沙棘籽提取物配方產品抗氧化作用的研究

譚志超

（北京寶得瑞健康產業有限公司，北京 101117）

沙棘籽提取物配方產品抗氧化作用的研究

譚志超*

（北京寶得瑞健康產業有限公司，北京 101117）

近年國家提出大健康戰略，推出了《中國特殊醫學用途配方食品》，意在將醫療前置，發揮中國傳統醫學的優勢，使用中藥及提取物進行組方治療未病。隨著年齡的增長，人體內源性抗氧化酶的分泌逐漸減少，體內自由基不斷積累，從而導致疾病的發生，如糖尿病、心血管疾病、癌癥、帕金森和阿爾茲海默癥、缺血再灌注損傷等。沙棘原花青素具有很強的抗氧化活性，可以有效清除體內自由基。本研究將沙棘籽提取物和沙棘油、紫蘇籽油組方，并以沙棘原花青素為標志性成分，研究組方的抗氧化活性，進而為解決慢性疾病問題提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

沙棘籽提取物，北京寶得瑞健康產業有限公司；沙棘油，北京寶得瑞健康產業有限公司；紫蘇籽油，吉林圣基實業有限公司。

1.2 試劑

原花青素對照品，天津尖峰天然產物有限公司；丙二醛（MDA）測定試劑盒、還原型谷胱甘肽（GSH）測定試劑盒、谷胱肽過氧化物酶（GSH-PX）活力測定試劑盒，南京建成生物工程研究所。

1.3 試驗動物

SPF級昆明種雄性12月齡小鼠60只，生產許可證號為SCXK（鄂）2015-0018，使用許可證號為SYXK（鄂）2012-0065，湖北省實驗動物研究中心。試驗動物飼料，生產許可證號為SYXK（鄂）2011-0011，武漢萬千佳興生物科技有限公司。動物飼養室溫度為20℃～26℃，濕度為40%～70%。

1.4 試驗方法

1.4.1 樣品處理

樣品制備：準確稱取配方產品5.0 g、10.0 g、15.0 g，分別用大豆油定容至100 mL，供低、中、高劑量組小鼠灌胃用，稱取100 mL大豆油作為溶媒對照組和100 mL純水作為陰性對照組，各劑量均按0.01 mL/gBW的容量灌胃。各劑量組產品均在試驗前配制，臨用前搖勻，未用完的樣品放入4℃冰箱保存。

1.4.2 原花青素含量測定

1.4.2.1 試樣制備

稱取50 mg～1 000 mg試樣置于小燒杯中，加入30 mL甲醇，轉移至50 mL容量瓶中，超聲處理20 min，冷卻至室溫后，加甲醇至刻線，搖勻。取1 mL稀釋后的試樣，用甲醇定容至10 mL備用。

1.4.2.2 標準曲線繪制

稱取原花青素對照品10.0 mg溶于10 mL甲醇中，分別吸取該溶液0.0 mL、0.3 mL、0.8 mL、1.2 mL、1.7 mL、2.1 mL、2.5 mL于10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻線，搖勻，各取1 mL于546 nm波長下測定吸光度值，繪制標準曲線。

1.4.2.3 試樣中原花青素含量測定

將正丁醇與鹽酸按95∶5的體積比混合后，取出6 mL置于圓底燒瓶中，再加入0.2 mL硫酸鐵銨溶液和1 mL試樣溶液，混勻，置沸水浴（＞95℃）回流，加熱40 min后，立即置于冰水浴中冷卻，1 h內于546 nm波長處測定吸光度值，由標準曲線計算試樣中原花青素含量。

1.4.3 動物試驗

將60只12月齡小鼠按血中丙二醛（MDA）水平隨機分為5組，分別為溶媒對照組、陰性對照組、低、中、高劑量組，其中低、中、高劑量組分別以0.50 g/kg BW、1.00 g/kg BW、1.50 g/kg BW劑量連續灌胃30 d，溶媒對照組和陰性對照組分別以等量的大豆油和純水灌胃30 d。受試動物連續灌胃30 d后，各組動物選擇內眥靜脈采血，配置成1%的溶血液，分別檢測丙二醛（MDA）含量及谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）活力；處死動物，取肝臟做勻漿，制備10%的肝勻漿，做還原型谷胱甘肽（GSH）測定。

1.4.4 統計分析方法

用SPSS軟件進行方差分析，按程序先進行方差齊性檢驗，若方差齊，計算F值，若F值＜F0.05，表明各組均數間無顯著性差異；若F值≥F0.05，P≤0.05，需采用多個試驗組和一個對照組間均數的兩兩比較法進行統計。

