宮頸癌組織長鏈非編碼RNA XIST、小分子RNA miR-101-3p表達變化及其意義

劉麗丹，黃浩梁

(武漢市第一醫院，武漢 430022)

宮頸癌組織長鏈非編碼RNA XIST、小分子RNA miR-101-3p表達變化及其意義

劉麗丹，黃浩梁

(武漢市第一醫院，武漢430022)

目的觀察宮頸癌組織長鏈非編碼RNA(LncRNA)X染色體失活特異轉錄子(XIST)、小分子RNA miR-101-3p表達變化，并探討其臨床意義。方法選取91例宮頸癌患者的宮頸癌組織標本為觀察組，癌旁正常組織(距離宮頸癌組織>5cm且經病例檢查證實為正常組織)標本為對照組。采用實時熒光定量PCR法檢測兩組標本中的XIST、miR-101-3p表達，并分析其與宮頸癌臨床病理參數的關系。結果觀察組、對照組XIST表達量分別為8.97±3.56、7.01±3.82，miR-101-3p表達量分別為8.24±4.22、10.15±3.97。觀察組XIST表達量高于對照組(P<0.05)，miR-101-3p表達量低于對照組(P<0.05)。Pearson積矩相關分析結果顯示宮頸癌組織miR-101-3p、XIST表達量呈負相關性(r=-0.716，P<0.05)。腫瘤最大徑≥4 cm、FIGO分期Ⅲ+Ⅳ期、低分化、有淋巴結轉移的宮頸癌組織中miR-101-3p表達量分別低于于腫瘤最大徑<4 cm、FIGO分期Ⅰ+Ⅱ期、中高分化、無淋巴結轉移的宮頸癌組織(P均<0.05)，XIST表達量分別高于于腫瘤最大徑<4 cm、FIGO 分期Ⅰ+Ⅱ期、中高分化、無淋巴結轉移宮頸癌組織(P均<0.05)。結論宮頸癌組織XIST表達升高、miR-101-3p表達降低。檢測宮頸組織XIST、miR-101-3p有助于宮頸癌的病情判斷。

宮頸癌；長鏈非編碼RNA；X染色體失活特異轉錄子；小分子RNA；miR-101-3p

目前對腫瘤發生原因的研究已經涉及小分子RNA(miRNA)和長鏈非編碼RNA(LncRNA)[1,2]。

小分子RNA101(miR-101)廣泛存在于真核生物細胞，可作為抑癌因子在乳腺癌[3]、胃癌[4]等惡性腫瘤中異常表達，miR-101-3p是miR-101的一種活性形式[5]。目前尚不清楚宮頸癌組織中miR-101表達變化情況。X染色體失活特異轉錄因子(XIST)表達異常與肺癌和胰腺癌的發生發展有關[6，7]。目前宮頸癌組織中XIST表達變化也不清楚。本課題組前期研究用ELM數據庫分析發現，miR-101和XIST存在4個結合位點，筆者推測二者可能存在相互作用。本研究觀察了宮頸癌組織中miR-1-1-3p、XIST的表達變化，并分析了宮頸癌組織中miR-101、XIST表達與宮頸癌臨床病理參數的關系，旨在明確miR-1-1-3p、XIST在宮頸癌發生發展中的作用及檢測宮頸癌組織miR-1-1-3p、XIST表達的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集2016年1月～2017年1月收治的91例宮頸癌患者的手術切除宮頸癌組織標本為觀察組，癌旁正常組織標本(距離宮頸癌組織>5 cm且經病例檢查證實為正常組織)為對照組。患者納入標準：①宮頸癌組織病理檢查確定為宮頸癌；②術前未行任何放、化療治療；③術前未接受其它可能影響本研究結果的抗腫瘤藥物治療。排除標準：①妊娠期以及哺乳期的婦女；②心臟功能不全者；③肝、腎功能障礙者；④臨床病歷資料記錄不完整者；⑤合并有其它惡性腫瘤的患者。入組患者年齡39～76(63.24±11.87)歲；腫瘤類型為鱗癌55例，腺癌35例；病灶最大徑<4 cm者49例，≥4 cm者 42例；國際婦產科聯盟(FIGO)分期[8]Ⅰ+Ⅱ期38例，Ⅲ+Ⅳ期53例；分級程度低分化31例，中、高分化60例；有淋巴結轉移33例，無淋巴結轉移58例。本研究已獲我院醫學倫理委員會批準。患者或其家屬已簽署知情同意書。

