水貂源大腸桿菌耐藥性的檢測與分析

馮 濤 ， 薛 原

(東北林業大學野生動物資源學院 ， 黑龍江 哈爾濱 150040)

水貂源大腸桿菌耐藥性的檢測與分析

馮 濤 ， 薛 原

(東北林業大學野生動物資源學院 ， 黑龍江 哈爾濱 150040)

在東北三省養殖場采集健康水貂的糞便樣本，采用K-B紙片法檢測大腸桿菌對22種抗微生物藥的耐藥性。結果表明，水貂源大腸桿菌90株分離菌株對每種抗生素呈現不同水平的耐藥性。對頭孢噻吩的耐藥性最高為92.23%，對氨芐西林和四環素的耐藥率均為80%以上。對阿米卡星的敏感性最高為90%，對氨曲南、慶大霉素和多黏菌素B的敏感率均為70%以上。

水貂 ； 大腸桿菌 ； 耐藥性

近幾年來，在我國的水貂產業得到蓬勃發展，養殖場的數目逐年增加，水貂年產量居全國第一[1]。但是隨著抗菌藥物的廣泛和持續使用，大腸桿菌的耐藥性越來越強，同時也存在多重耐藥。由于各養殖場的用藥情況存在差異，各養殖場的大腸桿菌的耐藥情況也不盡相同，耐藥基因的水平和垂直傳播對水貂業的發展具有潛在影響。

因此，開展水貂的耐藥性研究具有很重要的意義。本次研究針對東北三省的養殖場大腸桿菌耐藥性進行調查和分析，旨在了解水貂的耐藥性發展趨勢，判斷其流行病學特征，為預防水貂的耐藥性研究提供依據。

1 材料與方法

1.1 菌株 藥敏質控菌株大腸桿菌ATCC25922，購自中國獸醫藥品監察所。試驗所用大腸桿菌在2016年5-10月從東北三省水貂養殖場分離的大腸桿菌共90株，將經過分離和鑒定的菌株進行藥敏試驗。

1.2 培養基 水解酪蛋白瓊脂培養基(Mueller-Hinton, MH),杭州天和微生物試劑有限公司生產，批號120302。

1.3 藥敏紙片 共22種，包括氨芐西林(AMP)、阿莫西林(AMX/AML)、頭孢噻吩(KF)、頭孢他啶(CAZ)、阿莫西林/克拉維酸鉀(AMC)、亞胺培南(IPM)、氨曲南(ATM)、慶大霉素(CN)、卡那霉素(K)、新霉素(NEO)、安普霉素(APR)、阿米卡星(AK)、諾氟沙星(NOR)、環丙沙星(CIP)、恩諾沙星(ENR)、氧氟沙星(OFX)、四環素(TE)、強力霉素(DO)、氯霉素(C)、氟苯尼考(FFC)、復方新諾明(SXT)、多粘菌素B(PB)。藥敏紙片，均購自杭州天和微生物試劑有限公司。

1.4 方法

1.4.1 大腸桿菌的分離與鑒定 將水貂的糞便樣本接種于特異性培養基。分別接種在麥康凱瓊脂平板、伊紅美藍瓊脂平板和營養瓊脂平板上。挑取菌落于LB液體培養基中培養，并將菌液用20%甘油混合并保存在-20 ℃中。根據生化特性鑒定分離的細菌為大腸桿菌。

1.4.2 藥敏試驗 采用WHO推薦的Kirby-Bauer法[2]。跟據CLSI[3]的標準，只有當質控菌株的抑菌圈直徑在允許范圍內測試菌株結果才有效。

1.4.3 判定標準 按抗菌藥物敏感性試驗擴散法[3]標準判定各菌株的耐藥性，對所分離的細菌進行藥敏試驗。以敏感(Susceptible)、中介(Intermediate)、耐藥(Resistant)3種形式對抑菌圈大小作出判定。

2 結果

2.1 大腸桿菌的耐藥性 90株水貂源大腸桿菌均可產生耐藥性，見圖1。對頭孢噻吩、氨芐西林和四環素耐藥率較高，達80%以上；對阿米卡星、氨曲南、慶大霉素和多黏菌素B高度敏感，敏感率達70%以上 。

圖1 水貂源大腸桿菌對22種抗生素的藥敏試驗結果

2.2 大腸桿菌的多重耐藥性 90株水貂源大腸桿菌對22種抗菌藥物均存在耐藥性，表現對2種或2種以上藥物耐藥。6耐菌株所占比例最大為15.56%。分離菌株存在多重耐藥現象。見圖2。

