高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測酒類產(chǎn)品中11種PDE-5抑制劑及其衍生劑

翟紋靜

(1.蘇州出入境檢驗(yàn)檢疫綜合技術(shù)中心，江蘇蘇州215100； 2.蘇州世標(biāo)檢測技術(shù)有限公司，江蘇蘇州215100)

高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測酒類產(chǎn)品中11種PDE-5抑制劑及其衍生劑

翟紋靜1，2

(1.蘇州出入境檢驗(yàn)檢疫綜合技術(shù)中心，江蘇蘇州215100； 2.蘇州世標(biāo)檢測技術(shù)有限公司，江蘇蘇州215100)

建立了高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀對酒類產(chǎn)品中11種PDE-5抑制劑及其衍生劑的快速分析方法。樣品經(jīng)乙腈∶水（1∶1，v/v）超聲提取，Atlantis d C18色譜柱(2.1×150 mm，3 μm)為分析柱，0.1%甲酸溶液和0.1%甲酸乙腈為流動相，電噴霧正離子多反應(yīng)監(jiān)測模式進(jìn)行檢測，外標(biāo)法定量。試驗(yàn)結(jié)果表明，該方法的RSD值范圍為0.57%～11.69%，回收率范圍在60.0%～118.6%，該方法的線性相關(guān)性良好，檢測低限、精密度和準(zhǔn)確度均符合要求，能夠滿足酒類產(chǎn)品中11種PDE-5抑制劑及其衍生劑的檢測要求。

液質(zhì)聯(lián)用儀； 酒類； PDE-5抑制劑

2014年8月，有媒體報道湖北一家酒廠，為打開銷路，暗地里在酒中添加西地那非違禁化學(xué)藥品，最終酒廠負(fù)責(zé)人被刑拘。2015年7月31日，國家食品藥品監(jiān)督管理總局發(fā)布通告稱，51家企業(yè)因在69種保健酒、配制酒中違法添加西地那非等化學(xué)物質(zhì)，已被立即停產(chǎn)，并召回全部在售產(chǎn)品。為保障消費(fèi)者合法權(quán)益和消費(fèi)安全。2016年5月23日，國家食品藥品監(jiān)管總局再次下發(fā)通知，要求全國食品藥品監(jiān)管部門開展配制酒等食品非法添加問題專項(xiàng)治理工作。不僅如此，在保健酒里違法添加的西地那非開始流向白酒，這可能會對白酒行業(yè)產(chǎn)生影響。

磷酸二酯酶-5(PDE-5)抑制劑是一類應(yīng)用廣泛的治療男性勃起功能障礙類藥物，臨床用藥主要有西地那非、伐地那非和他達(dá)拉非3種。隨著對PDE-5抑制劑衍生物的不斷研究，新發(fā)現(xiàn)的PDE-5抑制劑衍生物越來越多[1]。因此對于此類非法添加化學(xué)成分亟待建立合理、有效的檢測方法。目前應(yīng)用于非法添加物的分析方法主要有化學(xué)法、薄層色譜法、高效液相色譜法[2]、高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)[3-4]、超高效液相色譜法、毛細(xì)管電泳技術(shù)、紅外光譜法和拉曼光譜法等[5]。

傳統(tǒng)理化方法干擾嚴(yán)重、樣品量大、操作繁雜，目前日漸少用[6]。本文基于相關(guān)研究的基礎(chǔ)，采用高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)建立了同時檢測非法添加的11種抗疲勞類化學(xué)藥物的快速檢測方法，為打擊不法行為提供可靠的技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑及儀器

白酒樣品：市售若干品牌白酒、紅酒。

試劑：乙腈，色譜純；甲酸，色譜純；11種PDE-5抑制劑及其衍生物的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)信息見表1。

儀器設(shè)備：6460液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀（安捷倫）；旋渦混合器（IKA）；電子天平（梅特勒）。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)儲備液的配制

精確稱取西地那非、那莫西地那非、羥基豪莫西地那非、紅地那非、那紅地那非、硫代艾地那非、偽伐地那非、氨基他達(dá)拉非、他達(dá)拉非、伐地那非、豪莫西地那非標(biāo)準(zhǔn)品各10 mg，分別在10 mL容量瓶中加乙腈溶解定容，濃度均為1000 mg/L。

1.2.2 混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液的配制

取各標(biāo)準(zhǔn)儲備液100μL，移至同一10 mL容量瓶中，用乙腈稀釋定容得到混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液，濃度為10 mg/L。

1.2.3 混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制

定量時，用50%乙腈將混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液(1.2.2)稀釋成一系列濃度，作為混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 液相條件

色譜柱：Atlantis d C183μm，2.1×150 mm。流速：0.2mL/min；柱溫：25 ℃；進(jìn)樣量：10.0 μL。流動相：A：0.1%甲酸水溶液；B：0.1%甲酸乙腈溶液。

