低共熔溶劑萃取熒光法快速檢測辣椒油中的羅丹明B

林純忠，王韋達，陳美婷，劉慧強，張 清，杜業剛

（1.深圳市龍華區動植物檢驗檢測中心，廣東 深圳 518131；2.深圳市計量質量檢測研究院，廣東 深圳 518100）

低共熔溶劑萃取熒光法快速檢測辣椒油中的羅丹明B

林純忠1，王韋達2，陳美婷2，劉慧強2，張 清1，杜業剛2

（1.深圳市龍華區動植物檢驗檢測中心，廣東 深圳 518131；2.深圳市計量質量檢測研究院，廣東 深圳 518100）

羅丹明B是一種堿性工業染料，由于它對人體具有潛在的致癌毒性而被禁止添加在食品中。然而，一些不法商販用羅丹明B作為食品著色劑摻雜在辣椒油中。利用由氯化膽堿和乙二醇（摩爾比為1∶3）合成的低共熔溶劑作為提取介質，酶標儀作為熒光信號檢測器實現了辣椒油中羅丹明B的快速定性檢測。

羅丹明B；低共熔溶劑；酶標儀；氧雜蒽染料

羅丹明B又稱堿性玫瑰精（分子結構如圖1所示，pKa=3.7），是一種人工合成的氧雜蒽染料，作為熒光試劑被廣泛應用在金屬離子識別，蛋白標記等領域，但由于它對人體存在潛在的致癌、致畸性，被歐洲食品安全局禁止應用于食品中。然而，一些不法商家在利益的誘惑下將羅丹明B用作著色劑對辣椒油進行染色，以增加產品的色澤。盡管食品中羅丹明B的檢測方法已有眾多的報道，例如高效液相色譜法、液相色譜串聯質譜法、酶聯免疫分析法等，但這些方法檢測周期長，不適用于對大批量的辣椒油進行快速篩查。因此，有必要建立一種可以對羅丹明B進行快速定性的檢測方法。近年來，低共熔溶劑作為一類新型綠色環保溶劑在分離技術領域引起了廣泛的關注。楊國武等人發現，由氯化膽堿和乙二醇按照摩爾比1∶3組成的低共熔溶劑（DES-1）可以從辣椒油中選擇性萃取羅丹明B。考慮到羅丹明B的熒光特性，我們產生了通過直接讀取提取液熒光信號對羅丹明B進行定性檢測的想法。為了將這一想法付諸實踐，我們利用酶標儀收集了提取液的熒光數據。

圖1 羅丹明B分子結構式

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

多功能酶標儀（BioTek SynergyTM HTΧ，美國）；IKAGENIUS 3渦輪器：德國IKA公司；HERMLE Z323高速離心機：德國Hermle-Labortechnik公司；微孔過濾膜（0.22 μm）：美國Millipore公司；離心管（15 mL）：美國康寧公司。

甲醇（色譜純）：Merck公司；正己烷（色譜純）：Merck公司；氯化膽堿（分析純）：Aladdin公司；乙二醇（分析純）：上海凌峰化學公司；羅丹明B標準物質（純度95.0%）：Dr.Ehrenstorfer GmbH公司；羅丹明B溶解于甲醇中制備成儲備液（1.00 mg/L）。低共熔溶劑（DES-1）的合成：稱取27.908 g氯化膽堿和24.811 g乙二醇加入茄形瓶中，氮氣保護下加熱至100℃，磁力攪拌至反應液呈澄清透明狀，冷卻至室溫即可。

1.2 樣品前處理

稱取約1 g樣品，精確至0.001 g，置于15 mL離心管中，分別加入低共熔溶劑（DES-1）和正己烷1.0 mL和5.0 mL，渦旋震蕩1 min，于7 500 rpm離心5 min，用吸管取走上面的正己烷層，向剩余物中再次加入5.0 mL正己烷，渦旋震蕩1 min；于7 800 rpm離心3 min，用吸管取走上面的正己烷層，殘留物用甲醇定容至5.0 mL，過0.22 μm微孔濾膜，供檢測用。

1.3 熒光分析條件

測樣體積為200 μL，激發波長為530/25 nm，檢測波長為590/35 nm。

2 結果與討論

實驗結果如圖2所示，樣品提取液的熒光強度隨著羅丹明B濃度的增加而增強，且單個樣品的熒光檢測過程僅需要數秒即可完成，大大縮短了樣品的檢測周期。

圖2 羅丹明B不同添加水平的辣椒油提取液的熒光強度圖

實驗結果說明，辣椒油中是否含有羅丹明B可以通過酶標儀直接讀取樣品提取液的熒光信號進行快速定性，該方法的定性檢出限為200 μg/kg，可應用于大批量辣椒油的快速定性篩查，為保障食品安全提供一種新的便捷技術。

3 實際樣品檢測

市場隨機抽取辣椒油樣品50份，應用所建立的分析方法對這些樣品進行了羅丹明B的快速定性檢測。實驗結果顯示，在抽取的辣椒油樣品中未檢測到羅丹明B的特征熒光信號，檢測結果的準確性也得到了高效液相色譜儀（HPLC）的進一步驗證。另外，在添加羅丹明B的樣品中（添加水平為600 μg/kg），酶標儀均檢測到了較強的熒光信號。說明利用低共熔溶劑（DES-1）萃取結合酶標儀建立的羅丹明B快速定性方法具有潛在的市場應用價值。

4 結論

我們首次利用低共熔溶劑萃取結合酶標儀建立了羅丹明B的定性分析方法，該方法操作簡單，分析快速，可適用于大批量辣椒油的快速篩查工作，為食品安全提供了一種全新的便捷技術。

［1］陳家逸，蘇偉，王恩舉.基于1，8-萘酰亞胺與羅丹明B間熒光共振能量轉移的高選擇性Hg2+比率熒光探針［J］.高等學校化學學報，2016（37）.

［2］王穎，李鐘卉，鐘文英，等.羅丹明B硅納米粒子探針及其在蛋白芯片檢測中的應用［J］.中國科學，2010（40）.

R187

A

10.15913/j.cnki.kjycx.2017.21.032

2095－6835（2017）21－0032－02

林純忠（1976—），男，廣東揭陽人，碩士，工程師，研究方向為農產品安全及食品化學分析。林業剛（1978—），男，博士，研究方向為食品化學分析。

〔編輯：張思楠〕