Ⅱ～Ⅲ期上皮性卵巢癌原發灶及轉移灶中miR-199a-5p表達變化及其意義

彭靚,葉萍,陳國慶,謝曉英

(贛南醫學院第一附屬醫院, 江西贛州 341000)

·臨床研究·

Ⅱ～Ⅲ期上皮性卵巢癌原發灶及轉移灶中miR-199a-5p表達變化及其意義

彭靚,葉萍,陳國慶,謝曉英

(贛南醫學院第一附屬醫院,江西贛州341000)

目的觀察Ⅱ～Ⅲ期上皮性卵巢癌原發灶及轉移灶中miR-199a-5p表達變化，并探討其臨床意義。方法選擇52例Ⅱ～Ⅲ期上皮性卵巢癌患者卵巢癌組織標本為卵巢癌原發組，卵巢癌盆腔淋巴結轉移灶標本為卵巢癌轉移組，29例良性上皮性卵巢腫瘤患者的腫瘤組織標本為良性組，32例因子宮肌瘤行子宮附件切除術患者的正常卵巢組織標本為對照組。采用實時熒光定量PCR法檢測四組標本中miR-199a-5p表達量，并分析上皮性卵巢癌組織miR-199a-5p表達量與上皮性卵巢癌FIGO分期、病理分級及組織學類型的關系。結果卵巢癌原發組、卵巢癌轉移組、良性組、對照組標本miR-199a-5p表達量分別為1.058±0.306、0.704±0.343、4.335±0.666、4.414±0.470。卵巢癌原發組miR-199a-5p表達量低于良性組和對照組(P均<0.05)，卵巢癌轉移組miR-199a-5p表達量低于良性組和對照組(P均<0.05)，卵巢癌轉移組miR-199a-5p表達量低于卵巢癌原發組(P<0.05)，良性組和對照組miR-199a-5p表達量相比P>0.05。上皮性卵巢癌組織miR-199a-5p表達量和卵巢癌FIGO分期有關(P<0.05)，與病理分級和組織學類型無關(P均>0.05)。結論Ⅱ～Ⅲ期上皮性卵巢癌原發病灶和盆腔淋巴結轉移灶組織中miR-199a-5p表達降低。檢測上皮性卵巢癌原發病灶組織中miR-199a-5p表達量有助于判斷上皮性卵巢癌的FIGO分期。

卵巢癌；上皮性卵巢癌；微小RNA；微小RNA199a-5p

卵巢癌是婦科常見三大惡性腫瘤之一，據國家癌癥中心最新數據估計，2013 年卵巢癌發病例數為5萬例，發病率約為7.53/10萬，位居女性惡性腫瘤發病的第10位[1]。上皮性卵巢癌是最常見的卵巢惡性腫瘤，5年生存率一直徘徊在30%～40%，嚴重威脅婦女生命和健康[2]。因此，明確上皮性卵巢癌發病機制，并尋找早期診斷和治療方法至關重要。微小RNA(miRNA)是一類大小19～25個核苷酸的內源性非編碼RNA，其與腫瘤的關系是目前的研究熱點[3，4]。MiR-199a-5p是miRNA的一種，在各種腫瘤組織中表達不一，其在宮頸癌[10]、肝癌[11]組織中表達下調，而在胃癌[12]、結直腸癌[13]組織中表達上調。但是目前未有miR-199a-5p在上皮性卵巢癌組織中表達情況的研究報道。本研究觀察了Ⅱ～Ⅲ期上皮性卵巢癌原發灶及轉移灶組織中miR-199a-5p表達變化，并分析其與上皮性卵巢癌FIGO分期、病理分級、組織學類型的關系。現報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇贛南醫學院第一附屬醫院婦科2014年5月～2015年12月收治的52例Ⅱ～Ⅲ期上皮性卵巢癌患者的卵巢癌組織標本為卵巢癌原發組，淋巴結轉移灶組織標本為卵巢癌轉移組。患者年齡 22～71歲，平均47歲。均經術后病理檢查證實。按FIGO2009卵巢癌診斷及分級標準，FIGO分期Ⅱ期22例，Ⅲ期30例；病理分級G1級13例，G2級23例，G3級16例；組織學類型漿液性腺癌 25例、黏液性腺癌21例，子宮內膜樣癌 4 例，透明細胞癌2例。所有患者術前均未接受過放療、化療或激素治療。選擇29例良性上皮性卵巢腫瘤患者的卵巢腫瘤組織標本為良性組，患者年齡18～68歲，平均45歲。選擇因子宮肌瘤行子宮附件切除術的32例患者的正常卵巢組織標本為對照組，患者年齡19～62歲，平均47歲。三組患者均未合并其他器官腫瘤或內外科合并癥。三組患者年齡相比P>0.05。本研究已獲得醫院倫理委員會批準，患者均已簽署知情同意書。

