翡翠貽貝多糖對宮頸癌細胞凋亡及miRNA-34a表達的影響

鄭州市婦幼保健院（450052）李幔

微小RNA（miRNA）是非編碼單鏈RNA分子，可對各個層面的基因活動進行調(diào)節(jié)。隨著醫(yī)學(xué)研究的進一步發(fā)展，人們發(fā)現(xiàn)miRNA對細胞凋亡具有明顯的調(diào)控作用。miRNA通過對癌基因、抑癌基因表達的調(diào)節(jié)，調(diào)控癌細胞的細胞生物程序，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起著至關(guān)重要的作用。腫瘤的發(fā)生及細胞增殖與miRNA-34a表達之間存在聯(lián)系，說明miRNA-34a激活細胞凋亡，抑制細胞增殖具有重要的臨床意義[1]。本研究以人宮頸癌細胞株HeLa為材料，通過分析翡翠貽貝多糖對其細胞凋亡及miRNA-34a表達的影響，對翡翠貽貝多糖調(diào)控miRNA-34a表達、誘導(dǎo)宮頸癌細胞凋亡的作用進行探究，以期為翡翠貽貝藥用價值的開發(fā)提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料 人宮頸癌細胞株HeLa（上海酶研究生物科技有限公司）；DMEM（南京科佰生物科技有限公司），小牛血清（北京生東科技有限公司），胰酶細胞消化液及細胞凋亡檢測試劑盒（碧云天生物技術(shù)研究所），miRNA-34a引物（上海吉瑪試劑公司），miRNA熒光定量PCR檢測試劑盒（廣州健侖生物科技有限公司），翡翠貽貝多糖（廣東醫(yī)學(xué)院生物化學(xué)與分子生物學(xué)研究所）；實時熒光定量PCR儀（上海宏石醫(yī)療科技有限公司），F(xiàn)ACSCanto II流式細胞儀（上海碧迪醫(yī)療器械有限公司），XD-101型倒置式生物顯微鏡（武漢歐卡科技有限公司），Synergy2多功能酶標(biāo)儀（美國伯騰），CO2培養(yǎng)箱（立德泰勀科學(xué)儀器有限公司）。

1.2 方法 制備含10%小牛血清的DMEM培養(yǎng)液，加入人宮頸癌細胞，溫度37℃，飽和濕度，在5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。利用0.25%胰蛋白酶消化對數(shù)生長期的宮頸癌細胞，重懸，加入12孔板，5×104個細胞/孔，1mL細胞懸液/孔，設(shè)立實驗組和對照組，4孔/組。細胞貼壁，對照組添加細胞培養(yǎng)液50μL；實驗組添加翡翠貽貝多糖藥液50μL，濃度為100mg/L。培養(yǎng)48h，按照試劑盒說明書進行流式細胞術(shù)，分析細胞的凋亡情況；參照miRNA檢測試劑盒說明書，采用實時定量PCR法對miRNA-34a表達進行檢測。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS18.0進行統(tǒng)計處理，計數(shù)數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差，采用t進行檢驗，P＜0.05說明差異比較具有顯著性。

2 結(jié)果

實驗結(jié)果顯示：給藥48h后，實驗組宮頸癌細胞凋亡率高于對照組，miRNA-34a表達相對值高于對照組，兩組差異比較具有顯著性（P＜0.05），見附表。提示翡翠貽貝多糖能夠調(diào)控宮頸癌細胞凋亡率和miRNA-34a表達升高。

3 討論

翡翠貽貝的藥用和食療功效十分顯著。古書記載[2]：翡翠貽貝能補五臟，理腰腳氣，除腹中冷氣，益陽事，消宿食。對于腎陽虛弱、肝腎不足、女子月經(jīng)不調(diào)、動脈血管硬化等疾病，貽貝均有一定療效。翡翠貽貝多糖是翡翠貽貝肉制備所得的一種多糖成分。研究表明，提取自貽貝的活性成分具有抗腫瘤、抗炎、抗菌、抗氧化等作用。現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，翡翠貽貝多糖對宮頸癌腫瘤細胞生長具有一定的抑制作用；同時，在荷瘤模型小鼠的研究中[3]，翡翠貽貝多糖能夠提高T淋巴細胞增殖和IL-2分泌，對其免疫功能具有改善作用。相關(guān)報道指出[4]，多糖的抗腫瘤作用主要包括兩類：①多糖可以直接殺死腫瘤細胞，在腫瘤細胞膜特異性作用、腫瘤細胞超微結(jié)構(gòu)及誘導(dǎo)細胞分化和凋亡方面均有影響；②多糖具有增強機體免疫功能的作用，能夠間接殺死或抑制腫瘤細胞，是一種生物免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)劑。翡翠貽貝多糖對腫瘤細胞活性具有抑制作用，對免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)及抗腫瘤作用進行研究，對翡翠貽貝藥用價值的開發(fā)具有重要意義。此次就翡翠貽貝多糖影響宮頸癌細胞凋亡及miRNA-34a表達的作用進行探究。

宮頸癌是當(dāng)前臨床常見的惡性腫瘤疾病，我國每年新發(fā)病例達到13萬人以上，其中死于宮頸癌的女性就有3萬之多，對婦女的生活健康造成嚴(yán)重威脅。對宮頸癌的藥理機制進行研究，也是臨床開展宮頸癌診療工作的重要內(nèi)容。在不同類型的腫瘤中，均存在miRNA-34a表達異常情況。有研究發(fā)現(xiàn)[5]，通過靶向c-Myc癌基因，miRNA-34a可對腎癌細胞的惡變進行有效抑制。在神經(jīng)細胞瘤的一項研究中[6]，學(xué)者發(fā)現(xiàn)miRNA-34a基因缺失明顯，而提高miRNA-34a表達可以激活細胞凋亡途徑，對腫瘤細胞增殖進行抑制，提示miRNA-34a具有激活細胞凋亡、抑制細胞增殖的作用。目前，翡翠貽貝多糖抑制腫瘤細胞生長的分子機制尚不明確，為進一步探究翡翠貽貝多糖對腫瘤細胞凋亡及miRNA-34a表達的影響，本研究通過實驗對該題組進行研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)給藥48h后，實驗組宮頸癌細胞凋亡率及miRNA-34a表達相對值均高于對照組（P＜0.05）。提示miRNA-34a低表達或過表達在促進宮頸癌細胞增殖和抑制宮頸癌細胞增殖方面具有明顯效果，在宮頸癌細胞生長中，miRNA-34a調(diào)控作用類似于抑癌基因，其宮頸癌細胞增殖的調(diào)控表現(xiàn)為負調(diào)控。所以，miRNA-34a表達的調(diào)控，可作為調(diào)控腫瘤細胞增殖與凋亡的新靶點。本次實驗結(jié)果表明，在翡翠貽貝多糖作用下，宮頸癌細胞凋亡率和miRNA-34a表達相對值均明顯升高，說明miRNA-34a可作為翡翠貽貝多糖調(diào)控腫瘤細胞凋亡的藥理靶點。

附表 兩組宮頸癌細胞凋亡率和miRNA-34a表達相對值的比較

綜上所述，翡翠貽貝多糖對miRNA-34a表達進行調(diào)控，可以誘導(dǎo)宮頸癌細胞凋亡。因此，翡翠貽貝多糖的抗腫瘤作用突出，具有較高的藥用價值，值得進一步研究和臨床應(yīng)用。