2型糖尿病基因檢測與發(fā)病的關(guān)聯(lián)性研究

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2型糖尿病基因檢測與發(fā)病的關(guān)聯(lián)性研究

王雪濤，朱燕萍

目的評估2型糖尿病多種基因是否與糖尿病的發(fā)生有關(guān)聯(lián)。方法選取我院門診和住院病人260例，130例糖尿病人即為試驗組，男130例無糖尿病者為對照組。選取試驗組1例和對照組1例按年齡相近和性別相同配比，共配比130對，進行1∶1條件Logistic回歸分析。結(jié)果糖尿病基因檢測與糖尿病有關(guān)聯(lián)性(P<0.05)。結(jié)論糖尿病基因檢測陽性是糖尿病的危險因素，但關(guān)聯(lián)程度低于其他3個因素(糖尿病家族史，TGT或IFG史，肥胖)。

2型糖尿病；基因檢測；關(guān)聯(lián)性

2型糖尿病(T2DM)是在外在不良環(huán)境的因素下，具有遺傳易感性人群發(fā)生的血糖增高的一種異質(zhì)性疾病。在對2型糖尿病遺傳方式的研究過程中，發(fā)現(xiàn)疾病的發(fā)生可能與多個基因有關(guān)。隨著分子生物學(xué)和基因技術(shù)的快速發(fā)展，涉及的相關(guān)基因越來越多。有胰島素及相關(guān)受體基因，與肥胖和血脂相關(guān)基因，參與糖轉(zhuǎn)運和代謝的基因，與升糖激素有關(guān)的基因，免疫調(diào)節(jié)相關(guān)的基因等等。不同基因各有各的反映重點，而且單個基因與糖尿病發(fā)病的關(guān)聯(lián)性研究也很多，如果把多種基因作為一個整體來評估，是否更能關(guān)聯(lián)到糖尿病的發(fā)生？本試驗進行了此方面研究，進一步探討2型糖尿病在基因方面的發(fā)病機制。

1 資料與方法

1.1 研究對象 選取西山煤電有限公司職工總醫(yī)院門診和住院病人260例。年齡35歲～65歲，除外1型糖尿病、繼發(fā)性糖尿病、妊娠期糖尿病病人，除外糖尿病急性并發(fā)癥病人。

糖尿病和糖耐量減低(IGT)、空腹血糖調(diào)節(jié)受損(IFG)根據(jù)2010年中華醫(yī)學(xué)會糖尿病學(xué)分會糖尿病防治指南診斷[1]。肥胖采用中國成人超重和肥胖癥預(yù)防控制指南診斷：體重指數(shù)(BMI)≥28 kg/m2。糖尿病基因檢測報告采用聯(lián)合基因集團的報告。

1.2 分組方法 分為試驗組和對照組。內(nèi)分泌科住院病人130例，為糖尿病人即試驗組；另130例各科門診無糖尿病者為對照組 。兩組均抽血行糖尿病基因檢測，記錄年齡、性別、糖尿病家族史、身高、體重、IGT或IFG史。選取試驗組1例和對照組1例按年齡相近和性別相同配對，共配比130對。進行1∶1條件Logistic回歸分析。進行1∶1配對時年齡相差在1歲內(nèi)，嚴格篩選病例。

1.3 基因檢測步驟 試劑：10% Chelex-100、蛋白酶K(20 mg/mL)、ddH2O。檢測試劑盒：糖尿病及糖尿病并發(fā)癥相關(guān)單核苷酸多態(tài)性位點(SNP)中以下位點使用美國Life Tech.生產(chǎn)的Taqman探針專用檢測試劑盒檢測。設(shè)備： 單道移液器 、振蕩器、 ABI 9700 PCR儀(Life Tech.)、ABI 7900HT型熒光定量PCR儀(Life Tech)。

用單道微量移液器取20 μL全血，加入1 mL ddH2O，高速振蕩5 s～10 s，12 800 r/min離心3 min。取出棄上清液，留(20～30) μL ，再加入1 mL ddH2O，高速振蕩離心3 min。取出棄上清液，依次加入150 μL 10% Chelex-100和5 μL蛋白酶K(20 mg/mL)，振蕩5 s～10 s。置56℃保溫0.5 h以上，期間每隔10 min振蕩一次。 取上清液，2 ℃～8 ℃保存或凍存剩余DNA。使用專用檢測試劑盒進行檢測。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS16.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

聯(lián)合基因的2型糖尿病基因檢測報告是將16種易感基因放在一起進行評估，最后得出該病人發(fā)生糖尿病的概率。盡管它把發(fā)病概率分為6個梯度，但一般認為，“—”表示患病風險低，“+”表示患病風險高。這16種基因是：血胰島素抵抗相關(guān)基因：亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)、脂聯(lián)素蛋白(ADIPOQ)、鈣激活蛋白酶10(CAPN-10)。胰島B細胞功能相關(guān)基因：尾加壓素Ⅱ基因(UTS2)、磺脲類藥物受體1基因(ABCC8別名SUR1)、維生素D3受體(VDR)。與肥胖和血脂相關(guān)基因：瘦蛋白(LEP)、脂蛋白脂酶基因(LPL)、載脂蛋白B(APOB)、載脂蛋白E(APOE)、解偶聯(lián)蛋白3基因(UCP3)、解偶聯(lián)蛋白2基因(UCP2)。與免疫調(diào)節(jié)相關(guān)基因：細胞毒性T淋巴細胞相關(guān)抗原4基因(CTLA4)、E-選擇素(SELE)、白細胞介素1(IL1A)。雌激素受體(ESR1)[2]。表1是1例病人的報告單。

