H2AFZ、MLF1IP和NEK2在乳腺癌不同亞型中的表達(dá)差異與預(yù)后相關(guān)性分析

孫天一，章 程，，壽成超（北京大學(xué)臨床腫瘤學(xué)院：生化與分子生物學(xué)研究室，消化腫瘤內(nèi)科，北京004）

·論著·

H2AFZ、MLF1IP和NEK2在乳腺癌不同亞型中的表達(dá)差異與預(yù)后相關(guān)性分析

孫天一1，章 程1，2，壽成超1（北京大學(xué)臨床腫瘤學(xué)院：1生化與分子生物學(xué)研究室，2消化腫瘤內(nèi)科，北京100142）

目的：尋找與乳腺癌分型和預(yù)后相關(guān)的全新分子標(biāo)志物，為乳腺癌的診療提供依據(jù)．方法：本研究借助生物信息學(xué)手段和統(tǒng)計(jì)學(xué)方法對(duì)多個(gè)來(lái)自腫瘤公共數(shù)據(jù)庫(kù)的大樣本數(shù)據(jù)進(jìn)行了深度分析．結(jié)果：H2AFZ、MLF1IP和NEK2為乳腺癌不利預(yù)后因子，三者皆與乳腺癌患者ER／PR／HER2表達(dá)水平具有顯著的相關(guān)性．H2AFZ、MLF1IP和NEK2的mRNA水平在ER和PR陽(yáng)性乳腺癌中低表達(dá)，而在HER2陽(yáng)性乳腺癌中高表達(dá)．此外，H2AFZ、MLF1IP和NEK2在乳腺癌Luminal A亞型中的表達(dá)水平較低，而且與預(yù)后負(fù)相關(guān)，而在其他亞型中水平較高，與預(yù)后相關(guān)性不大．結(jié)論：作為不利預(yù)后因子，H2AFZ、MLF1IP和NEK2在乳腺癌患者不同分型人群中的表達(dá)差異可能是造成乳腺癌各分型惡性程度和預(yù)后差異的原因之一．

乳腺癌；大樣本數(shù)據(jù)分析；分子分型；預(yù)后相關(guān)基因

0 引言

乳腺癌是全球范圍內(nèi)女性最常見(jiàn)、死亡人數(shù)最多的腫瘤之一［1］．由于早期診斷以及有效治療方法的發(fā)展，乳腺癌的發(fā)病率和死亡率在二十余年來(lái)逐步降低，患者的生存期也在逐漸延長(zhǎng)［2］．然而，乳腺癌仍是導(dǎo)致女性因患腫瘤死亡的主要原因，防治任務(wù)艱巨．

目前被廣泛接受的乳腺癌治療標(biāo)準(zhǔn)依托分子病理分型，根據(jù)雌激素表達(dá)情況、腫瘤大小、淋巴結(jié)節(jié)、年齡和腫瘤分期等臨床和病理因素來(lái)判定患者能否適用激素治療，或是采用化學(xué)療法［2］．乳腺癌早已不再被視為單一的疾病，而是一個(gè)多方面、復(fù)雜表征的贅生物和腫瘤細(xì)胞集合，由來(lái)自不同亞型的細(xì)胞群組成，呈現(xiàn)出多種多樣的臨床、病理和分子特征以及不同的預(yù)后預(yù)期，因此也需要據(jù)此選擇適當(dāng)?shù)闹委煼桨福?］．乳腺癌的一大特征是雌激素受體（estrogen receptor， ER）、孕激素受體（progesterone receptor，PR）和人表皮生長(zhǎng)因子受體 2（human epidermal growth factor receptor 2，HER2）的表達(dá)．根據(jù)現(xiàn)行的臨床標(biāo)準(zhǔn)，除與正常乳腺癌相似的正常乳腺樣型（Normal?like）外，乳腺癌可被分為4種分子亞型：管腔A 型（Luminal A，ER＋和／或 PR＋、HER2－）、管腔B 型（Luminal B，ER＋和／或 PR＋、HER2＋）、HER2 過(guò)表達(dá)型（ER－和／或 PR－、HER2＋）和基底細(xì)胞樣亞型（Basal?like，簡(jiǎn)稱(chēng) Basal，ER－、PR－、HER2－）［3－4］．雌激素受體和孕激素受體是乳腺癌最重要的預(yù)后指標(biāo)之一，對(duì)輔助、新輔助治療及晚期乳腺癌激素治療的效果都有重要指示作用．雌激素受體陽(yáng)性（ER＋）的乳腺癌主要分為L(zhǎng)uminal A和Luminal B型，其中Lu?minal A型較B型的ER相關(guān)基因表達(dá)較高，但是增殖性基因表達(dá)較低．