1.2 miR-199a-5p檢測 采用實時熒光定量PCR法。標本離體后10 min內置于去除RNase的凍存管中，經液氮罐迅速冷凍后置-196 ℃保存待測。檢測時取各組標本用液氮研磨法磨成粉末并稱取合適量，加入總RNA提取試劑NcmZolReagent，按NcmZolReagent試劑說明書的步驟提取總RNA。分光光度計檢測RNA溶液D260/D280比值，計算RNA濃度和純度，比值若在1.8～2.1，說明提取的總RNA較純，進行后續實驗，否則棄用。行逆轉錄，反應條件：16 ℃ 30 min，42 ℃ 40 min，85 ℃ 10 min。行實時熒光定量PCR，以U6 為內參照。引物購自上海吉瑪生物技術有限公司。miR-199a-5p上游引物5′-GTCGATACCAGTGCGTGTCGTCCTGTCGGC-3′，下游引物5′AATTGCACTGGATACGACAGCCTAT-3′。U6上游引物 5′-GCTTCGGCAGCACATATACTAAAAT-3′，下游引物5′-CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT-3′。PCR 反應條 件 ：95 ℃變性 5 min， 94 ℃ 30 s、60 ℃ 20 s、70 ℃ 45 s共40個循環。重復3次。 用2-ΔΔCt表示各組miR-199a-5p表達量。

2 結果

2.1 各組標本miR-199a-5p表達量比較 卵巢癌原發組、卵巢癌轉移組、良性組、對照組標本miR-199a-5p表達量分別為1.058±0.306、0.704±0.343、4.335±0.666、4.414±0.470。卵巢癌原發組miR-199a-5p表達量低于良性組和對照組(P均<0.05)，卵巢癌轉移組miR-199a-5p表達量低于良性組和對照組(P均<0.05)，卵巢癌轉移組miR-199a-5p表達量低于卵巢癌原發組(P<0.05)，良性組和對照組miR-199a-5p表達量相比P>0.05。

2.2 上皮性卵巢癌組織miR-199a-5p表達量和卵巢癌臨床病理參數的關系 見表1。上皮性卵巢癌組織miR-199a-5p表達量和卵巢癌FIGO分期有關(P<0.05)，與病理分級和組織學類型無關(P均>0.05)。

3 討論

上皮性卵巢癌是最常見的卵巢惡性腫瘤，占卵巢惡性腫瘤的85%～90%，病死率高居婦科惡性腫瘤之首。由于卵巢惡性腫瘤的生成是多環節、多因素作用的結果，基因功能和表達的異常通常直接參與卵巢癌的發生發展過程，如原癌基因的激活和抑癌基因的突變等，而侵襲轉移是導致惡性腫瘤患者死亡的最關鍵因素之一。探尋參與上皮性卵巢癌發生、侵襲、轉移過程的基因并加以干預有可能為治療上皮性卵巢癌提供新的途徑。