洗脫程序：0～13.0 min；15%～15%B。

1.3.2 質(zhì)譜條件

電離源模式：電噴霧離子源；電離源極性：正模式；檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測；電噴霧電壓：3500 V；鞘氣溫度：250℃；鞘氣流速：10 L/min；干燥氣流速7 L/min；干燥氣溫度：300℃；通過優(yōu)化后的定性、定量離子對，去簇電壓（V），碰撞能量（V），見表2。

1.4 前處理方法

準(zhǔn)確稱取1.00 g（精確到0.01 g）均質(zhì)試樣置于10 mL具玻璃磨口塞的刻度玻璃管中，加50%乙腈水3 mL，旋渦30 s，超聲處理15 min，冷卻至室溫，用50%乙腈水稀釋至刻度，搖勻，經(jīng)0.22μm微孔濾膜過濾后供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測定。注意：過濾時應(yīng)排出開始的2 mL待測液。

2 結(jié)果與分析

2.1 總離子流圖

表1 不同化合物標(biāo)準(zhǔn)品信息

表2 不同化合物采集離子對信息

在1.3條件下，11種PDE-5抑制劑及其衍生物的總離子流圖見圖1。

圖1 11種PDE-5抑制劑及其衍生物的標(biāo)準(zhǔn)品總離子流圖

在此實(shí)驗(yàn)條件下，最后目標(biāo)物出峰時間為12.07 min，再平衡2 min左右，15 min內(nèi)就能分析1個樣品，可以有效地提高樣品分析速度。從圖1可以看出，雖然豪莫西地那非、羥基豪莫西地那非和西地那非色譜峰有重疊，紅地那非、那紅地那非和伐地那非的保留時間相近，但不影響目標(biāo)物的分析，因?yàn)椴杉碾x子不一樣，所以提取離子圖后可以明顯地區(qū)分出不同化合物。雖然伐地那非和豪莫西地那非、偽伐地那非和那莫西地那非、硫代艾地那非和羥基豪莫西地那非兩兩化合物的母離子相同，但是它們的子離子和色譜保留時間相差較大，可以明顯區(qū)別開，不影響相互之間的定性和定量。

2.2 方法的線性范圍及測定底限

以50%乙腈為溶劑，分別配制11種PDE-5抑制劑及其衍生物濃度為 2.5 μg/mL、5.0 μg/mL、10.0 μg/mL、25.0 μg/mL、50.0 μg/mL的混標(biāo)溶液，建立各標(biāo)準(zhǔn)曲線，不同化合物的曲線回歸方程及相關(guān)系數(shù)見表3。11種PDE-5抑制劑及其衍生物的測定底限均為12.5 μg/kg，當(dāng)加標(biāo)樣品中目標(biāo)物含量小于該值時，他達(dá)拉非、伐地那非和硫代艾地那非的回收率均小于60%，不符合標(biāo)準(zhǔn)GB/T 27404—2008的要求。

2.3 方法精密度和回收率

準(zhǔn)確稱取1.00 g白酒樣，添加12.5 μg/kg、25.0 μg/kg以及62.5 μg/kg 3個濃度水平的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，每個水平平行測定6次，結(jié)果見表3。

由表3可看出，11種PDE-5抑制劑及其衍生物的相關(guān)系數(shù)均大于0.993，測定結(jié)果RSD值范圍為0.57%～11.69%，說明線性良好，穩(wěn)定性好。不同項(xiàng)目的回收率范圍在60.0%～118.6%，提取率高，滿足日常檢測需求。

對市售的十余批白酒和紅酒進(jìn)行了11種PDE-5抑制劑及其衍生物的檢測分析，結(jié)果均未檢出。說明目前酒類產(chǎn)品市場比較規(guī)范，但是仍需加強(qiáng)對相關(guān)生產(chǎn)過程和銷售渠道的監(jiān)管，保障消費(fèi)者的食品安全。

3 結(jié)論

利用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)，建立了15 min內(nèi)快速檢測分析酒類產(chǎn)品中的11種PDE-5抑制劑及其衍生物的LC-MS/MS分析法。同時經(jīng)二級質(zhì)譜分析，極大提高了儀器的靈敏度，排除假陽性的干擾，從而使檢測結(jié)果更加準(zhǔn)確。該方法快速、穩(wěn)定，線性相關(guān)性良好，檢測底限、精密度和準(zhǔn)確度均符合要求，能夠滿足酒類產(chǎn)品中11種PDE-5抑制劑及其衍生物的檢測要求。

表3 不同化合物的曲線回歸方程及相關(guān)系數(shù)

[1]馬春艷,段瓊,封淑華,等.一種新型PDE-5抑制劑衍生物的發(fā)現(xiàn)及結(jié)構(gòu)鑒定[J].分析測試學(xué)報,2016,35(5)：551-556.

[2]謝強(qiáng)勝,王慧,張子璇,等.超高效液相色譜法測定酒精飲料中非法添加抗疲勞藥物他達(dá)拉非及2種類似物[J].食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報,2017,3(8)：1030-1036.