雌激素受體陰性（ER－）的乳腺癌主要有HER2＋和Basal型，此兩種亞型比Luminal A的惡性程度高，更可能進(jìn)入3期（grade 3）；而Luminal A較HER2＋型和 Basal型有更好的預(yù)后，然而復(fù)發(fā)率較高［5－6］．

近年來(lái)，隨著以二代測(cè)序?yàn)榇淼母咄可飳W(xué)研究手段和生物信息學(xué)手段的進(jìn)步，腫瘤相關(guān)領(lǐng)域的研究進(jìn)展迅速，大量腫瘤標(biāo)志物和潛在靶點(diǎn)基因進(jìn)入人們的視野［7］．雖然關(guān)于各類(lèi)腫瘤最終的預(yù)后及預(yù)測(cè)分析的共識(shí)尚未達(dá)成，但是利用生物標(biāo)志物對(duì)腫瘤進(jìn)行預(yù)測(cè)和鑒定，并建立嚴(yán)格可重復(fù)的的鑒定體系和治療方法這一概念已經(jīng)初露崢嶸，并有望成為未來(lái)腫瘤防治的重要方向［6，8－9］．本研究旨在通過(guò)對(duì)乳腺癌患者大樣本數(shù)據(jù)的挖掘，尋找與ER／PR／HER2表達(dá)情況和乳腺癌分子分型相關(guān)的全新腫瘤標(biāo)志物，為乳腺癌的防治提供新思路．

1 材料和方法

1．1 數(shù)據(jù)來(lái)源 本研究中采用的數(shù)據(jù)集皆來(lái)自于GEO （Gene Expression Omnibus， https：／／www．ncbi．nlm．nih．gov／geo／） 和 NKI （The Netherlands Cancer Institute， http：／／www．nki．nl） 公開(kāi)數(shù)據(jù)庫(kù)，數(shù)據(jù)的使用遵循相關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)的流程和隱私保護(hù)規(guī)定．此外，本研究還使用了 Kmplotter分析工具（http：／／kmplot．com／analysis／）進(jìn)行 Kaplan?Meier生存分析［10］．

1．2 數(shù)據(jù)集的處理和目的基因的挑選 各個(gè)數(shù)據(jù)集中的患者根據(jù)免疫組化結(jié)果和臨床分子病理分型結(jié)果進(jìn)行區(qū)分，其基因表達(dá)譜數(shù)據(jù)和臨床信息借助Excel軟件整合匹配，并使用 SPSS17．0和 GraphPad Prism 5．0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析和成圖．對(duì)于每個(gè)基因，取其所有探針的均值作為該基因的表達(dá)值．根據(jù)目的基因的表達(dá)值，依照中位數(shù)原理將患者劃分為高表達(dá)組（高于中位數(shù)）和低表達(dá)（低于中位數(shù)）組，隨后對(duì)各組進(jìn)行分析．

1．3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 分組之間表達(dá)差異的統(tǒng)計(jì)采用student?t test， 由 SPSS17．0 完成．目的基因之間相關(guān)性的分析采用Pearson Correlation分析．某因素與預(yù)后關(guān)聯(lián)的判斷采用 Kaplan?Meier分析，匹配 Log?rank檢驗(yàn)．對(duì)于所有的統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，P＜0．05被視為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義．

2 結(jié)果

2．1 ER／PR／HER2表達(dá)差異及不同分型的乳腺癌預(yù)后比較 現(xiàn)有的諸多報(bào)道已經(jīng)提示，乳腺癌中雌激素受體、孕激素受體和人表皮生長(zhǎng)因子受體2的表達(dá)水平與患者預(yù)后及臨床預(yù)期表征有著密切的聯(lián)系．同時(shí)，不同乳腺癌亞型的預(yù)后水平具有顯著的差異，其中HER2型和Basal型與其他亞型相比預(yù)后較差．為驗(yàn)證使用的數(shù)據(jù)集能否反映真實(shí)的臨床情況，我們對(duì)來(lái)自GEO的大樣本乳腺癌 GSE47561（n＝1750）［11］數(shù)據(jù)和來(lái)自NKI的大樣本乳腺癌數(shù)據(jù)集（n＝295）［7］按照患者分子分型標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了 Kaplan?Meier生存分析和Log?rank檢驗(yàn)．結(jié)果顯示，Luminal A型患者具有最好的預(yù)后，包括無(wú)病生存（disease?free survival， DFS），無(wú)遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移生存（distant metasta?sis free survival， DMFS）和總生存（overall survival，OS），與臨床共識(shí)相吻合（圖1A）．

