楊梅莖段不定芽誘導培養研究

付維++包嘉順++賀金立++劉清波

摘要 以楊梅的莖段為外植體在WPM培養基上進行不定芽誘導培養，研究外植體消毒滅菌方法及不同植物生長調節劑的含量及組合對莖段不定芽誘導的影響。結果表明，用70%酒精消毒1 min，再用0.1%氯化汞溶液消毒15 min，消毒滅菌效果好。在WPM+6-BA 1 mg/L+IBA 0.1 mg/L培養基上出芽率和莖伸長效果最好。

關鍵詞 楊梅；不定芽；消毒時間；出芽率

中圖分類號 S662.4 文獻標識碼 A 文章編號 1007-5739（2017）19-0062-02

楊梅（Myrica rubra）產自我國東南部以及云貴高原，是楊梅科楊梅屬植物。全球98%以上的楊梅產自中國[1]。楊梅果實味道鮮美，營養豐富，具有很高的食用和藥用價值。除此之外，楊梅還具有生態效益和經濟效益，是生態林的優良品種，具有生物防火的作用[2]。利用不定芽的組織培養方式，能使楊梅的生長繁殖速度加快，成活率增加。在一定程度上，解決了常規育苗技術所不能滿足的生產上大規模的需求[3-4]。現以楊梅的莖段為外植體在WPM培養基上進行不定芽誘導培養，研究外植體消毒滅菌方法及不同植物生長調節劑的含量及組合對莖段不定芽誘導的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

楊梅的試驗材料取自于湖南農業大學，分別于2015年3—5月和2016年3—5月進行取材。此時采用楊梅樹新梢作試驗材料，其內生菌較少，更利于減少不定芽的培養過程中由內生菌引起的污染。

1.2 試驗方法

1.2.1 外植體滅菌與接種。將試驗材料去除葉片后切成3～4 cm莖段，先用洗衣粉或84消毒液清洗15～20 min，再用自來水沖洗10 min。在超凈工作臺上進行不同方法滅菌消毒試驗，先用70%酒精滅菌，無菌水沖洗3次后再用0.1%氯化汞進行滅菌，之后無菌水再清洗3次。分別將70%酒精消毒時間設置為1、2、4 min，0.1%氯化汞消毒時間設置為10、15 min進行組合（表1），比較不同消毒試劑與消毒時間對材料的影響。滅菌后將材料置于無菌吸水紙上，用解剖刀切除兩端，制成3 cm左右的莖段外植體，接種于培養基中進行培養。

1.2.2 培養基的選擇。根據廖雪竹[5]的研究方法，本試驗選擇采用WPM培養基作為基礎培養基，WPM培養基較常用的MS培養基更利于莖段的不定芽誘導。將制備好的外植體先置于WPM+7.5 g/L瓊脂+30%蔗糖的基礎培養基上（pH值5.8）培養7 d，統計其污染率，然后再將無菌材料移入含有不同激素組合的誘導生芽培養基中進行生長，觀察統計外植體出芽率。

設計5組不同的激素含量與配比組成的培養基，比較研究其對楊梅不定芽誘導的影響。培養基激素配比如下：WPM+6-BA 0.5 mg/L+IBA 0.05 mg/L；WPM+6-BA 1 mg/L+IBA 0.05 mg/L；WPM+6-BA 1 mg/L+IBA 0.1 mg/L；WPM+6-BA 1.5 mg/L+IBA 0.15 mg/L；WPM+6-BA 2 mg/L+IBA 0.1 mg/L。

2 結果與分析

2.1 不同外植體滅菌方法效果比較

木本植物莖段因多年生且木質化程度高，因此存在難以消毒的情況，楊梅更是如此。本試驗小組為研究其有效的消毒方法，歷時整整1年。結果表明，先用洗衣粉或84消毒液清洗后，再用70%乙醇處理1 min，0.1%氯化汞消毒15 min的情況下，可達到比較理想的消毒效果。70%乙醇滲透力較強，若處理時間過長，會導致外植體褐化率增高。而0.1%氯化汞處理時間過短，會導致消毒不徹底，污染率高（表1）。

