脂餐負荷前后PDGF-BB、TGF-β1變化及其與動脈硬化關系的研究

，，， ， ，

脂餐負荷前后PDGF-BB、TGF-β1變化及其與動脈硬化關系的研究

王晉宇1，靳春榮2，王俊瑩2，白濤2，陳武2，李思進2

目的研究動脈硬化模型兔脂餐負荷前后血小板源性生長因子(PDGF-BB)和轉化生長因子(TGF-β1)的變化情況及與動脈硬化的關系。方法采用高膽固醇喂食10只健康雄性新西蘭大白兔，喂養12周，于初始、4周、8周、12周給予脂餐負荷，分別于空腹及脂餐負荷后2 h、4 h、6 h、8 h耳緣靜脈采血，測定PDGF-BB、TGF-β1含量；同步超聲觀察腹主動脈硬化情況；12周時處死動物，采用HE染色法觀察相關動脈硬化情況。結果在動脈硬化過程中，PDGF-BB含量呈先升高后下降趨勢，4周最高(P<0.05)，8周、12周較初始下降(P<0.05)；動脈硬化早期(4周內)，脂餐負荷前后，PDGF-BB含量逐漸升高，4 h、6 h、8 h均比空腹高，餐后8 h最高(P<0.05)；在動脈硬化過程中，TGF-β1含量呈升高趨勢，8周、12周較初始升高(P<0.05)，8周最高；動脈硬化早期(4周內)，脂餐負荷后TGF-β1含量逐漸升高，4 h、6 h、8 h均比空腹高，餐后8 h最高(P<0.05)，動脈硬化后期(第8周)，脂餐負荷后TGF-β1總體上呈下降趨勢，4 h、6 h、8 h均比空腹低(P<0.05)。結論動脈硬化過程形成及脂餐負荷過程中，PDGF-BB、TGF-β1含量相互平衡，且脂餐負荷對動脈硬化進展過程有一定影響。

動脈硬化；脂餐負荷；血管平滑肌細胞；增生；遷移

血管平滑肌細胞的活化、增殖和遷移是動脈粥樣硬化病變發展的必要條件[1]；高脂血癥所致過氧化作用可誘導血小板源性生長因子的表達[2-3]，血小板源性生長因子(PDGF-BB)可促使平滑肌細胞的增生和遷移從而導致動脈硬化的發生；轉化生長因子(TGF-β1)是體內重要的抗血管平滑肌細胞增生活性物質。本實驗在動脈硬化進展的不同階段，給予實驗兔高脂餐負荷，研究負荷前后PDGF-BB、TGF-β1的變化，探討其與動脈硬化的關系。

1 材料與方法

1．1 實驗材料 選用健康新西蘭雄性大白兔10只，體重3．0 kg～3．5 kg，由山西省畜牧研究所提供，飼養于山西醫科大學法醫實驗中心。在動物房普通清潔環境下單籠飼養，溫度(18～23)℃，濕度(50±5)%。高脂(含1%膽固醇，10%蛋黃，89%基礎飼料)連續喂養12周，并于初始及4周、8周、12周給予脂餐負荷(含2%膽固醇，20%蛋黃，78%基礎飼料)。膽固醇購于北京索萊寶科技有限公司，蛋黃為新鮮生雞蛋煮熟后直接喂飼，PDGF-BB及TGF-β1試劑盒均購于上海西唐生物公司。

1．2 PDGF-BB及TGF-β1檢測 實驗初始及第4周、8周、12周時禁食禁水8 h后給予脂餐負荷，于負荷前及負荷后2 h、4 h、6 h、8 h經耳緣靜脈每次取血約3 mL(真空抗凝管)，3 000 r/min離心15 min，分離血清，血清放置于EP管中凍存(-80℃冰箱)。全部實驗結束時，采用酶聯免疫吸附法(ELISA)測定血清PDGF-BB及TGF-β1水平。

2 結 果

研究結束時，10只動物均出現腹主動脈粥樣硬化。動脈硬化過程中，脂餐負荷前后血漿PDGF-BB、TGF-β1變化情況。詳見表1、表2。

表1 動脈硬化過程中脂餐負荷前后PDGF-BB水平變化(±s) pg/mL

表2 動脈硬化過程中脂餐負荷前后TGF-β1水平變化(±s) pg/mL

3 討 論

高脂血癥是動脈粥樣硬化的危險因素，最終導致動脈粥樣硬化的產生[4]。近幾年相關研究已證實餐后階段是致動脈粥樣硬化的關鍵時期，Karpe等[5]證實餐后高血脂代謝紊亂是動脈硬化發生發展的重要因素。

高脂血癥與動脈硬化病人的血管平滑肌細胞遷移、增生的發生、發展關系十分密切。Billett等[6]研究發現高膽固醇血癥病人PDGF-B mRNA表達水平比正常膽固醇病人顯著提高，且與血漿總膽固醇水平密切相關。高脂血癥過氧化作用的產物ox-LDL等能夠激活、誘導PDGF-BB的表達；血小板源生長因子是一種重要的促細胞分裂劑，可通過促進血管平滑肌細胞遷移和增生，進而促進動脈粥樣硬化的形成[7-8]，故可以反映體內血管平滑肌細胞增生的程度。

