血點。腸道淋巴濾泡常腫大。膀胱散在點狀出血，胃大彎內粘膜常見明顯的充血和出血，表面糜爛、潰瘍。

3.慢性豬瘟。腸粘膜充血、出血；回盲瓣潰瘍，呈紐扣狀。

4.持續性感染型豬瘟。無癥狀或癥狀不明顯；仔豬先天性感染CSFV，導致發生死胎、木乃伊胎、胎兒皮下水腫，腹腔積水以及畸形胎兒，出生后很快死亡的胎兒通常在皮膚和內臟器官呈現點狀出血。

三、豬瘟實驗室診斷

（一）動物接種

很少使用，幾乎不用，包括兔體交互試驗和本動物試驗。

（二）豬瘟抗原檢測

包括抗原ELISA、免疫熒光/過氧化物酶實驗。

1.ELISA。檢測物：血液、組織研磨液。優點：操作簡便，檢測時間短。缺點：靈敏度低，田間感染很難檢測。

2.免疫熒光/過氧化物酶實驗。檢測物：組織切片、抹片。優點：特異性高、檢測時間短。缺點：對檢驗人員要求高，敏感度低。

（三）病毒分離

病毒分離是實驗室診斷的經典方法。

1.檢測組織類型。（1）血液：脫纖血、抗凝血；（2）扁桃體：可活體采樣、豬瘟病毒嗜性組織；（3）淋巴結：頜下淋巴結和腸系膜淋巴結，不可活體采樣；（4）脾臟：健康脾臟（應為飽滿的紅棕色）；蒼白、柔軟、邊緣梗死-病毒感染。適宜在梗死灶之間進行采樣；（5）腎臟：蒼白的紅棕色-健康腎臟；表面有針狀出血點-病毒感染，采樣時采集皮質和髓質交界處；（6）回腸：回腸底部潰爛是急性豬瘟的典型癥狀，但只見于回腸內壁；潰爛周圍組織是病毒富集區，適宜進行采樣。

2.操作流程。組織處理—接種—結果判定—鑒定。

3.優缺點。優點：特異性好，可用于病毒的進一步鑒定和毒種保護。缺點：靈敏度低，檢測周期長，易出現假陰性。

（四）病毒核酸檢測

病毒核酸檢測是實驗室診斷最常用的方法。

熒光RT-PCR：用于豬瘟病毒野毒、疫苗毒等所有毒株的診斷和監測，適用于豬活體及其臟器、血液、排泄物和細胞培養物中CSFV核酸的檢測。注意事項：（1）設置NTC對照，包括樣本NTC對照與體系NTC對照；（2）實驗分區（試劑配置區、樣本處理區、核酸擴增區）；（3）避免與引物在同靶區域的開蓋PCR方法同時使用造成污染；（4）檢測結束后不要開蓋，密封處理；（5）大規模檢測時，建議使用UNG防污染體系。

（五）抗體檢測—ELISA

1.間接ELISA。優點：檢測針對某一種蛋白（E2）的總抗體；敏感性高；適合我國全面免疫的防控策略；有商品化產品（自主研發）。缺點：與同屬的其他病毒無法鑒別。

2.阻斷ELISA。優點：特異性高，有商品化產品。缺點：敏感性低。

3.競爭ELISA。優點：特異性高；操作簡便，檢測時間短。缺點：敏感性低，仍處于研發階段。

（六）抗體檢測—免疫層析技術

優點：操作簡便、快捷；全程只需5min左右，肉眼直接觀察和判斷檢測結果；可采用儀器進行相對定量。

缺點：敏感性低；不適合進行大批量的檢測樣品。

（七）抗體檢測—新型檢測技術

1.化學發光技術。

2.熒光微球技術。

3.鑭系高敏熒光定量免疫層析技術。