糖尿病基因檢測、糖尿病家族史、IGT或IFG史和肥胖都是糖尿病的危險因素。參照優(yōu)勢比Exp(B)結(jié)果，可以認為在其他自變量固定時，糖尿病基因檢測陽性病人患糖尿病的危險性是基因檢測陰性的2.613倍，糖尿病基因檢測與糖尿病有關(guān)聯(lián)性，但關(guān)聯(lián)程度低于其他3個因素。詳見表2、表3。

表1 2型糖尿病基因檢測報告單

表2 Logistic回歸分析的各變量賦值說明

表3 1∶1條件Logistic回歸擬合結(jié)果

3 討 論

3.1 糖尿病基因熱點 把多種易感基因放在一起，作為一個系統(tǒng)來評估，結(jié)果表明整體性的基因檢測也與糖尿病的發(fā)病有相關(guān)性。以下介紹了幾個研究熱點基因。

MTHFR作為葉酸代謝中的關(guān)鍵酶，對動脈粥樣硬化起著相當重要的作用。常見的MTHFR基因C677T位點突變，可以形成高半胱氨酸血癥(Hcy)，進而促進多種疾病的發(fā)生。中國漢族人群亞甲基四氫葉酸還原酶基因多態(tài)性與2型糖尿病具有相關(guān)性[3]。另有研究證明，糖尿病腎病與MTHFR基因突變也有關(guān)[4]。在對山西地區(qū)病人研究中，發(fā)現(xiàn)糖尿病腎病組的血漿Hcy水平明顯高與糖尿病非腎病組，表明糖尿病合并糖尿病腎病(DN)的發(fā)生與MTHFR基因C677T多態(tài)性具有相關(guān)性[5]。

LEP是由白色脂肪組織分泌的肥胖基因的蛋白質(zhì)產(chǎn)物。它的代謝紊亂可以影響到肥胖、胰島素抵抗以及糖尿病的發(fā)生、發(fā)展。2010年，German等[6]在對糖尿病小鼠的研究中發(fā)現(xiàn)，瘦素能輕微降低葡萄糖的水平，并能改善胰島素抵抗，而且這種改善獨立于其他因素，比如抑制食欲和降體重。Ebihara等[7]研究證明，女性糖尿病病人中，應(yīng)用瘦素可以降低血糖水平，改善胰島素抵抗。正是因為瘦素在臨床上的重要性，應(yīng)用瘦素來治療代謝性疾病，還需要進一步的深入研究[8]。

目前研究最多的是APOE基因。它的多態(tài)性可以導(dǎo)致血脂代謝紊亂，其與動脈粥樣脈硬化、冠心病、糖尿病的密切關(guān)系已得到廣泛認可。它包括3種基因型：E2、E3、E4 。很多研究說明E2、E4均可以提高血漿中膽固醇和低密度脂蛋白的濃度。Anthopoulos 等[9]進行的Meta分析表明：ApoE2可能為2型糖尿病的中等危險因子。 對14篇文獻進行統(tǒng)計，DN與載脂蛋白E基因多態(tài)性相關(guān)性的Meta分析中，得出結(jié)論ApoE基因多態(tài)性與T2DM病人DN的發(fā)生相關(guān)[10]。

3.2 實驗的不足 基因檢測通過個體化檢測，可以提前預(yù)防糖尿病的發(fā)生。 本試驗的不足有：①病人范圍局限，樣本量較小，無法得出大范圍和更專業(yè)的結(jié)論；②我國基因行業(yè)發(fā)展迅速，缺乏統(tǒng)一規(guī)范和監(jiān)管。本實驗的聯(lián)合基因集團在得出陰性或陽性結(jié)果之前，要評估各基因在疾病中比重以及亞洲人該基因的發(fā)病率，在統(tǒng)一國際模式的基礎(chǔ)上進行計算，這是十分復(fù)雜和精密的過程。雖然這個過程很嚴謹，但缺乏統(tǒng)一標準和認證。③納入的基因因為專利和經(jīng)濟因素，只是目前全部糖尿病易感基因的一部分，期待其他主要基因的加入。

3.3 展望 糖尿病并發(fā)癥的基因與糖尿病并發(fā)癥的發(fā)生也有關(guān)聯(lián)性。 患有糖尿病腎病的病人，糖尿病腎病的基因檢測(多個基因的整體)也為陽性，兩者符合率較高。當然缺乏進一步的統(tǒng)計證明。期待大范圍、各民族、多專業(yè)以及大樣本量的糖尿病基因檢測數(shù)據(jù)，在統(tǒng)一規(guī)范的基礎(chǔ)上，及早預(yù)警糖尿病，由專業(yè)人士給出專業(yè)的預(yù)防措施。

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R587.1 R255.4

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10.3969/j.issn.1672-1349.2017.18.039

1672-1349(2017)18-2342-03

2016-06-26)

(本文編輯 王雅潔)

西山煤電集團有限公司職工總醫(yī)院(太原 030053)

通訊單位：朱燕萍，E-mail:asd09865@163.com

信息：王雪濤，朱燕萍.2型糖尿病基因檢測與發(fā)病的關(guān)聯(lián)性研究[J].中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2017，15(18)：2342-2344.