雞發生傳染性腺胃炎后炎癥因子的變化

夏 楠 ， 張亞莉 ， 王仁虎 ， 朱明霞 ， 劉文強 ， 劉國榮

(1.聊城大學農學院 ， 山東 聊城 252059 ； 2.新希望臨沂六和飼料公司 , 山東 臨沂 276000)

雞發生傳染性腺胃炎后炎癥因子的變化

夏 楠1， 張亞莉1， 王仁虎1， 朱明霞1， 劉文強1， 劉國榮2

(1.聊城大學農學院 ， 山東 聊城 252059 ； 2.新希望臨沂六和飼料公司 , 山東 臨沂 276000)

為了闡明雞傳染性腺胃炎(chickens infectious proventriculitis，CIP)的發病規律，研究了該病的病變特點和機體內炎癥因子的變化規律。對于不同日齡的自然發病肉雜雞分別進行腺胃肉眼病變計分，發現患病雞在第21天時分值最高，病變最典型。采用ELISA對21日齡雞血清中炎癥因子和SIgA的含量進行檢測。結果顯示，與對照組相比，患病雞IL-1分泌量增加，但差異不顯著；IL-6、IL-8、TNF-ɑ的分泌量分別達到76.933 7±7.233 4 ng/L、62.206 3±7.869 3 ng/L和134.598 8±18.649 7，顯著高于對照組(P<0.05)。SIgA分泌量為19.187 5±1.976 8 ng/L，明顯高于對照組，差異極顯著(P<0.01)。這些變化表明，機體發生了全身性或局灶性炎癥，也表明機體產生了顯著的免疫應答，并且有助于該病的輔助診斷。

肉雜雞 ； 傳染性腺胃炎 ； 炎癥因子

雞傳染性腺胃炎(CIP)是一種由多種致病因素共同或者協同作用引起的一種傳染性慢性消耗性疾病，主要侵害3～25日齡的雛雞，發病雞群采食量下降，生長緩慢，機體消瘦，羽毛雜亂[1-2]。大體剖檢病變是腺胃腫大、腺胃乳頭出血、水腫和分泌物增多[3-4]。該病流行范圍廣，病因復雜并且具有不確定性，發病率和病死率較高，對養禽業帶來重大的經濟損失。發生CIP的雞體內發生一系列的病理變化，引起炎癥反應，造成免疫抑制，例如，已經發現發生CIP的雞體內IL-2 和IFN-γ含量明顯降低，造成了免疫抑制，繼發其他疾病[5-6]。

目前，雞傳染性腺胃炎的病原學研究較多[7-8]，但是感染后可量化的判斷標準及體內炎癥因子的變化規律研究較少。推測發生CIP后相應的炎癥因子如IL-1、IL-6、IL-8、TNF-ɑ和SIgA的分泌量有可能發生變化。使用ELISA方法檢測了這些細胞因子的變化規律及其與CIP的病變特點的關系，揭示了肉雜雞體內的免疫學變化。

1 材料與方法

1.1 試驗動物 817肉雜雞來自山東省某規?；怆u場，于2016年6-8月監測其發病情況。按照CIP發病標準[6]選擇發病雞只作為發病試驗組(A組)，在7、14、21、28日齡分別選取發病雞各20只，選擇同日齡健康雞20只作為對照組(B組)。

1.2 主要試劑 包括Chicken IL-1、IL-6、IL-8、SIgA和TNF-ɑ的EILSIA檢測試劑盒，購自美國Rapid-bio生物公司。

1.3 方法

1.3.1 腺胃病變計分 從第7天開始，每隔7 d剖檢20只符合CIP標準的病雞，根據其發病情況進行腺胃肉眼病變計分：分數為0～3分，代表無病變至嚴重病變。0分為正常腺胃；1分為發生腫大，無出血，無腺胃乳頭脫落；2分為發生腫大，并且有出血，但無腺胃乳頭脫落；3分為腺胃腫大，且有出血和腺胃乳頭脫落。計算每組的病變計分。

1.3.2 炎癥因子含量測定 對21日齡雞進行翅靜脈采血1.5 mL，5 000r/min離心10 min，收集血清用于炎癥因子含量的檢測。按照IL-1、IL-6、IL-8、TNF-ɑ和SIgA檢測試劑盒的說明書，采用雙抗體夾心ELISA法進行炎癥因子含量的測定，使用Bio-Rad M680酶標儀測定其在450 nm波長下的OD值。