此外，本研究采用合并的多個(gè)大樣本乳腺癌數(shù)據(jù)庫(kù)數(shù)據(jù)（包括 E?MTAB?365，E?TABM?43， GSE11121，GSE12093，GSE12276，GSE1456，GSE16391，GSE16446，GSE16716，GSE17705， GSE17907， GSE18728， GSE19615，GSE20194， GSE20271， GSE2034， GSE20685， GSE20711，GSE21653， GSE2603， GSE26971， GSE2990， GSE31448，GSE31519， GSE32646， GSE3494， GSE37946， GSE41998，GSE42568， GSE45255， GSE4611， GSE3527， GSE6532，GSE7390，GSE9195， n ＝ 3951， http：／／kmplot．com），對(duì)乳腺癌ER／PR／HER2表達(dá)水平差異的患者預(yù)后進(jìn)行了Kaplan?Meier生存分析和 Log?Rank 檢驗(yàn)，預(yù)后指標(biāo)包括 OS、DMFS和無(wú)復(fù)發(fā)生存（recurrence?free survival，RFS）．ER陽(yáng)性的患者和PR陽(yáng)性的患者具有較好的預(yù)后，而HER2陽(yáng)性的患者預(yù)后較差，這一系列結(jié)果與臨床共識(shí)和文獻(xiàn)報(bào)道相吻合，證明使用的數(shù)據(jù)能夠真實(shí)可靠地反映臨床情況［4－5］（圖 1B）．

圖1 數(shù)據(jù)檢驗(yàn)：ER／PR／HER2表達(dá)差異及不同分型的乳腺癌預(yù)后比較

2．2 H2AFZ、MLF1IP和NEK2的表達(dá)水平與乳腺癌ER、PR和HER2水平相關(guān) 本研究對(duì)乳腺癌數(shù)據(jù)集GSE47561進(jìn)行了表達(dá)譜數(shù)據(jù)和患者臨床信息的匹配，并借助 SPSS17．0 和 GraphPad Prism 5．0 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，尋找不同臨床表征患者之間表達(dá)差異的基因．其中，H2AFZ（H2A histone family， member Z）、MLF1IP（myeloid leukemia factor 1?interacting protein）和NEK2（NIMA related kinase 2）三個(gè)分子在雌激素受體陰性（ER－）時(shí)表達(dá)顯著高于雌激素受體陽(yáng)性組（ER＋）；在孕激素受體陰性組（PR－）表達(dá)顯著高于孕激素受體陽(yáng)性組（PR＋）；在人表皮生長(zhǎng)因子受體2陽(yáng)性組（HER2＋）表達(dá)顯著高于其陰性組（HER2－）（圖2A）．同時(shí)，在該數(shù)據(jù)集中對(duì)這三種分子在五種不同分子分型的乳腺癌中表達(dá)情況的分析發(fā)現(xiàn)，在預(yù)后較好的 Normal?like和 Luminal A亞型中，H2AFZ、MLF1IP和NEK2三個(gè)分子的表達(dá)水平較低，在預(yù)后較差的三個(gè)亞型中三個(gè)分子的表達(dá)水平較高（圖 2B）．

圖2 H2AFZ、MLF1IP和NEK2的表達(dá)水平在不同乳腺癌亞型中的分布

2．3 H2AFZ、MLF1IP 和 NEK2 與 ER、PR 和HER2表達(dá)水平線性相關(guān) 為進(jìn)一步驗(yàn)證H2AFZ、MLF1IP和NEK2在乳腺癌中表達(dá)水平的趨勢(shì)，本研究在GSE47561數(shù)據(jù)集中對(duì)此三個(gè)分子和ER／PR／HER2表達(dá)水平的關(guān)系進(jìn)行了Pearson Correlation分析．分析結(jié)果顯示，H2AFZ、MLF1IP和 NEK2的mRNA 水平皆與 ER（P＜0．0001）和 PR （P＝0．0036，P＝0．0074，P＜0．0001） 水平呈顯著負(fù)向相關(guān)，而與HER2 水平 （P＜0．0001，P＝0．0035，P＝0．0022） 顯著正向相關(guān)，提示 H2AFZ、MLF1IP和 NEK2的表達(dá)水平可能與 ER／PR表達(dá)水平存在拮抗作用，而與HER2表達(dá)水平存在促進(jìn)作用（圖3）．

圖3 GSE47561數(shù)據(jù)集中，H2AFZ、MLF1IP和 NEK2與ER（ESR1）、PR（PGR）和 HER2 （ERBB2） 表達(dá)水平的相關(guān)性分析