對非正態或方差不齊的數據進行適當的變量轉換，待滿足正態或方差齊要求后，用轉換后的數據進行統計；若變量轉換后仍未達到正態或方差齊的目的，改用秩和檢驗統計。

2 結果與分析

2.1 配方產品中沙棘原花青素含量

測定結果表明，配方產品中沙棘原花青素含量為（8.31±0.074）g/kg。

2.2 配方產品對小鼠體重的影響

配方產品對小鼠體重的影響結果見下頁表1。由表1可知，配方產品對各劑量組小鼠體重均無明顯影響，與陰性對照組和溶媒對照組比較，均無顯著性差異P＞0.05。

2.3 配方產品對小鼠1%溶血液中GSH-PX活力和MDA含量的影響

不同試驗組小鼠1%溶血液中GSH-PX活力和MDA含量測定結果見下頁表2。由表2可知，配方產品高劑量組能顯著減少小鼠1%溶血液中MDA含量，能顯著升高小鼠1%溶血液中GSH-PX活力，與陰性對照組和溶媒對照組比較，均有顯著性差異（P＜0.05）。

表1 配方產品對小鼠體重的影響（n=12）

表2 配方產品對小鼠1%溶血液中GSH-PX活力和MDA含量的影響（n=12）

2.4 配方產品對小鼠肝勻漿中GSH含量的影響

不同試驗組小鼠肝勻漿中GSH含量測定結果見表3。由表3可知，配方產品高劑量組能顯著提高小鼠10%肝勻漿中GSH含量，與陰性對照組和溶媒對照組比較，均有顯著性差異（P＜0.05）。

表3 配方產品對各組小鼠10%肝勻漿中GSH含量的影響（n=12）

3 結論

以SPF級昆明種12月齡小鼠為試驗對象，分為溶媒對照組、陰性對照組、低、中、高劑量組，連續灌胃30 d后，檢測相關指標，通過計算P值，對試驗結果的顯著性差異進行判斷。試驗結果顯示，將各劑量組分別與陰性對照組和溶媒對照組比較，高劑量組小鼠10%肝勻漿中還原性GSH含量顯著升高，1%溶血液中MDA含量顯著減少，1%溶血液中GSH-PX活力顯著升高，表明沙棘籽提取物為主體的配方產品具有抗氧化作用。

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Study on antioxidation effect of seabuckthorn seed extract

TAN Zhichao*
（Beijing baoderui health industry co.LTD，Beijing 101117，China）

以沙棘籽提取物為主體，復配沙棘油、紫蘇籽油進行組方，以沙棘原花青素為標志性成分，按人群推薦攝入量為每人每天3 g，確定攝入劑量為0.05 g/kg BW（成人體重均值以60 kg計）。按照人群推薦日攝入量的10、20、30倍設置低、中、高3個劑量組（即0.5 g/kg BW、1.0 g/kg BW、1.5 g/kg BW），對SPF級昆明種小鼠連續灌胃30 d，以溶血液中MDA含量、溶血液GSH-PX活力、肝勻漿中GSH含量為評價指標，各劑量組分別與陰性對照組和溶媒對照組比較。結果顯示，高劑量組小鼠10%肝勻漿中還原性GSH含量顯著升高，1%溶血液中MDA含量顯著減少，1%溶血液中GSH-PX活力顯著升高。試驗表明，以沙棘籽提取物為主體的配方產品具有抗氧化作用。

沙棘籽提取物；抗氧化；沙棘原花青素

With seabuckthorn seed extract as the main body,compound with seabuckthorn procyanidins,perilla seed oil formula,sea buckthorn procyanidins as iconic composition,according to the crowd is recommended intake per day for 3 g,to determine the dosage is 0.05 g/kg BW(adult weight average at 60 kg).In accordance with the recommended daily intake of crowd 10,20,30 times set high,medium and low three dose groups(i.e.,0.5 g/kg BW,1.0 g/kg BW,1.5 g/kg BW),continuous lavage for SPF kunming mice to 30 d,to dissolve the MDA content in blood and dissolving blood gsh-px activity,content of GSH in liver homogenate as evaluation index,each dose group compared with negative control group and solvent control group respectively.The results showed that the reduced GSH content in the high-dose group was significantly higher in 10%of the hepatic homogenate,and the content of MDA in 1%dissolved blood was significantly decreased,and the gsh-px activity in 1%dissolved blood was significantly increased.The experiment shows that the formula with the extract of the seed extract is antioxidative.

seabuckthorn seed extract；antioxidant；seabuckthorn procyanidins

TS225.1+9

A

1673-6044（2017）02-0019-03

10.3969/j.issn.1673-6044.2017.02.007

*譚志超，男，1979年出生，2003年畢業于內蒙古農業大學生物技術專業，質量工程師。

2017-05-31