腦血疏口服液對兔蛛網膜下腔出血后腦血管痙攣及IL-6、eNOS的影響

，， ，，， ，

腦血疏口服液對兔蛛網膜下腔出血后腦血管痙攣及IL-6、eNOS的影響

張毅1，柏魯寧2，張昭2，朱小明2，杜學鵬2，許康2，魏旭旺2

目的探討兔蛛網膜下腔出血(SAH)后血清中血漿白介素6(IL-6)、內皮型一氧化氮合酶(eNOS)對腦血管痙攣(CVS)發生的影響。方法將72只兔(雌雄不限)隨機分為3個大組，即正常組、SAH組和腦血疏組，采用枕大池二次注血法建立腦血管痙攣動物模型，在不同的時間段取血清，采用ELISA測定兔血清中內皮型一氧化氮合酶(eNOS)及血漿白介素-6(IL-6)含量，制作HE染色切片，計算基底動脈周長。結果與SAH組比較，造模后第3天、第7天、第14天腦血疏組兔一般狀態良好，血清中IL-6含量較低，而eNOS含量較高，差異具有統計學意義(P<0.05)。結論腦血疏口服液具有緩解蛛網膜下腔出血后腦血管痙攣，是通過降低IL-6，增加eNOS來實現的。

蛛網膜下腔出血；腦血管痙攣；腦血疏口服液；兔

蛛網膜下腔出血(SAH)是臨床常見的一種出血性卒中，指多種疾病引起顱內血管破裂，導致血液流向蛛網膜下腔，從而引起疾病的總稱。SAH后引起的腦血管痙攣(CVS)是其高死亡率和致殘率的主要原因，其病理過程的中心環節是血管平滑肌的持續、異常收縮。目前，西醫對SAH 后CVS 的治療盡管有多種方法，但尚無特效措施[1]。腦血疏口服液具有抗凝、增加腦血流量、降低血管阻力、解除平滑肌痙攣等作用，來達到改善腦缺血病人神經功能缺損[2]。但是否能緩解SAH后CVS，目前文獻報道較少。本研究擬采用枕大池二次注血法建立兔SAH后CVS模型，動態觀察CVS病理過程中血漿白介素6(IL-6)、內皮型一氧化氮合酶(eNOS)的變化及腦血疏口服液對其的影響，以期為臨床治療CVS的治療提供新思路。

1 材料與方法

1.1 實驗分組 家兔72只，體重2.5 kg～3.2 kg(2.7 kg±0.56 kg)，雌雄不限，實驗動物由西安交通大學醫學部動物中心提供。將實驗動物分為3大組：正常組、SAH組和腦血疏組，每組24只；又將每大組分為H6組、day3組、day7組及day14組，每小組6只。

1.2 模型建立 SAH組和腦血疏組采用枕大池二次注血法建立兔SAH后CVS模型。以25%烏拉坦耳緣靜脈麻醉(3 mL/kg)，角膜反射降低為麻醉標準，兔取側臥位固定，消毒后于枕部中線做一長3 cm切口，鈍性分離直達寰枕筋膜，用7號腰椎穿刺針與軀體成角約30°穿刺枕大池。在兔耳中央動脈取非抗凝血2.5 mL，緩慢注入枕大池內。首次注血后48 h，以相同的方式再次向枕大池注入2.0 mL自體血。

1.3 實驗藥物及給藥方式 腦血疏口服液系陜西中醫藥大學附屬醫院提供，國藥準字220070059，國家中藥保護品種。腦血疏組在造模前3 d以1 mL/kg劑量進行灌胃，每天灌注2次。SAH組和正常組均給予等量生理鹽水灌胃，各組家兔均放回飼養室，同等條件下飼養。

1.4 血漿IL-6、eNOS的檢測方法 每只家兔分別在造模成功后6 h、3 d、7 d及14 d由耳中央動脈抽血2 mL，離心后取上清，血漿置于-80°℃超低溫冰箱保存。后采用酶免測定法(ELISA)檢測血漿IL-6、eNOS。