2．4 H2AFZ、MLF1IP和NEK2為乳腺癌潛在的不利預(yù)后因子 本研究在合并多個(gè)乳腺癌數(shù)據(jù)后的大樣本人群中 （n＝3951）對(duì) H2AFZ、MLF1IP和 NEK2與患者預(yù)后（OS， DMFS）進(jìn)行 Kaplan?Meier生存分析和Log?Rank檢驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)這三個(gè)分子的高表達(dá)與OS和DMFS呈顯著負(fù)相關(guān)（圖4A）．

進(jìn)一步根據(jù) ER／PR／HER2表達(dá)陰陽(yáng)性（－／＋）情況分層分析發(fā)現(xiàn)，這三個(gè)分子在ER＋患者中均與OS和DMFS顯著負(fù)相關(guān)，而在 ER－患者中與 OS和DMFS的相關(guān)性并不顯著（圖4B）；H2AFZ和MLF1IP分子在PR＋患者中與OS負(fù)相關(guān)、與DMFS不相關(guān)，而在PR－患者中與OS不相關(guān)，同時(shí)NEK2也僅在PR＋患者中體現(xiàn)出與預(yù)后（主要為DMFS）負(fù)相關(guān)的趨勢(shì)（圖4C）；在HER2－患者中三個(gè)分子與OS顯著負(fù)相關(guān)，同時(shí) H2AFZ、NEK2與 DMFS顯著負(fù)相關(guān)，而在HER2＋的患者中只有 MLF1IP與DMFS負(fù)相關(guān)（圖4D）．這些結(jié)果提示，H2AFZ、MLF1IP和 NEK2皆為乳腺癌不利預(yù)后因子，同時(shí)它們對(duì)腫瘤惡性程度的促進(jìn)和患者預(yù)后的不利影響很可能受到較高ER／PR表達(dá)的拮抗和較高HER2表達(dá)的促進(jìn)．

2．5 H2AFZ、MLF1IP和NEK2對(duì)乳腺癌預(yù)后的影響限于中低分級(jí)患者 本研究在合并多個(gè)乳癌數(shù)據(jù)后的大樣本人群中對(duì)H2AFZ、MLF1IP和NEK2與淋巴結(jié)（LN）轉(zhuǎn)移和分級(jí)（grade）的關(guān)系進(jìn)行了研究，結(jié)果表明該三個(gè)分子的表達(dá)無(wú)論是在LN－還是在LN＋的乳腺癌患者中均與DMFS負(fù)相關(guān)，而與OS的負(fù)相關(guān)性限于在LN－的患者中（圖5A）．

圖4 H2AFZ、MLF1IP和NEK2與不同分子亞型乳腺癌的預(yù)后分析

隨后，本研究對(duì)不同分期的患者進(jìn)行了生存分析（OS，DMFS）．在 grade1患者中，MLF1IP 的表達(dá)與 OS和DMFS皆負(fù)相關(guān)，而盡管P值略大，H2AFZ也展現(xiàn)出了與預(yù)后負(fù)相關(guān)的趨勢(shì)；在grade2患者中，這三個(gè)分子的表達(dá)均與 DMFS負(fù)相關(guān)，同時(shí) MLF1IP和NEK2展現(xiàn)出與預(yù)后的負(fù)相關(guān)趨勢(shì)；在grade3患者中，三個(gè)分子的水平與OS皆不相關(guān)，僅有MLF1IP的表達(dá)與DMFS負(fù)相關(guān)．考慮到grade1患者較少的數(shù)量影響了統(tǒng)計(jì)結(jié)果的顯著性，這三個(gè)分子對(duì)乳腺癌預(yù)后的不利影響主要限于中低分級(jí)（grade2及以下）的患者（圖5B）．

圖5 H2AFZ、MLF1IP和NEK2與乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 （LN）及分級(jí) （grade）的關(guān)系

2．6 H2AFZ、MLF1IP 和 NEK2在 Luminal A 亞型中與預(yù)后負(fù)相關(guān)，在其他亞型中與預(yù)后的相關(guān)性較低

將合并多個(gè)乳癌數(shù)據(jù)后的大樣本人群按照乳腺癌分子分型標(biāo)準(zhǔn)劃分為 Basal／HER2＋／Luminal A 和Luminal B型，隨后分析 H2AFZ、MLF1IP和 NEK2在各個(gè)亞型中與預(yù)后的關(guān)系．Luminal A亞型的乳腺癌中，H2AFZ、MLF1IP和NEK2均與OS和DMFS負(fù)相關(guān)，而在其他情況下只有NEK2在Luminal B亞型的乳腺癌中與DMFS負(fù)相關(guān)，其余情況下三者與其余亞型的預(yù)后關(guān)聯(lián)不大（圖6）．