[3]龍凌云,李濤,鄧永琪,等.HPLC-MS/MS法同時檢測抗疲勞保健食品中非法添加的8種壯陽類化合物[J].農(nóng)產(chǎn)品加工,2015(6)：45-47.

[4]張書文,王錕,韓圣謙.超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時測定露酒中伐地那非、西地那非和他達(dá)拉非含量[J].化學(xué)分析計量,2016,25(1)：44-46.

[5]張小龍,王昆,吳先富,等.中藥及保健食品中非法添加狀況分析[J].中國藥師,2014,17(10)：1749-1735.

[6]王葒暉.中成藥非法添加化學(xué)藥物研究進(jìn)展[J].安徽醫(yī)藥,2011,15(9)：1168-1170.

貴州醇“品味純粹——發(fā)現(xiàn)白酒之美”品鑒活動在筑舉行

本刊訊：2017年9月8日，在中國酒業(yè)協(xié)會、貴州省釀酒工業(yè)協(xié)會、釀酒科技雜志社指導(dǎo)下，貴州醇酒業(yè)有限公司舉辦了主題為“品味純粹——發(fā)現(xiàn)白酒之美”的新文化主張研討會。各位專家、行業(yè)領(lǐng)導(dǎo)、業(yè)內(nèi)精英齊聚一堂，共同品鑒貴州醇美酒。

貴州醇酒業(yè)有限公司總裁肖進(jìn)春為在座來賓介紹了企業(yè)基本情況，并介紹本次活動以“品味純粹——發(fā)現(xiàn)白酒之美（新文化、新價值、新生活）”為主題，以“美酒品鑒＋專家座談＋新文化倡議”為活動形式，通過4款美酒與佳肴的配搭讓現(xiàn)場嘉賓享受味蕾盛宴。

當(dāng)天的品鑒酒全部由貴州醇酒業(yè)提供，而每一款酒都得到了專家們的高度稱贊。其中，35%vol貴州醇的專家評語是低度濃香典范，中國低度酒風(fēng)潮的引領(lǐng)者，宜中杯飲，搭配川菜、燒烤、火鍋俱佳，加冰加水，色味不變，數(shù)十年新潮白酒經(jīng)典之作；42%vol金貴貴州醇的專家評語是中度白酒，口感舒適綿長，窖香優(yōu)雅，宜中杯飲，配菜清甜咸適最佳，可品味，可爽飲，不易傷身；42%vol奇香貴州醇的專家評語是“當(dāng)高粱遇到葡萄”，單寧的芬芳清甜，遇到高粱酒的濃郁熱烈，一款中西合璧的無上妙品，或浪漫、或豪情，宜大杯小品，中餐西餐俱佳；莊齡20年的53%vol純粹酒莊酒的專家評語為“山水藏酒，歲月留金”，一款融高粱酒的“醇”、醬香的“厚”、奇香的“甘”之精華的地道貴州“酒莊酒”，以“醇、厚、甘”體會完全不同的高粱的熱烈、葡萄的幽香、醬香的醇厚。

在場專家普遍認(rèn)為，發(fā)現(xiàn)、品味純粹的白酒品鑒之美，讓白酒融入現(xiàn)代成為表達(dá)中國生活方式之美的生活符號，而這最為簡潔的辦法就是讓白酒成為中國飲食文化的一個主題符號。（小雨、螢子、曉文）

Determination of 11 Kinds of PDE-5 Inhibitors and their Derivatives in Alcoholic Drinks by LC-MS/MS

ZHAI Wenjing1,2

(1.Suzhou Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau,Suzhou,Jiangsu 215100;2.Suzhou World Standard Testing Technology Co.Ltd.,Suzhou,Jiangsu 215100,China)

A method of high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry(LC-MS/MS)had been developed for the determination of 11 kinds of PDE-5 inhibitors and their derivatives in alcoholic drinks.Samples were diluted with acetonitrile∶water(1∶1,v:v)and the analyte was separated by an Atlantis dC18 column（2.1×150 mm,3 μm）using a mobile phase consisting of 0.1%formic acid and acetonitrile with 0.1%formic acid.The analyte was detected in multiple-reaction monitoring(MRM)mode via positive electrospray ionization(ESI+).The determination results showed that the RSD was between 0.57%to 11.69%and the recovery was between 60.0%to 118.6%at three spiked levels.The method was characterized by its excellent purification effect,high sensitivity and good accuracy,and it could be used for the determination of 11 kinds of PDE-5 inhibitors and their derivatives in alcoholic drinks.

high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry(LC-MS/MS);alcoholic drinks;PDE-5 inhibitor

TS262.7；TS261.7；TS261.4

A

1001-9286（2017）10-0126-04

10.13746/j.njkj.2017181

2017-06-22

翟紋靜(1987-)，女，河南鶴壁人，工程師，碩士，農(nóng)產(chǎn)品加工及貯藏工程專業(yè)。