圖2 水貂源大腸桿菌的多重耐藥性

2.3 大腸桿菌的耐藥類型 水貂源大腸桿菌中，耐藥類型多樣。見表1。

3 討論

在本研究中，90株水貂源大腸桿菌對本試驗所采用的22種抗生素均有不同程度的耐藥性，并且均為多重耐藥[3]。其中最少的耐藥性僅有2種，最多的耐藥性可達17種，比例較高的為6重耐藥，耐6種抗生素的占總數的15.56%，且7重耐藥及以上的菌株共有60株，所占比例可達66.7%，Hajer[4]等人在2013年對毛皮動物狐進行耐藥性檢測，72.2%表現對不止一種藥物耐藥，與本次研究結果相似。這些結果都說明東北地區水貂養殖場在治療疾病時，用藥情況比較復雜。大腸桿菌在抗微生物藥使用壓力下，逐漸轉化成為多重耐藥菌株。大腸桿菌耐藥率的結果表示：東北地區水貂源大腸桿菌對8種抗菌藥物呈現較高的耐藥性，其中頭孢噻吩的耐藥率最高92.3%，四環素的耐藥率為86.7%，氨芐西林的耐藥性也達到84.4%，其他依次為復方新諾明、氯霉素、強力霉素、阿莫西林、恩諾沙星，這些藥物的耐藥率均在50%以上, 孫蓉蓉[2]等人在2015年對山東地區毛皮動物貉的耐藥性試驗中同樣表示，其對四環素、氨芐西林等藥物耐藥，這些抗菌藥物多為臨床常用藥物[4]，這也是耐藥性發展的前提，在臨床上不常使用的藥物如多黏菌素B的耐藥性為0。以上都提示我們，要及時開展掌握耐藥菌株的檢測工作，以便合理有效地控制抗生素的使用。

水貂作為經濟價值較高的珍貴毛皮動物，特別是近幾年，人們對貂皮的需求量也越來越大，這極大地促進了我國養貂業的快速發展。因此，為進一步優化目前水貂的養殖業現狀，對水貂耐藥性進行及時的流行病學調查十分重要。我們在飼養過程中，應該盡量減少或者不使用抗微生物藥物，對于水貂一類的毛皮動物，使用治療效果明確的抗微生物藥物，并且定期更換藥物種類，可以很好的預防新的耐藥性出現。控制大腸桿菌耐藥基因在水貂內的流行和傳播[5]，合理減少水貂由于大腸桿菌而導致的疾病，促進養貂業的發展。

表1 水貂源大腸桿菌的耐藥譜型

[1] 賀冬梅,陳朝喜,尹遜慧.水貂源大腸桿菌對9種抗菌藥物敏感性試驗[J]. 西南民族大學學報, 2015,5: 544-547.

[2] Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI).Performance standards for antimicrobial susceptibility testing[C] 25th informational supplement. Document M100-S25, Wayne, PA: CLSI, 2015.

[3] Bonnet R. Growing group of extended-spectrum beta-lactamases: the CTX-M enzymes [J]. J Antimicrob Chemother, 2012, 48(1): 1-14.

[4] Hajer Radhouani, Gilberto Igrejas, Alexandre Gonalves,etal. Antimicrobial resistance and virulence genes in Escherichia coli and enterococci from red foxes (Vulpes vulpes) [J]. Anaerobe, 2013, 23:82-86.

[5] Anna Lalak, Dariusz Wasyl, Magdalena Zajac,etal. Mechanisms of cephalosporin resistance in indicator Escherichia coli isolated from food animals [J]. Veterinary Microbiology, 2016, 194:69-73.

AnalysisamongAntimicrobialResistanceinEscherichiacolifromNeovisonvison

FENG Tao , XUE Yuan

(Northeast Forest University , College of Wildlife Resources , Harbin 150040 , China)

The purpose of this study was to investigate the diversity of antimicrobial resistance ofEscherichiacolifrom the faeces ofNeovisonvisonin three provinces in northeast China. The susceptibility to 22 antimicrobial agents was assessed using Muller-Hinton agar. The results indicated that the strains of Escherichia coli of theNeovisonvisonwith different antibiotics had different degrees of resistance. A high frequency of resistance was found to cephalothin (92.23%). Ampicillin and tetracycline were more than 80%.The sensitivity to Amikacin (90%), gentamycin, aztreonam and polymyxin B was above 70%.

Neovisonvison;Escherichiacoli; Antimicrobialresistance

XUE Yuan

S859

A

0529-6005(2017)09-0088-03

2017-02-07

國家自然科學基金(31502119)；黑龍江省博士后科研啟動金(LBH-Q14002)

馮濤(1996-)，女(滿族)，本科生，就讀于動物醫學專業,E-mail：tao9619@163.com

薛原，E-mail：xueyuan-1978@163.com