表1 上皮性卵巢癌組織miR-199a-5p表達量和卵巢癌臨床病理參數的關系

研究表明，miRNAs調控著人類1/3基因的表達，參與腫瘤發生發展[5，6]。Calin等[7]首次證實了miRNA在人類惡性腫瘤慢性淋巴細胞性白血病中的作用，miR-15a/miR-16-1被確定為腫瘤抑制因子。miR-200a高表達與卵巢癌組織學類型和分期有關，淋巴結轉移患者轉移灶中miR-200c表達顯著升高，血漿中的miR-200a和miR-200c可能是診斷卵巢癌的標記物[8]。miR-199a-5p是由其基因轉錄初產物pri-miR-199a經酶剪切并加工成熟后形成的，miR-199a由位于19號染色體和1號染色體上的2種基因剪切產生[9]。由于組織細胞中存在多種miRNA的表達，并且同一種miRNA在不同組織中的表達情況也各不一樣，因此有報道miR-199a-5p在各類腫瘤組織中的表達報道不一，其在宮頸癌[10]及肝癌[11]中表達下調，而在胃癌[12]及結直腸癌[13]中表達上調。He等[12]研究發現，相比正常胃黏膜組織，miR-199a-5p在胃癌組織中顯著上調，并且miR-199a-5p能夠增加胃癌細胞遷移和侵襲能力，晚期腫瘤或是有淋巴結轉移患者中miR-199a-5p表達水平相對較高。鄒阮敏等[14]的研究報道了miR-199a-5p在宮頸癌及宮頸上皮內瘤變組織中的表達低于正常組織，并且miR-199a-5p表達與宮頸癌的組織分化程度存在一定相關性，而宮頸癌小細胞的miR-199a-5p表達低于其他組織分化類型的標本。miR-199a-5p在宮頸癌組織中的異常表達。miR-199a-5p有望成為宮頸癌新的治療靶點。

本研究結果顯示，卵巢癌原發灶和轉移灶組織中 miR-199a-5p 表達量明顯低于良性卵巢腫瘤及正常卵巢組織，提示 miR-199a-5p與上皮性卵巢癌的發病具有密切聯系。卵巢癌轉移灶中 miR-199a-5p表達量低于原發灶，提示miR-199a-5p可能參與卵巢癌的轉移過程。有研究表明，復發性卵巢癌和原發性卵巢癌組織中miR-199a-5p表達具有差異性，且miR-199a-5p表達量與患者無進展生存、總生存率有關[15]。這一研究進一步提示我們miR-199a-5p表達量與卵巢癌轉移及預后有關。國內李燕彬等[16]檢測了miR-199a-5p在胃癌組織及癌旁正常組織表達情況，miR-199a-5p在胃癌中表達較正常胃黏膜組織明顯下降，miR-199a-5p的表達量與腫瘤大小、分期、分化程度、有無淋巴結轉移具有相關性。本研究結果顯示上皮性卵巢癌原發灶miR-199a-5p表達量與上皮性卵巢癌FIGO分期有關，Ⅲ期上皮性卵巢癌原發灶miR-199a-5p表達量低于Ⅱ期上皮性卵巢癌，進一步表明miR-199a-5p參與上皮性卵巢癌的發生發展過程，并且與上皮性卵巢癌的進展相關。但本研究結果顯示，上皮性卵巢癌原發灶miR-199a-5p表達量與上皮性卵巢癌病理分級、組織學類型無關。考慮為樣本量較小導致的，今后如有條件，可進一步擴大樣本量繼續研究。

綜上，Ⅱ～Ⅲ期上皮性卵巢癌原發病灶和盆腔淋巴結轉移灶組織中miR-199a-5p表達降低。檢測上皮性卵巢癌原發病灶組織中miR-199a-5p表達量有助于判斷上皮性卵巢癌的FIGO分期。在miR-199a-5p可能在上皮性卵巢癌發生、發展過程中發揮抑癌基因的功能，但這一功能的具體機制不明，今后可以對此進行研究，尋找相關分子通路上游或下游靶基因，進一步認識卵巢癌發病的分子機制，并加以干預。

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10.3969/j.issn.1002-266X.2017.35.012

R737.31

B

1002-266X(2017)35-0039-03

2017-06-07)

國家自然科學基金項目(81360383)。

謝曉英(E-mail:xiexiaoying603@126.com)