圖6 在合并多個(gè)乳癌數(shù)據(jù)后的大樣本人群中（如前所述，來(lái)自http：／／kmplot．com，n＝3951）對(duì)H2AFZ、MLF1IP和NEK2與乳腺癌多種亞型進(jìn)行的生存分析

在前面的分析中，本研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn) H2AFZ、MLF1IP 和 NEK2僅在 ER＋／PR＋／HER2－或中低分化的患者中與預(yù)后相關(guān)（圖4、5），該類(lèi)型的患者對(duì)應(yīng)Luminal A型．根據(jù)前期分析，由于 H2AFZ、MLF1IP和NEK2與ER／PR水平呈負(fù)相關(guān)，與HER2＋水平呈正相關(guān)，故Luminal A型患者本身表達(dá)這三個(gè)分子的水平較低（圖2），因此Luminal A亞型患者較好的預(yù)后可能與H2AFZ、MLF1IP和NEK2的表達(dá)量低有關(guān)．若H2AFZ、MLF1IP和NEK2中的一個(gè)或多個(gè)水平升高，便可能打破平衡，導(dǎo)致相關(guān)腫瘤信號(hào)通路激活，Luminal A患者預(yù)后變差．而在Luminal B、Basal或HER2＋型患者中，H2AFZ、MLF1IP和NEK2表達(dá)維持在較高水平，由此可能促進(jìn)腫瘤惡性進(jìn)展，故此幾類(lèi)患者的預(yù)后明顯劣于Luminal A型．

3 討論

長(zhǎng)期以來(lái)，乳腺癌ER、PR和HER2的表達(dá)區(qū)別是影響患者預(yù)后最主要的原因之一［3］．根據(jù)分子及病理指標(biāo)進(jìn)行分型，是乳腺癌診斷和治療中必不可少的關(guān)鍵環(huán)節(jié)．本研究借助生物信息分析手段，對(duì)大樣本乳腺癌表達(dá)譜數(shù)據(jù)和臨床信息進(jìn)行了分析，挖掘得到與預(yù)后負(fù)相關(guān)的H2AFZ、MLF1IP和NEK2基因．作為不利預(yù)后因子，H2AFZ、MLF1IP和NEK2與ER／PR的表達(dá)水平相反，與HER2的水平升高一致，同時(shí)在Luminal A型乳腺癌中表達(dá)量最低，在其余亞型中表達(dá)量較高，這些表達(dá)差異很可能與乳腺癌不同亞型患者的預(yù)后密切相關(guān)．我們猜想，H2AFZ、MLF1IP和NEK2在Luminal A型患者中的特異性低表達(dá)可能為該種亞型預(yù)后較好的因素之一．

H2AFZ為細(xì)胞周期相關(guān)基因，參與維持異染色質(zhì)和常染色質(zhì)水平，與哺乳動(dòng)物干細(xì)胞的生成和分化有關(guān)［12］，常受到甲基化、乙?；⒎核鼗刃揎椀恼{(diào)控［12］．Járez?Velázquez等［13］指出其高表達(dá)可能預(yù)示著兒童急性淋巴母細(xì)胞白血病（acute lymphoblastic leukemia）較短的預(yù)后和較高的復(fù)發(fā)率，而B(niǎo)aptista等［14］發(fā)現(xiàn)其在前列腺癌中受到 sirtuin 1的調(diào)控．H2AFZ亦可通過(guò)加速細(xì)胞周期進(jìn)程以及調(diào)節(jié)EMT相關(guān)蛋白來(lái)參與肝癌的發(fā)生［15］，同時(shí)，一些組學(xué)研究篩查也發(fā)現(xiàn)H2AFZ是鼻咽癌等腫瘤潛在的分子靶向標(biāo)志物［16－17］，但其與乳腺癌的關(guān)系研究較少．我們知道，ER作為一種配體依賴的轉(zhuǎn)錄因子，可以協(xié)同輔調(diào)節(jié)因子來(lái)調(diào)節(jié)靶基因的轉(zhuǎn)錄激活［18］．有研究表明，H2AFZ可以作為核小體的組成部分參與到ERɑ靶基因的轉(zhuǎn)錄激活過(guò)程中［19］．近期研究也表明，H2AFZ是通過(guò)使eRNA與增強(qiáng)子結(jié)合并招募RNA聚合酶2來(lái)建立并維持穩(wěn)定的染色質(zhì)環(huán)境，這對(duì)提高ERɑ靶基因的增強(qiáng)子活性至關(guān)重要［20］．我們猜想或許是H2AFZ在ER陽(yáng)性的乳腺癌患者中充當(dāng)不利預(yù)后因子的原因之一．