1.5 多聚甲醛灌注 用3%戊巴比妥麻醉，切開胸腔顯露心臟，剪開心包膜，夾閉腹主動脈，用20 mL注射器針頭刺穿左心室，將1 000 mL生理鹽水置于高處進行灌注，同時剪開右心耳，后再用1 000 mL多聚甲醛灌注，待動物頭頸部肌肉僵硬完全后，說明灌注成功，腦組織和血管已經固定完成。打開動物頭顱暴露基底部，充分分離基底動脈，將其放置于多聚甲醛中保存，后進行HE染色。

1.6 測基底動脈周長測定 在采集完基底動脈相關標本圖像后，并使用相關軟件測定基底動脈周長，將血管當成圓柱形管道，通過周長=管徑×3.14計算。

1.7 統計學處理 采用SPSS19.0 統計軟件，采用單因素方差分析(one-way ANOVA)，組間比較采用t檢驗。P<0.05 為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 實驗動物的一般狀態 正常組進食、活動及對刺激反應均無明顯變化。SAH組和腦血疏組在造模成功后6 h均出現了呼吸急促、活動減少、進食減少及刺激反應較弱。隨著時間推移，SAH組癥狀逐漸加重，嚴重時出現運動功能障礙，甚至出現劃圈運動，7 d后癥狀逐漸緩解。而腦血疏組在造模后一般狀態良好，神經功能障礙輕或無。

2.2 血清IL-6、eNOS的變化 SAH組和腦血疏組血清IL-6水平在第2次注血后3 d(3 d組)達到最高，后逐漸下降，但腦血疏組血清IL-6水平較SAH組低，與SAH組比較，腦血疏組3 d、7 d、14 d亞組差異有統計學意義(見表1)。而血清eNOS水平在第2次注血后7 d降到最低，后逐漸升高，但腦血疏組血清eNOS水平較SAH組高，與SAH組比較，腦血疏組3 d、 7 d、 14 d亞組差異有統計學意義(見表2)。

表1 SAH后各組動物血清IL-6的變化比較(±s) ng/msL

表2 SAH后各組動物血清eNOS的變化比較(±s) pg/mL

2.3 基底動脈血管周長比較 測量HE染色切片基底動脈管徑周長，相對正常血管周長來說，SAH組在第3天開始縮窄，到第7天時管徑明顯狹窄，這與第7天時實驗動物神經功能癥狀最嚴重的時間正好相符，在第14天管徑緩解，但較正常組仍稍有狹窄。腦血疏組的血管周長較SAH明顯增加，在第3天、第7天時尤為明顯，兩組之間比較，差異具有統計學意義(見表3)。

表3 各組基底動脈血管周長比較(±s) μm

3 討 論

SAH是臨床常見的一種出血性卒中類型，有較高的致死率和致殘率，SAH導致腦血管持續、異常收縮是CVS不良后果的主要原因。近年來大量研究表明，引起SAH后CVS由多種機制形成，如出血成分的代謝產物刺激、NO減少、血管內皮素增加、炎癥反應等[3]。SAH后血管內皮細胞功能障礙及局部炎癥反應是引起CVS的主要原因，是目前較公認的觀點。

正常情況下內皮細胞具有抗凝、抑制炎癥細胞黏附及調節血管張力等多種生理功能，并分泌內皮舒張因子(NO等)、內皮收縮因子(ET等)，及保持兩者的動態平衡[4]。一氧化氮合成酶是NO合成主要的蛋白質大分子，其有多種分型，而內皮型一氧化氮合酶(eNOS)主要分布于血管內皮細胞，使催化釋放的NO迅速進入平滑肌細胞，激活鳥苷酸環化酶，從而催化產生鳥苷酸(cGMP)，經過細胞外信號轉導，cGMP激活細胞內肌質網上的鈣泵，將細胞內游離鈣泵入肌質網中，使肌球蛋白輕鏈脫磷酸，電壓依賴的鈣離子通道關閉，進一步激活鉀離子通道，使血管平滑肌擴張[5]。SAH后血管內皮細胞受損，內皮細胞合成eNOS減少，導致NO的含量降低及其舒血管作用的缺失，導致CVS的發生。同時炎癥反應也參與了腦血管痙攣發生的全程。研究表明，SAH后的血管壁及周圍炎癥反應非常明顯，表現為血管平滑肌增生明顯，內皮細胞腫脹，外膜增厚及血管壁周圍大量炎性細胞浸潤，IL-6的異常增高刺激血管內皮細胞分泌不斷合成和釋放內皮素，血小板生成素的活性提高，引起血管收縮，誘導CVS的發生[6]。

