化療結合DC-CIK免疫治療多發性骨髓瘤患者療效及安全性評價

●張乃紅

化療結合DC-CIK免疫治療多發性骨髓瘤患者療效及安全性評價

●張乃紅

目的：探討分析化療聯合以樹突狀細胞(DC)和細胞因子誘導的殺傷細胞(CIK)為效應細胞的過繼免疫治療多發性骨髓瘤(MM)的臨床療效。方法：隨機選取2014年1月至2015年1月我院收治的50例MM患者，隨機分成兩組，對照組：25例，常規化療。觀察組：25例，化療結合DC-CIK免疫治療。觀察誘導前后免疫表型變化，以及兩組患者的治療總有效率。結果：誘導前后DC的免疫表型差異顯著，誘導后各表型的陽性率明顯提高，具有統計學意義，P＜0.01。對照組的治療總有效率為80.0%，觀察組的治療總有效率為92.0%，觀察組的臨床效果要明顯優于對照組，P＜0.05。結論：化療結合DC-CIK免疫治療多發性骨髓瘤患者療效確切，值得臨床廣泛推廣。

多發性骨髓瘤；DC-CIK免疫治療

老年人群為多發性骨髓瘤(MM)的高發人群，隨著人口老齡化的加劇，MM的發病率呈現逐年上升的趨勢。有報道顯示[1]，DC-CIK細胞免疫治療應用于MM，可表現出強大的抗腫瘤作用。本次研究以2014年1月至2015年1月我院收治的50例MM患者為例，探討分析化療結合DC-CIK免疫治療MM的臨床療效及安全性，現報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

隨機選取2014年1月至2015年1月我院收治的50例MM患者，其中男性27例，女性23例，年齡18-72歲，平均年齡（61.3±6.9）歲，隨機分成兩組。對照組：25例，常規化療治療，其中男14例，女11例，平均年齡（60.4±4.5）歲。觀察組：25例，化療結合DC-CIK免疫治療。其中男13例，女12例，平均年齡（61.6±5.2）歲。納入標準[2]：（1）符合《血液學診斷即療效標準》中對MM的診斷；（2）骨髓細胞學、血M蛋白檢查、X線檢查確診；（3）骨髓異常漿細胞＞15%；（4）均為首次診斷患者，預計生存期＞6個月；排除標準：（1）合并心、肝、腎等重要臟器功能不全者；（2）化療禁忌癥患者；（3）隨訪資料不全者；（4）中途滑脫者。所有患者均知曉本次研究內容，并自愿簽署知情同意書。兩組患者的一般資料方面，如年齡、性別、病程等方面兩組患者無統計學差異，P＞0.05，因此有可比性。

1.2 試劑與儀器

患者外周血單個核細胞采用PBS(Hy Clone)及人淋巴細胞分離液(TBD)分離洗滌；rhIL-2、rhIFN-γ（美國Peprotech公司）；無血清培養液（美國Gibco公司）、anti-CD3（BD公司）。流式單抗(CD4-FITC、CD25-APC、CD127-PE)、溶血素、PE同型對照、APC、洗滌液（均購自BD公司）；美國BDFACSCalibur流式細胞儀。

1.3 治療方法

對照組：常規化療治療。化療方案如下：地塞米松+表柔比星+長春長辛方案、地塞米松+硼替佐米+吡柔比星方案、地塞米松+環磷酰胺+表柔比星+長春地辛方案，化療周期為三個周期以上。觀察組：在對照組化療基礎上，聯合DC-CIK免疫治療。具體方案如下：

1.3.1 DC-CIK誘導[3]

取患者外周血單個核細胞(PBMC)，貼壁培養后消化成懸浮細胞，在 1640培 養 液 中 加 入 IL-1(100U/ml)、IL-2(500U/ml)、IFN-γ(1000U/ml)、CD3mAb(100ng/ml)，進行CIK培養，每兩天更換一次培養液，于第七天進行收集。剩余貼壁細胞加GM-CSF和IL-4，每三天補充一次新鮮因子，第六天加入自體Ag-DC。取培養到第八天的PBMC和Ag-DC，加入PE標記的HLAⅡmAb10μl以及FITC標記的CD86mAb、CD83mAb10μl，流式細胞儀測定。將收集到的CIK培養液分為Ag-DCCIK培養組（Ag-DC：CIK=1∶10）和單純CIK培養液培養組，24小時后，取CIK、Ag-DC-CIK和PBMC，加入FITC標記mAb對CD3表達進行檢測，CD8、CD56通過加入PE標記mAb檢查。

1.3.2 細胞回輸[4]

每次治療前48小時，對DC、CIK進行細菌、真菌、內霉素檢測，確保無污染后繼續培養，于第十四天將CIK細胞（Ag-DC致敏）離心、洗滌，25ml的人血白蛋白、20萬單位的rhIL-2、生理鹽水100ml重新制成懸浮細胞，2h內回輸至患者體內。