MLF1IP又名CENPU，于2003年被發(fā)現(xiàn)，是潛在的轉(zhuǎn)錄抑制基因［21］，其高表達(dá)可能與急性粒細(xì)胞白血?。ˋML）、惡性膠質(zhì)瘤的進(jìn)展相關(guān)［22］．近期研究顯示，該分子與著絲粒和微管的連接及染色體的分離相關(guān)［23］，且能夠促進(jìn)小鼠紅細(xì)胞的增殖加速［24］，為肺癌和前列腺癌中潛在的腫瘤相關(guān)基因［25－26］，但其與腫瘤，尤其是乳腺癌的相關(guān)性至今仍報(bào)道較少．

NEK2為有絲分裂相關(guān)的絲／蘇氨酸激酶，在有絲分裂S期表達(dá)水平升高，并在G2期達(dá)到峰值［27］．NEK2定位于中心體，在許多乳腺癌細(xì)胞中高表達(dá)，同時(shí)在侵襲性乳腺癌中上調(diào)，可與CDK4協(xié)同促進(jìn)HER2＋乳腺癌的細(xì)胞核和中心體擴(kuò)大，導(dǎo)致細(xì)胞多核型［28－29］．在預(yù)后較差的乳腺癌 Basal型和 HER2 型中，均存在由中心體擴(kuò)大引起的染色體不穩(wěn)定現(xiàn)象［30］，該現(xiàn)象可引起腫瘤細(xì)胞的增殖增加、易侵襲、轉(zhuǎn)移等表現(xiàn)變化［31－32］．另外，NEK2 在乳腺癌 IDC（invasive ductal carcinoma）及 DCIS（concomitant duc?tal carcinoma）的細(xì)胞漿中表達(dá)升高，其漿表達(dá)與組織學(xué)分級(jí)（histological grade）和腫瘤大小有關(guān)［33］．在經(jīng)它莫西芬治療的患者中，NEK2的表達(dá)與無(wú)復(fù)發(fā)和無(wú)遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移生存負(fù)相關(guān)，其表達(dá)往往預(yù)示著較差的預(yù)后［33］．

考慮到H2AFZ、MLF1IP和NEK2皆在細(xì)胞生命活動(dòng)，尤其是在有絲分裂的調(diào)控中具有重要的作用，它們?nèi)邔?duì)乳腺癌進(jìn)展的推動(dòng)很可能來(lái)源于對(duì)細(xì)胞增殖的促進(jìn)和對(duì)細(xì)胞周期的影響．細(xì)胞周期調(diào)控異常會(huì)引起HER2依賴的乳腺癌的耐藥現(xiàn)象［34］，這很可能是H2AFZ，MLF1IP和NEK2作為乳腺癌不利預(yù)后因子的原因之一．另外，MLF1IP和NEK2都可引起染色體不穩(wěn)定現(xiàn)象［23，29］，因而可以認(rèn)為這兩個(gè)分子會(huì)促進(jìn)乳腺癌的惡性表型．實(shí)驗(yàn)結(jié)果也顯示，H2AFZ、MLF1IP和NEK2的表達(dá)水平可能與ER／PR表達(dá)水平存在拮抗作用，而與HER2表達(dá)水平存在促進(jìn)作用．又因?yàn)槠毡檎J(rèn)為ER／PR是乳腺癌的有利因子，而HER2的表達(dá)與預(yù)后負(fù)相關(guān)［5］，那么此三者的高表達(dá)就會(huì)對(duì)腫瘤惡性起到持續(xù)的貢獻(xiàn)．所以我們猜想，正是由于H2AFZ、MLF1IP和NEK2在不同分子病理特征的乳腺癌患者中存在表達(dá)差異，導(dǎo)致了相應(yīng)亞型的患者預(yù)后出現(xiàn)區(qū)別．然而，H2AFZ、MLF1IP和NEK2在ER、PR陽(yáng)性或HER2陰性患者中體現(xiàn)出的低表達(dá)水平究竟源于何種機(jī)理，還有待于進(jìn)一步的研究．同時(shí)，H2AFZ、MLF1IP和NEK2的表達(dá)水平差異可以作為乳腺癌患者病理檢測(cè)的重要依據(jù)，為患者激素治療／Herceptin靶向治療方案的選擇和預(yù)后／療效評(píng)估提供指導(dǎo)．