本實驗結果顯示，高脂飼料喂養新西蘭大白兔后血清PDGF-BB含量升高，尤其在4周末時升高最為明顯，4周后開始降低，表明隨著動脈硬化的進展，平滑肌細胞增生程度增高。平滑肌細胞增生情況取決于血小板源性生長因子和TGF-β1之間的平衡；TGF-β1拮抗PDGF-BB而抑制血管平滑肌細胞增生和遷移[9-11]。故檢測高脂血癥機體TGF-β1水平可間接反映機體抗增生的能力和動脈硬化的受損程度。在動脈硬化形成過程中，TGF-β1水平呈升高趨勢，至8周時達到最高，表明在動脈硬化形成過程中機體抗血管平滑肌細胞增生能力增強，4周后PDGF-BB活性減低，而TGF-β1含量仍增高，提示高脂血癥后機體血管平滑肌細胞增生，促使TGF-β1代償性增加。脂餐負荷后 PDGF-BB含量逐漸增加，8 h最明顯，同時動脈硬化早期脂餐負荷前后TGF-β1也呈上升趨勢。動脈硬化早期PDGF-BB與TGF-β1水平皆于脂餐負荷后8 h變化最大，提示脂餐負荷后后期對平滑肌細胞增生影響較大。PDGF-BB水平8周、12周脂餐負荷后總體上無明顯變化，而TGF-β1水平于8周脂餐負荷后總體上呈降低趨勢，提示隨著動脈硬化進展，脂餐負荷后機體抑制平滑肌細胞增生的能力減弱，PDGF-BB與TGF-β1水平失衡。長期高脂飲食使促平滑肌細胞增生的生長因子增多，造成血管平滑肌增生，TGF-β1通過拮抗PDGF而抑制平滑肌細胞增生和遷移。

本研究由于實驗兔之間存在差異性以及樣本例數的限制，脂餐負荷后上述兩指標變化及其對動脈硬化的具體影響還需進一步深入研究。

[1] Mallat Z，Tedgui A．The role of transforming growth factor beta in atheroscleroisis：novel insights and future perspectives[J]．Curr Opin Lipidol，2002，13：523．

[2] Absood A，Furutani A，Kawamura T，et al．Differential PDGF secrection by graft aortic SMC in respose to oxidized LDL[J]．Am J Physiol Heart Circ Physiol，2002，283：H725-H732.

[3] Yang CM，Chien CS，Hsiao LD，et al.Mitogenic effect of oxidized low density lipoprotein on vascular smooth cellsmediated by activation of Ras/Raf/MEK/MAPK pathway [J].Br J Pharmacol，2001，132(7)： 1531-1541.

[4] Calderon JC，Fernandez AZ，Mariade AI，et al．Alherosclerosis，oxidative stress and physical activity[J]．Invest Clin，2008，49(3)：397-410.

[5] Karpe F，Steiner G，Uffelman K，et al.Postprandial lipoproteins and progression of coronary atherosderosis[J]．Atheroclersis，1994，106(1)：83-97.

[6] Billett MA，Adbeish IS，Almkayan SA，et al．Increased expression of genes for platelet-derived growth factor in circulating mononuelenr cells of hypercholesterolemic patients[J]．Arterioaclec Thromb，1996，16(3)：399-406.

[7] Bisaibon JM，MotianiRK，Gonzalez-Cobos JC，et al．Essential rolefor STIMI/Orail-mediated calcium influx in PDGF-induced smoothmuscle migration[J]．Am J Physiol Cell Physiol，2010，298(5)：993-1005．

[8] Cha BY，Shi WL，Yonezawa T，et al.An inhibitory effect of chrys-ceriol on platelet-derived growth factor(PDGF)-induced proliferation and PDGF receptor signaling in human aortic smooth musclecells[J]．J Pharmacol Sci，2009，110(1)：105-110.

[9] Tashiro H，Shimokawa H，Sadamatn K，et al．Prognostic significance of plasma concentrations of trandorming growth factor-beta 1 in patients with coronary artery disease[J]．Coron Artery Dis，2002，13(3)：139-143.

[10] 金煒，董維平，楊紅.轉化生長因子在動脈粥樣硬化形成中的作用及機制研究[J].中國藥理學通報，2003，19(6)：650-653.

[11] 史蓓蓓，鹿育薩.正常高值血壓病人血清血小板源性生長因子BB與轉化生長因子β1水平升高[J].中華高血壓雜志，2010，18(2)：183.

R285.5

A

10.3969/j.issn.1672-1349.2017.18.010

1672-1349(2017)18-2255-02

2017-04-06)

(本文編輯 王雅潔)

山西省教育廳創新項目(No.2013-09178)

1.山西醫科大學 (太原 030001)；2.山西醫科大學第一醫院

靳春榮，E-mail：jinchunrong525@sina.com

信息：王晉宇，靳春榮，王俊瑩，等.脂餐負荷前后PDGF-BB、TGF-β1變化及其與動脈硬化關系的研究[J].中西醫結合心腦血管病雜志，2017，15(18)：2255-2256.