1.3.3 制定標準曲線 根據試劑盒中各標準品加樣孔對應的細胞因子的濃度繪制標準曲線，此時曲線上縱坐標是標準物OD值，橫坐標是其相應的濃度，根據標準曲線得出其線性的方程式，然后將測得的樣品OD值代入方程式得到各孔細胞因子的濃度C1，實際濃度是樣品濃度C1的5倍。

1.3.4 數據統計所有數據采用SPSS19.0軟件處理分析，統計各組數據的差異性。

2 結果與分析

2.1 病變計分結果 經過連續病變計分，發現發病21 d的試驗組雞病變計分最高(圖1)。剖檢時發現該組雞腺胃表面有明顯的壞死灶，腺胃乳頭出血、脫落甚至消失。腔上囊和胸腺已經發生萎縮并且胰腺壞死。判定該組為典型病變，對其進行炎癥因子含量變化的測定。

圖1 不同日齡的雞病變計分

2.2 標準曲線的制定 以白細胞介素1(IL-1)為例檢測標準品的OD值和濃度，建立標準曲線，經測算R2=0.9893表示曲線成立(表1和圖2)。

表1 雞群白細胞介素1(IL-1)的OD值和濃度

圖2 IL-1的標準曲線

2.3 炎癥因子的變化 由表2可知，與對照組相比，21日齡的CIP病雞血清IL-1分泌量增加，但差異不顯著；IL-6、IL-8、TNF-ɑ的分泌量分別達到76.933 7±15.233 4 ng/L、62.206 3±12.869 3 ng/L和134.598 8±18.649 7，明顯高于對照組，且差異顯著。SIgA分泌量為19.187 5±5.976 8 ng/L，明顯高于對照組，差異極顯著。這也表明，在21日齡測定CIP病雞血清中細胞因子的含量具有顯著的意義。

表2 21 d的CIP雞血清中細胞因子含量測定結果

*：P<0.01，表示極顯著；P<0.05表示顯著；P>0.05表示不顯著

3 討論

參與炎性反應的細胞因子主要有Th1和Th2，其中，Th1細胞參與細胞免疫和遲發性超敏性炎癥反應，如IL-10；Th2可輔助B細胞分化為抗體分泌細胞，參與體液免疫應答，如IL-2。IL-6又稱前炎癥細胞因子，是炎癥反應中的中樞性調節因子，而且IL-6含量的高低與機體體液免疫功能呈正相關關系[9-10]。雞群感染CIP后IL-6的含量明顯增高，發生典型的炎癥反應后，也通過受體介導B淋巴細胞的增殖，促進機體的體液免疫應答。IL-8是一種強有力的嗜中性粒細胞趨化和活化因子，可以趨化嗜中性粒細胞到炎癥部位，加重炎癥反應造成組織損傷[11]。當雞群發生CIP后IL-8的分泌增加，證明機體已經發生了顯著的炎癥反應。TNF-ɑ是炎癥反應中釋放最早且具有廣泛生物活性的炎癥因子，正常情況下，TNF-ɑ的含量很低，一旦受到外界的刺激，其調控因子κB被激活，對TNF-ɑ進行調控使其含量增加。同時，TNF-ɑ對κB再刺激會發生級聯反應，促進IL-1和IL-8 含量增加，發生炎癥因子的瀑布效應，使炎癥反應更加嚴重[12]。這幾種炎癥因子協同作用，促進了腺胃病變積分的升高，并于21 d到達最高。SIgA的合成與分泌主要受T淋巴細胞和白細胞介素的調節，主要分泌到外分泌液中發揮效應功能。作為黏膜免疫的主要成員，同時還可以產生全身性的體液免疫應答[13-14]。雞群感染CIP后SIgA的含量增高，表明CIP導致了機體提高黏膜免疫應答水平，以抵抗病原微生物的感染。

許多研究集中于CIP的病因學分析，但是該病病因的復雜性，至今尚無定論。而且，實驗室復制該病例較為困難。因此，本試驗采集自然感染發病的臨床病例作為樣本進行了研究。對于IL-1、IL-6、IL-8、TNF-ɑ和SIgA五種炎癥因子和肉雜雞CIP關系的研究，從免疫學角度分析表明，這些炎癥因子都有特異的功效，但是它們之間以及和其他炎癥因子之間又是相互關聯密不可分的。例如，TNF-ɑ、IL-1、IL-6誘發炎癥反應在很大程度上是通過誘導產生以IL-8為代表的趨化因子所介導而產生的，且與病灶的大體炎癥程度呈正相關。無論何種原因引起CIP采用病變積分的方式均能用于評估該病嚴重程度。發生CIP感染后，體內的IL-2和IFN-γ含量顯著減少，表明產生了嚴重的免疫抑制[6]。本試驗結果表明，隨著病情的發展，IL-6、IL-8、TNF-ɑ和SIgA等炎癥因子的含量也有顯著變化，提示機體發生了全身性或局灶性的炎癥反應。通過炎癥因子的含量變化檢測為CIP的防控和治療提供理論依據，并且具有實際的臨床意義。

[1] Goodwin M A, Hafner S, Bounous D I,etal. Viral proventriculitis in chickens[J]. Avian Pathol, 1996, 25(2): 369-379.