［1］Chu DZ．Re： Breast cancer incidence，1980－2006： combined roles of menopausal hormone therapy， screening mammography， and estrogen receptor status［J］．J Natl Cancer Inst，2008，100（8）：596－597．

［2］Ravdin PM， Cronin KA， Howlader N， et al．The decrease in breast?cancer incidence in 2003 in the United States［J］．N Engl J Med，2007，356（16）：1670－1674．

［3］Brenton JD， Carey LA， Ahmed AA， et al．Molecular classification and molecular forecasting of breast cancer： ready for clinical application［J］．J Clin Oncol，2005，23（29）：7350－7360．

［4］S?rlie T， Tibshirani R， Parker J， et al．Repeated observation of breast tumor subtypes in independent gene expression data sets［J］．Proc Natl Acad Sci U S A，2003，100（14）：8418－8423．

［5］Perou CM， S?rlie T， Eisen MB， et al．Molecular portraits of human breast tumours［J］．Nature，2000，406（6797）：747－752．

［6］Sotiriou C，Neo SY，McShane LM，et al．Breast cancer classification and prognosis based on gene expression profiles from a population?based study［J］．Proc Natl Acad Sci U S A，2003，100（18）：10393－10398．

［7］van de Vijver MJ， He YD， van't Veer LJ， et al．A gene?expression signature as a predictor of survival in breast cancer［J］．N Engl J Med，2002，347（25）：1999－2009．

［8］Lauss M， Kriegner A， Vierlinger K， et al．Consensus genes of the literature to predict breast cancer recurrence［J］．Breast Cancer Res Treat，2008，110（2）：235－244．

［9］S?rlie T， Perou CM， Fan C， et al．Gene expression profiles do not consistently predict the clinical treatment response in locally advanced breast cancer［J］．Mol Cancer Ther，2006，5（11）：2914－2918．

［10］Gy?rffy B， Lanczky A， Eklund AC， et al．An online survival analysis tool to rapidly assess the effect of 22，277 genes on breast cancerprognosis using microarray data of 1，809 patients［J］．Breast Cancer Res Treat，2010，123（3）：725－731．

［11］Ur?Rehman S， Gao Q， Mitsopoulos C， et al．ROCK： a resource for integrative breast cancer data analysis［J］．Breast Cancer Res Treat，2013，139（3）：907－921．

［12］Faast R， Thonglairoam V， Schulz TC， et al．Histone variant H2A．Z is required for early mammalian development［J］．Curr Biol，2001，11（15）：1183－1187．

［13］Juárez?Velázquez R， Reyes?León A， Salas?Labadia C， et al．Signifi?cance of CASP8AP2 and H2AFZ expression in survival and risk of relapse in children with acute lymphoblastic leukemia［J］．Leuk Lymphoma，2014，55（10）：2305－2311．

［14］Baptista T， Graca I， Sousa EJ， et al．Regulation of histone H2A．Z expression is mediated by sirtuin 1 in prostate cancer［J］．Oncotarget，2013，4（10）：1673－1685．

［15］Yang HD， Kim PJ， Eun JW， et al．Oncogenic potential of histone?variant H2A．Z．1 and its regulatory role in cell cycle and epithelial?mesenchymal transition in liver cancer［ J］．Oncotarget， 2016，7（10）：11412－11423．

［16］Xiong S， Wang Q， Zheng L， et al．Identification of candidate molec?ular markers of nasopharyngeal Carcinoma by tissue microarray and in situ hybridization［J］．Med Oncol，2011，28 Suppl 1：S341－S348．

［17］Rhodes DR， Yu J， Shanker K， et al．Large?scale meta?analysis of cancer microarray data identifies common transcriptional profiles of neoplastic transformation and progression［J］．Proc Natl Acad Sci U S A，2004，101（25）：9309－9314．

［18］Green KA， Carroll JS．Oestrogen?receptor?mediated transcription and the influence of co?factors and chromatin state［J］．Nat Rev Cancer，2007，7（9）：713－722．

［19］Gévry N， Hardy S， Jacques PE， et al．Histone H2A．Z is essential for estrogen receptor signaling［J］．Genes Dev，2009，23（13）：1522－1533．

［20］Brunelle M， Nordell Markovits A， Rodrigue S， et al．The histone variant H2A．Z is an important regulator of enhancer activity［J］．Nucleic Acids Res，2015，43（20）：9742－9756．

［21］Hanissian SH， Akbar U， Teng B， et al．cDNA cloning and charac?terization of a novel gene encoding the MLF1?interacting protein MLF1IP［J］．Oncogene，2004，23（20）：3700－3707．

