參威骨痹片的定性鑒別研究

余曉玲+袁小淋+李爭艷+冮順奎+李月亭+陳坤

摘要：目的建立參威骨痹片的定性鑒別方法。方法采用薄層色譜法對處方當(dāng)歸、威靈仙、川芎、白芍、獨(dú)活進(jìn)行定性鑒別。結(jié)果薄層鑒別色譜斑點(diǎn)清晰、專屬性強(qiáng)，陰性對照無干擾。結(jié)論該方法專屬性強(qiáng)、重現(xiàn)性好、操作簡便，可用于參威骨痹片的定性鑒別。

關(guān)鍵詞：參威骨痹片；薄層鑒別；當(dāng)歸；威靈仙；川芎；白芍；獨(dú)活

中圖分類號：R285.5文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號：1007-2349（2017）09-0062-03

【Abstract】Objective： To establish a qualitative method for identification of Shenwei Gibi Tablets. Methods： Thin layer chromatography was used to qualitatively identify Angelica， Radix Clematidis， Ligusticum， Paeoniae and Angelicae pubescentis. Results： In thin layer identification chromatography， the spots were clear， with strong specificity and negative control without interference. Conclusion： The method has strong specificity， good reproducibility and simple operation， and can be used for the qualitative identification of Shenwei Bibi Tablets.

【Key words】Shenwei Bibi tablet， thin layer identification， Angelica， Radix Clematidis， Ligusticum， Paeoniae， Angelicae pubescentis

參威骨痹片為昆明市中醫(yī)醫(yī)院生產(chǎn)，由云南省名中醫(yī)冮順奎經(jīng)驗(yàn)方研制、用于治療骨性關(guān)節(jié)炎的一種中藥制劑，由小紅參、威靈仙等組成，具有滋補(bǔ)肝腎，祛風(fēng)除濕、活血止痛的功能，經(jīng)多年臨床使用證實(shí)對骨性關(guān)節(jié)炎有確切療效，癥狀改善明顯，并獲持續(xù)性改進(jìn)，有效率達(dá)82%[1]。為更好的對該制劑進(jìn)行質(zhì)量控制，本研究采用薄層色譜法，建立了參威骨痹片中當(dāng)歸、威靈仙、川芎、白芍、獨(dú)活的薄層鑒別方法，為參威骨痹片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的完善、充實(shí)提供了依據(jù)。

1儀器與試藥

超聲波清洗儀（200W，40kHz）昆山市超聲儀器有限公司）；FB124自動(dòng)內(nèi)校電子分析天平（上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司）；雙槽展開缸（20cm×10cm）；硅膠G高效板、硅膠GF254高效板（青島海洋化工廠）；參威骨痹片（昆明市中醫(yī)醫(yī)院自制，批號150321，150403，150511）當(dāng)歸、威靈仙、川芎、獨(dú)活對照藥材（編號為：120927-200810、121181-200101、120918-200809、120940-200708），芍藥苷對照品（編號為：110736-201136）以上對照品及對照藥材均購自中國藥品生物制品檢定所。

2方法與結(jié)果

2.1當(dāng)歸薄層鑒別[2]取本品粉末5 g，加1%碳酸氫鈉溶液50 mL，超聲處理10 min，離心，取上清液用稀鹽酸調(diào)節(jié)PH值至2～3，用石油醚振搖提取3次，每次20 mL，合并石油醚液，揮干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液[3]。另取當(dāng)歸對照藥材，加同法制成當(dāng)歸對照藥材溶液。照薄層色譜法（附錄Ⅵ B）試驗(yàn)，吸取上述溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙醚-乙酸乙酯-甲酸（10：50：1）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性樣品無此斑點(diǎn)。色譜圖見圖1。

2.2威靈仙薄層鑒別取本品粉末5 g，加乙醇50 mL，加熱回流2 h，濃縮至20 mL，加鹽酸3 mL，加熱回流1 h，放冷，用石油醚（60～90℃）振搖提取3次，每次20 mL，合并石油醚液，揮干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液[4]。另取威靈仙對照藥材，加同法制成威靈仙對照藥材溶液。照薄層色譜法（附錄Ⅵ B）試驗(yàn)，吸取上述溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（20：3：0.2）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的顏色斑點(diǎn)，陰性樣品無此斑點(diǎn)。色譜圖見圖2。

2.3川芎薄層鑒別[5]取本品粉末5 g，加乙醚30 mL，加熱回流1h，濾過，濾液揮干，殘?jiān)右宜嵋阴?ml使溶解，作為供試品溶液。另取川芎對照藥材，加同法制成川芎對照藥材溶液。照薄層色譜法（附錄Ⅵ B）試驗(yàn)，吸取上述溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯（3：1）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（254nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性樣品無此斑點(diǎn)。色譜圖見圖3。

2.4白芍薄層鑒別取本品粉末約10 g，精密稱定，置索氏提取器中，加甲醇40 mL，冷浸過夜，再加甲醇適量，加熱回流4 h，提取液回收溶劑并濃縮至干，殘?jiān)铀?0 mL，微熱使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次30 mL，合并正丁醇液，用氨試液充分洗滌2次，每次50 mL，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)铀?0 mL超聲使溶解，放冷，通過D101型大孔吸附樹脂柱（內(nèi)徑為2 cm，柱高為20 cm），以水50 mL洗脫，棄去水液，再用40%乙醇30 mL洗脫，棄去洗脫液，繼用70%乙醇100 mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状既芙猓D(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液[6]。另取芍藥苷對照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg溶液，作為對照品溶液。照《薄層色譜法檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作程序》（附錄ⅥB）試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（40：5：10：0.2）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的藍(lán)紫色斑點(diǎn)，陰性樣品無此斑點(diǎn)。色譜圖見圖4。endprint

2.5獨(dú)活薄層鑒別取本品粉末5 g，加0.1 mol/L氫氧化鈉溶液50 mL，邊加邊攪拌，靜置1 h，濾過，濾液用稀鹽酸調(diào)節(jié)PH值至3～4，用石油醚振搖提取3次，每次30 mL，合并石油醚液，揮干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。另取獨(dú)活對照藥材，加同法制成獨(dú)活對照藥材溶液。照薄層色譜法（附錄ⅥB）試驗(yàn)，吸取上述溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（7：3）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視[7]。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性樣品無此斑點(diǎn)。色譜圖見圖5。

3結(jié)果與討論

本品由小紅參、威靈仙、獨(dú)活等14味藥組成，成分較為復(fù)雜，本次實(shí)驗(yàn)中對小紅參、威靈仙、茯苓、獨(dú)活、秦艽、川芎、當(dāng)歸、白芍、桂枝、桑寄生、懷牛膝、防風(fēng)、杜仲等TLC鑒別方法進(jìn)行了研究，其中小紅參、秦艽、桑寄生、防風(fēng)未能找到合適的TLC鑒別方法，而茯苓、桂枝、懷牛膝、杜仲的TLC鑒別斑點(diǎn)不夠清晰且重現(xiàn)性不好，因此，本實(shí)驗(yàn)對威靈仙、川芎、白芍、當(dāng)歸、獨(dú)活五味藥進(jìn)行了TLC鑒別。結(jié)果重復(fù)性和專屬性均良好、方法簡便；在白芍薄層鑒別中，曾參考《中國藥典》2010年版方法采用三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（40：5：10：0.2）為展開劑，結(jié)果供試品斑點(diǎn)不明顯且不清晰。經(jīng)摸索，用調(diào)整后的方法結(jié)果斑點(diǎn)清晰、重復(fù)性好。

參考文獻(xiàn)：

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