[2] Dormitorio T V, Giambrone J J, Hoerr F J. Transmissible proventriculitis in broilers[J]. Avian Pathol, 2007, 36(2): 87-91.

[3] 周繼勇. 雞傳染性腺胃炎病毒(暫定名)的致病性[J]. 中國獸醫學報，2000,20(2)：124-126

[4] 王建琳，尹燕博. 雞傳染性腺胃炎病理組織學觀察[J]. 動物醫學進展，2013,34(12)：247-250

[5] Van Reeth K. Cytokines in the pathogenesis of influenza[J]. Vet Microbio, 2000,74(1-2): 109-116.

[6] 劉國榮，劉文強等. 雞發生傳染性腺胃炎后IL-2及IFN-γ的動態變化[J]. 中國家禽，2015，37(6)：47-48.

[7] 沈美艷，張廣斌，李久慶，等．呼腸孤病毒在雞傳染性腺胃炎病例中存在情況的研究[J]．家畜生態學報，2006，27(6)：112-114．

[8] 王玉東，王永玲，張子春，等．雞腺胃型傳染性支氣管炎病毒(QX IBV)的分離和鑒定[J]．中國獸醫雜志，1998，24(1)：12-13．

[9] 狄政莉，萬琪等. IL-1β和IL-6在腦缺血再灌注微血管內皮細胞炎癥反應中的作用[J]. 西安醫科大學學報，2001，22(5)：432-434.

[10] 潘靈輝. 細胞因子平衡在炎癥反應中作用的研究進展[J]. 醫學綜述，2005，11(9)：775-777

[11] 任卉，崔麗英．IL-4和IL-8與支氣管哮喘及慢性阻塞性肺疾病的相關性研究[J]．內蒙古醫學院學報，2011，33(2)：168-172．

[12] 李衛，劉佳，白家媛，等．ɑ腫瘤壞死因子的研究進展[J]．動物醫學進展，2010，31(12)：108-111．

[13] Kaiser P，Rothwell L，Galyov E E，etal．Differential cytokine expression in avian cells in response to invasion by Salmonella typhimurium，Salmonella enteritidis and Salmonella gallinarum[J]．Microbiology，2000，146：3 217-3 226．

[14] 楊倩，毛衛華，汪愛芬．免疫途徑對雛雞分泌型免疫球蛋白A細胞分布的影響[J]．中國獸醫科技，1998，28(11)：3-5．

Changesofinflammatoryfactorsafterinfectiousproventriculitisinhybridbroilers

XIA Nan1， ZHANG Ya-li1， WANG Ren-hu1， ZHU Ming-xia1， LIU Wen-qiang1， LIU Guo-rong2

(1. College of agricultural of Liaocheng University ， Liaocheng 252059 ， China；2. New hope Liuhe Shandong Linyi co. ， Ltd ， Linyi 276000 ,China)

Pathological characteristics of the disease and the change of inflammatory factors were analyzed to clarify the pathogenesis of chickens infectious proventriculitis(CIP). The pathological changes of the proventriculitis in the broilers with different ages were scored, respectively. The highest score was found at 21 day with the most typical lesions. Inflammatory factors and SIgA in the serum of chickens of 21 days were detected with ELISA，The results showed that the secretion of IL-1 was increased but no significant difference in the diseased chickens compared with the control group. The secretion of IL-6, IL-8 and TNF-ɑ were 76.933 7±7.233 4 ng/L 62.206 3±7.869 3 ng/L and 134.598 8±18.649 7 ng/L，respectively,which were significantly higher than the control group(P<0.05). The secretion of SIgA was 19.187 5±1.976 8 ng/L, which was significanty differently higher than that of the control group(P<0.01).

hybrid broiler ; infectious proventriculitis ; inflammatory factor

LIU Wen-qiang

S852.4

A

0529-6005(2017)09-0020-03

2016-12-31

國家自然科學基金(81202306);山東省高等學校科技計劃(J14LF03);聊城大學創新創業項目(cxcy2015072)

夏楠(1991-)，女，碩士，從事動物疫病發生機理與防治研究，E-mail: 1423445152@qq.com

劉文強，E-mail：liuwenqiang@lcu.edu.cn