1.2 miR-101、XIST檢測方法 參照RNA提取試劑盒(諾維贊生物公司)說明書操作提取總RNA。按照逆轉錄試劑盒(諾維贊生物公司)說明書操作進行RNA的反轉錄。反應體系包括總RNA 1 μg、2×RT mix 10 μL、mix 2 μL、oligo dNTPs 1 μL、引物 1 μL共計20 μL。反應條件25 ℃ 5 min，50 ℃ 15 min，85 ℃ 5 min。按照熒光定量PCR試劑盒(諾維贊生物公司)說明書操作進行熒光定量PCR，反應體系包括反轉錄產物2 μL、正向引物2 μL、反向引物2 μL、2×mix 10 μL、純水4 μL，設定38個循環，循環的程序為95 ℃ 30 s、95 ℃ 5 s、60 ℃ 30 s。以GAPDH為內參照。檢測XIST所需引物采用Primer Premier 5.0軟件設計，并由上海生工生物工程公司合成。XIST上游引物序列5′-AATGGAACGGGCTGAGTTTTAG-3′，下游引物序列5′-TCATCCGCTTGCGTTCATAG-3′；內參GAPDH上游引物序列5′-GGAAGGACTCATGACCACAGTCC-3′，下游引物序列5′-TCGCTGTGAAGTCAGAGGAGACC-3′。檢測miR-101-3p所需引物采用TaqMan公司生產的miR-101-3p檢測探針。以2-ΔΔCt表示miR-101、XIST表達量。

2 結果

2.1 兩組miR-101-3p、XIST表達比較 觀察組、對照組XIST表達量分別為(8.97±3.56)、(7.01±3.82)，miR-101-3p表達量分別為(8.24±4.22)、(10.15±3.97)。觀察組XIST表達量高于對照組(P<0.05)，miR-101-3p表達量低于對照組(P<0.05)。

2.2 觀察組miR-101-3p、XIST表達量的相關性 Pearson積矩相關分析結果顯示宮頸癌組織miR-101-3p、XIST表達量呈負相關性(r=-0.716，P<0.05)。

2.3 宮頸癌組織miR-101-3p、XIST表達與宮頸癌臨床病理參數的關系 見表1。腫瘤最大徑≥4 cm、FIGO分期Ⅲ+Ⅳ期、低分化、有淋巴結轉移的宮頸癌組織中miR-101-3p表達量分別低于于腫瘤最大徑<4 cm、FIGO分期Ⅰ+Ⅱ期、中高分化、無淋巴結轉移的宮頸癌組織(P均<0.05)，XIST表達量分別高于于腫瘤最大徑<4 cm、FIGO分期Ⅰ+Ⅱ期、中高分化、無淋巴結轉移宮頸癌組織(P均<0.05)；不同年齡、病理類型宮頸癌組織中miR-101-3p、XIST表達量相比P均>0.05。

表1 宮頸癌組織XIST、miR-101-3p表達與宮頸癌臨床病理參數的關系

3 討論

miRNA是內源性的非編碼小RNA，廣泛存在于真核生物中，它與惡性腫瘤的發生、發展密切相關，腫瘤細胞中的miRNA異常改變可以介導某些基因的表達，進而調控惡性腫瘤細胞的功能[12]。miR-101作為抑癌因子在乳腺癌[13]、肝癌[14]等惡性腫瘤細胞呈低表達，并調控其增殖、侵襲、轉移等。MiR-101包括miR-101-3P和miR-101-5p兩種成熟的形式，有研究發現miR-101-3p的下調可以促進肝癌細胞的增殖、遷移，并抑制細胞的凋亡[15]。在正常雌性哺乳動物細胞中，XIST是維持兩條X染色體中一條沉默的關鍵因素，其表達異常會導致細胞基因轉錄過程異常而向惡性轉變。文獻報道，XIST表達異常與肺癌、乳腺癌等密切相關[17]。本研究首先觀察了宮頸癌組織miR-101-3p、XIST表達變化，結果顯示，與癌旁組織比較，宮頸癌組織中miR-101-3p表達下調，XIST表達上調，提示miR-101-3p、XIST參與了宮頸癌的發病過程。Sheng等[4]的研究結果顯示，miR-101-3p表達下調參與了肝癌的增殖、遷移。魏偉等[6]的研究發現，XIST在胰腺癌組織中呈高表達，可能參與了胰腺癌的發生、發展過程。亦與本研究結果相呼應。Pearson積矩相關分析結果顯示宮頸癌組織中miR-101-3p與XIST的表達呈負相關。筆者在前期研究中利用ELM數據庫分析發現，miR-101和XIST存在4個結合位點。結合本研究結果，筆者認為XIST、miR-101-3p共同參與了宮頸癌發生過程，但是其中究竟是XIST調控miR-101-3p還是miR-101-3p調控XIST目前尚不清楚。

本研究結果顯示，相對于腫瘤最大徑<4 cm、FIGO分期Ⅰ+Ⅱ期、中高分化、無淋巴結轉移的宮頸癌組織腫瘤最大徑≥4 cm、FIGO分期Ⅲ+Ⅳ期、低分化、有淋巴結轉移的宮頸癌組織中miR-101-3p低表達、XIST高表達更為顯著，說明miR-101-3p、 XIST與宮頸癌患者臨床病理參數密切相關，腫瘤越大、臨床分期越晚、腫瘤分化程度越差以及有區域淋巴結轉移時，兩種蛋白的表達異常更為明顯，提示臨床檢測宮頸組織miR-101-3p、XIST有助于宮頸癌的病情判斷。

綜上所述，宮頸癌組織miR-101-3p表達下降、 XIST表達升高。檢測宮頸癌組織miR-101-3p、 XIST表達有助于判斷患者病情。

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