本實驗結果表明，模型組中兔基底動脈周長從第3天開始縮窄，伴隨著血管壁略有增厚，管徑有所縮窄，內膜可見少量褶皺，未見管壁斷裂，平滑肌略有增厚，排列紊亂，少量炎性細胞浸潤，檢測血清中eNOS含量下降，及IL-6含量的增加；直至第7天，基底動脈管徑縮窄最嚴重，內膜結構紊亂，且周圍的炎性細胞較前增加，血清中eNOS含量繼續下降，達到本實驗最低值，而血清中IL-6含量達本實驗峰值。之后血管管徑逐漸擴張，血清中eNOS含量緩慢增加，IL-6含量逐漸減少。而在腦血疏組中，不同時間點血管周長均較模型組長，且通過提高血清中eNOS含量高，減輕炎癥反應，降低血清中IL-6含量，與模型組相比較，差異具有統計學意義(P<0.05)。

腦血疏口服液是根據“氣為血之帥、血為氣之母”的中醫理論研制的一種新型中成藥制劑，是在補陽還五湯的基礎上炮制而成，方中包含黃芪、水蛭、石菖蒲、大黃等，具有益氣通經、活血化瘀之功效[7]。而腦血疏口服液中不同中藥的活性提取成分有擴張血管、抗炎、改善微循環、增加血流速度等作用[8]。本研究結果顯示，在SAH后，腦血疏口服液不僅能增加兔血清eNOS含量，降低血清中IL-6含量，抑制局部炎癥發生，同時可改善兔一般狀態，與SAH組比較差異有統計學意義，為臨床上治療SAH后CVS提供了一種新的方法。

[1] 姜宗飛，楊文平，張新定.蛛網膜下腔出血后腦血管痙攣的治療進展[J].醫學綜述，2011，17(16)：2458-2460.

[2] 雷輝，劉志勤，杜晶晶.腦血疏口服液對缺血性腦卒中患者腦血管血流動力學及神經功能的影響[J].中國實用神經疾病雜志，2015，18(20)：102-103.

[3] 秘勇建，蓋潔，江漁，等.蛛網膜下腔出血后腦血管痙攣發生機制及治療的研究進展[J].中華腦血管病雜志(電子版)，2013(4)：218-221.

[4] 王平.蛛網膜下腔出血后患者腦血管痙攣與血漿內皮素血管緊張素及一氧化氮變化的相關性分析[J].中國實用神經疾病雜志，2014，17(16)：24-25.

[5] Murad F.Nitric oxide and cyclic GMP in cell signaling and drug development[J].N Engl J Med，2006，355(9)：2003-2011.

[6] 王志剛，冀勇，曲春城.動脈瘤性蛛網膜下腔出血患者腦脊液IL-6、sICAM-1含量變化的動態研究[J].中國老年學雜志，2007，17(29)：1691-1692.

[7] 楊延慶，薛濤.腦血疏口服液聯合尼莫地平治療高血壓腦出血的臨床研究[J].現代藥物與臨床，2015，30(11)：1341-1344.

[8] 艾鑫，劉翠.腦血疏口服液對急性腦梗死大鼠的神經保護作用[J].中西醫結合心腦血管疾病雜志，2015，13(11)：1278-1280.

R285.5

A

10.3969/j.issn.1672-1349.2017.18.011

1672-1349(2017)18-2257-03

2017-06-08)

(本文編輯 王雅潔)

陜西中醫藥大學附屬醫院(陜西咸陽 712000)，E-mail：SXgg1129@163.com

信息：張毅，柏魯寧，張昭，等.腦血疏口服液對兔蛛網膜下腔出血后腦血管痙攣及IL-6、eNOS的影響[J].中西醫結合心腦血管病雜志，2017，15(18)：2257-2259.