1.3.3 細胞的免疫表型分析

培養第八天，將CD1a、CD86、HLA-DR、CD83、CD80mAb分別加入抗原負載DC，成熟前后的DC免疫表型利用流式細胞儀檢測。

1.4 療效評價[5]

多發性骨髓瘤療效評定標準分為直接指標和間接指標兩類。直接指標包括：骨骼病變、漿細胞瘤、血清M蛋白以及尿本周蛋白，即骨骼病變有所改善；最大兩個漿細胞瘤直徑縮小＞50%；血清M蛋白下降＞50%；尿本白蛋白排出量減少＞50%。間接指標包括：血漿蛋白、免疫球蛋白、血清蛋白、血細胞比容積、血清鈣、血尿素氮、骨髓漿細胞和淋巴結以及脾臟。血漿蛋白每升增加20g；免疫球蛋白、血清蛋白恢復至正常水平；血細胞比容積增加量＞0.06；血清鈣每升下降至2.485mmol；血尿素氮降低至正常水平；骨髓漿細胞數量減少至5%，淋巴結以及脾臟腫大縮小＞50%。部分緩解：達到直接指標要求，間接指標符合兩項以上；進步：直接指標中血清M蛋白及尿本周白蛋白降低50%，間接指標達兩項以上；無效：未達到直接指標要求，間接指標僅達到一項要求。

1.5 統計學方法

對所有的數據進行統計和分析，應使用SPSS18.0軟件。組間計量資料采用t檢驗，并用x±s表示，均以P＜0.05為有統計學意義。

2 結果

2.1 誘導前后DC的免疫表型比較

誘導前后DC的免疫表型差異顯著，誘導后各表型的陽性率明顯提高，具有統計學意義，P＜0.01。

表1 誘導前后DC的免疫表型比較（±s，%）

表1 誘導前后DC的免疫表型比較（±s，%）

時間 CD1a CD83 CD86 HLA-DR誘導前 3.13±0.49 10.13±1.02 30.13±3.12 49.12±4.11誘導后 45.6±4.87 68.12±6.33 84.32±5.12 86.23±5.22 P值 ＜0.01 ＜0.01 ＜0.01 ＜0.01

2.2 兩組患者治療總有效率比較

對照組的治療總有效率為80.0%，觀察組的治療總有效率為92.0%，觀察組的臨床效果要明顯優于對照組，P＜0.05.見表2：

表2 兩組患者治療總有效率比較(n)

3 討論

MM是發病率僅次于非霍金奇淋巴瘤的血液系統惡性克隆性疾病，雖然造血干細胞移植術及一些新藥（雷利度胺、硼替佐米）的應用，使MM患者的病情明顯得到緩解，但仍存在短期內復發及原發耐藥現象的出現[6]。繼手術、化療、放療之后又一新型腫瘤治療手段——細胞因子誘導的殺傷細胞(CIK)與樹突狀細胞(DC)聯合培養，即DC-CIK細胞過繼免疫治療。CIK是體內效應細胞，具有較高的增殖速度以及癌細胞殺傷活性，具備T細胞的特異性免疫能力，可同時表達CD56、CD3，可高效準確的殺傷癌細胞，而對正常細胞無不良影響，殺傷活性約為LAK細胞的50倍。DC是一種功能較強的抗原呈遞細胞，受Ag刺激后可提供啟動CIK的有效信號，誘導特異性殺傷MM，與單純CIK相比，殺傷活性更高。本次研究結果顯示，CIK與DC聯合培養后，CD1a、CD56、CD86的陽性率明顯升高，患者的治療總有效率明顯高于化療組。綜上所示，化療結合DC-CIK免疫治療多發性骨髓瘤患者療效確切，值得臨床廣泛推廣。

（作者單位：山西省人民醫院血液科）

[1]顏斌.化療聯合負載自體抗原致敏的DC-CIK治療多發性骨髓瘤的臨床療效及免疫學機制研究[D].川北醫學院,2013.

[2]李春霞.BD方案與VAD方案治療多發性骨髓瘤的臨床觀察[D].鄭州大學,2013.

[3]鄭楠.CIK細胞聯合VAD方案治療多發性骨髓瘤的療效觀察[D].濟南大學,2014.

[4]趙霞,丁慧芳,劉國強,徐敏,邢健,魯光,路希敬.DC-CIK免疫治療聯合化療對多發性骨髓瘤患者外周血T細胞亞群及Treg細胞的影響[J].現代免疫學,2015,02（6）:130-135.

[5]趙霞,許慶,丁慧芳,徐敏,邢健,魯光,孫彩鳳,劉國強.DC-CIK聯合化療對多發性骨髓瘤患者細胞免疫功能的影響[J].中國免疫學雜志,2015,04（5）:490-496.

[6]錢磊.細胞免疫治療聯合含硼替佐米的化療方案治療多發性骨髓瘤療效分析[D].吉林大學,2014.