［22］Hanissian SH， Teng B，Akbar U，et al．Regulation of myeloid leukemia factor?1 interacting protein （MLF1IP） expression in glioblastoma［J］．Brain Res，2005，1047（1）：56－64．

［23］Minoshima Y， Hori T， Okada M， et al．The constitutive centromere component CENP?50 is required for recovery from spindle damage［J］．Mol Cell Biol，2005，25（23）：10315－10328．

［24］Zhang T， Ma X， Li B， et al．A novel erythroid regulator MLF1IP promotes proliferation in mice by regulating cell cycle［J］．Blood，2015，126（23）：2835．

［25］Zhang L， Ji G， Shao Y， et al．MLF1 interacting protein： a potential gene therapy target for human prostate cancer［J］．Med Oncol，2015，32（2）：454．

［26］Lou Y， Li R， Liu J， et al．HSG?MLF1IP axis as potential targets for lung adenocarcinoma treatment［J］．J Clin Oncol，2015，33（15 suppl）：e13591－e．

［27］Fry AM，Meraldi P，Nigg EA．A centrosomal function for the human Nek2 protein kinase， a member of the NIMA family of cell cycle reg?ulators［J］．Embo J，1998，17（2）：470－481．

［28］Harrison Pitner MK， Saavedra HI．Cdk4 and nek2 signal binucleation and centrosome amplification in a her2＋ breast cancer model［J］．PLoS One，2013，8（6）：e65971．

［29］Wang S， Li W， Lv S， et al．Abnormal expression of Nek2 and β?catenin in breast carcinoma： clinicopathological correlations［J］．Histopathology，2011，59（4）：631－642．

［30］Fukasawa K．Oncogenes and tumour suppressors take on centrosomes［J］．Nat Rev Cancer，2007，7（12）：911－924．

［31］Roylance R， Endesfelder D， Gorman P， et al．Relationship of extreme chromosomal instability with long?term survival in a retro?spective analysis of primary breast cancer［J］．Cancer Epidemiol Biomarkers Prev，2011，20（10）：2183－2194．

［32］Pannu V， Mittal K， Cantuaria G， et al．Rampant centrosome ampli?fication underlies more aggressive disease course of triple negative breast cancers［J］．Oncotarget，2015， 6（12）：10487－10497．

［33］Marina M， Saavedra HI．Nek2 and Plk4： prognostic markers， drivers of breast tumorigenesis and drug resistance［J］．Front Biosci（Land?mark Ed），2014，19：352－365．

［34］Harari D， Yarden Y．Molecular mechanisms underlying ErbB2／HER2 action in breast cancer［J］．Oncogene，2000，19（53）：6102－6114．

Correlation analysis between expression levels of H2AFZ， MLF1IP and NEK2 in cross?sub?type diversity of breast cancer and prognosis

SUN Tian?Yi， ZHANG Cheng， SHOU Cheng?Chao
1Department of Biochemistry and Molecular Biology，2Department of Digestive Oncology， Peking University Cancer Hospital ＆ Insti?tute， Beijing 100142， China

AIM： To investigate potential biomarkers associated with breast cancer molecular subtyping and prognosis，and provide basis for diagnosis and treatment of breast cancer．METHODS：Large?sample data of breast cancer sets extracted from public online databases were analyzed by bioinformatics and statistics．RESULTS： H2AFZ， MLF1IP and NEK2 were negative prognostic factors of breast cancer，and they were significantly correlated with the expression level of ER／PR／HER2 in breast cancer patients．The mRNA of H2AFZ，MLF1IP，NEK2 showed low levels in ER and PR?positive breast cancer， while were highly expressed in HER2?positive breast cancer．The expression levels of H2AFZ，MLF1IP， NEK2 in Luminal A were lower， and were negatively correlatied with prognosis，meanwhile the expression levels of H2AFZ， MLF1IP， NEK2 in the other subtypes were higher， and the correlation between H2AFZ， MLF1IP， NEK2 and prognosis was not significant．CONCLUSION： As adverse?prognostic factors，the different expression of these molecules might be one of the reasons causing the malignant degree and prognostic differences among breast cancer subtyping．

breast cancer； large?sample data mining； molecular subtyping； prognosis?related genes

Q279

A

2095?6894（2017）09?23?09

2017－04－29；接受日期：2017－05－13

科技部973項(xiàng)目（2015CB553906）

孫天一．E?mail：styfirst＠ 163．com

壽成超．博士，教授，博導(dǎo)．E?mail：Chengchaoshou＠ outlook．com