2.2 不同激素組合培養基對不定芽誘導的影響

細胞分裂素與生長素的含量及比例對外植體不定芽的誘導有很大的影響。本試驗結果表明，當細胞分裂素為生長素10倍比例時培養基對不定芽誘導的效果比細胞分裂素為生長素20倍時效果更佳。1、3、4號培養基細胞分裂素為生長素10倍，2、5號培養基細胞分裂素為生長素20倍。而培養結果1、3、4號培養基誘導出芽率明顯高于2、5號培養基。此外，不同激素組合培養基對不定芽展葉情況也有一定的影響。本試驗中最佳的培養基激素成分及含量為WPM+6-BA 1 mg/L+IBA 0.1 mg/L，該培養基不定芽誘導效果最好，且展葉率效果也達到最佳（圖1）。

3 結論與討論

楊梅莖段不定芽的誘導受多種因素的影響，如取材的時間、外植體消毒的方法、培養基的選擇、不同植物生長調節劑使用等，都對不定芽的誘導及生長影響顯著。本試驗選擇在3—5月晴天取材，在初步清洗后，用70%乙醇處理1 min，再用0.1%氯化汞消毒15 min，達到了良好的滅菌效果。選擇WPM培養基，在激素為6-BA 1 mg/L+IBA 0.1 mg/L時培養基誘導楊梅產生不定芽效果良好。李曉強等[6]研究表明，為了防止污染與褐化，可在培養基中加入一定量的活性炭、PVP作為吸附劑，從而吸附木本植物易產生的酚類氧化物和有毒物質，降低污染率和褐化率，但考慮到活性炭吸附能力過強，影響外植體對培養基營養成分的吸收，故本試驗未采納此方法。曹 昆等[7]、姚紹嫦等[8]、楊正修等[9]研究表明，植物外植體誘導生不定芽的能力取決于培養基的激素種類和含量，特別是細胞分裂素和生長素的比例，細胞分裂素較生長素的比值大則效果明顯。這與本試驗結果一致，但本試驗表明，二者比例過大效果反而下降。潘 梅等[10]研究表明，在后期的培養過程中，應給予適宜的溫度和光照強度，以便于外植體生長。

4 參考文獻

[1] 陳方永.中國楊梅產業現狀產業發展現狀、問題與對策淺析[J].中國果業信息，2012，29（7）：20-22.

[2] 孔梅，藍增全.云南野生楊梅快繁體系的建立[J].浙江農業科學，2015，56（10）：1557-1560.

[3] 付維，包嘉順，賀金立，等.楊梅快繁再生體系的建立綜述[J].現代農業科技，2017（5）：75-76.

[4] 倪照君，廖雪竹.楊梅地方品種“浪蕩子”組培快繁體系建立[J].中國南方果樹，2015，44（5）：59-62.

[5] 廖雪竹，倪昭君，高志紅.楊梅組織培養研究進展[J].中國南方果樹，2015，44（2）：140-150.

[6] 李曉強.楊梅組織培養技術研究[D].南寧：廣西大學，2010.

[7] 曹昆，李霞.木本植物組織培養不定芽誘導研究進展[J].江蘇林業科技，2008，35（5）：43-48.

[8] 姚紹嫦，譚文明，蘭祖栽，等.海南冬青組培快繁體系的建立[J].江蘇農業科學，2017，45（1）：22-26.

[9] 楊正修，張學文，羅莎，等.黃花蒿離體再生體系優化研究[J].湖北農業科學，2017，56（6）：1161-1164.

[10] 潘梅，付瑞侃，戚華沙，等.黃花馬鈴苣苔不定芽高頻再生研究[J].種子，2017，36（1）：86-89.endprint