慢性阻塞性肺疾病急性加重期外周血淋巴細胞免疫分型變化的相關因素分析

劉培培,程培培,侯松萍*

(1.吉林大學中日聯誼醫院 呼吸科，吉林 長春130033； 2.承德醫學院附屬醫院 小兒內科)

慢性阻塞性肺疾病急性加重期外周血淋巴細胞免疫分型變化的相關因素分析

劉培培1,程培培2,侯松萍1*

(1.吉林大學中日聯誼醫院 呼吸科，吉林 長春130033； 2.承德醫學院附屬醫院 小兒內科)

慢性阻塞性肺疾病(COPD)是一種嚴重危害人類健康的疾病，目前研究結果初步顯示細胞免疫參與了COPD的病因、發病機制、恢復及預后整個過程。本文通過檢測COPD患者外周血淋巴細胞的免疫分型變化，探討COPD患者急性加重期的肺功能、血氣分析、呼吸困難量表評分、病程長短等各項指標與其免疫功能變化的相關性，為臨床綜合診治COPD提供一定的參考價值。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

選取吉林大學中日聯誼醫院2014年12月至2015年9月慢性阻塞性肺疾病急性加重期患者137例，納入標準：均符合中華醫學會呼吸病學會2013年修訂版慢性阻塞性肺疾病診治指南[1]。排除標準：不能配合完成支氣管舒張實驗者，合并其它心肝腎等疾病者，近期使用激素、免疫抑制劑等影響免疫功能的患者，伴有其他部位慢性炎癥的患者。確診137例COPD患者，年齡35-78歲，平均66.01±10.78歲，其中男57例，女80例。測定所有患者外周血淋巴細胞免疫分型CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD19+、CD56+，并計算CD4+/CD8+比值。以COPD急性加重期患者淋巴細胞免疫分型的各項指標作為應變量，MMRC評分、FEV1Pred%、PaO2、PaCO2、病程、吸煙作為自變量，進行相關性分析。

1.2 方法

1.2.1 儀器和試劑 CD45-FITC/CD4-PE/CD8-ECD/CD3- PC5(貨號：6607013)；細胞裂解液：OptiLyse○RNO-lysing Solution(貨號：A11894)；流式細胞儀：Beckman Coulter FC500；以上所有試劑均購自美國Beckmen Coulter公司。肺功能測定采用MasterScreenPneumo型肺功能儀 (德國康爾福盛CareFusion公司)，技術標準參考2005年美國胸科學會和歐洲呼吸協會共同制定的肺功能測試標準[2]；血氣分析測定采用GEMpremier3500分析檢測儀(美國Instrumentation Laboratory公司)。

1.2.2 血液樣本制備 采集患者外周血2 ml，加入到EDTA抗凝的真空管中混勻。取兩只流式細胞儀上樣管，分別命名為同型對照管和實驗管，每管中均加入100 μl抗凝全血，然后分別加入20 μl同型對照抗體、CD45-FITC/CD4-PE/CD8-ECD/CD3-PC5抗體和CD45-FITC/CD56-PE/CD19-ECD/CD3-PC5，充分混勻，避光室溫孵育15 min；然后向每管中加入紅細胞裂解液500 μl，充分混勻，避光孵育10 min后加入500 μl PBS，1 000 r/min離心5 min，棄上清，每管加入500 μl鞘液，混勻，等待上機檢測。血氣分析動脈血由專業人員采集，采用一次性威世德動脈血氣針，型號3302通用性動脈血氣針，由全自動血液細胞分析儀讀取結果。

1.2.3 指標測定 外周血淋巴細胞亞群及NK細胞檢測均采用流式細胞檢測技術，由我院中心實驗室專人操作檢測。每管獲取細胞1×104個，以熒光抗體染色陽性細胞所占百分比記錄結果。

1.3 統計學方法

2 結果

2.1 COPD急性加重期患者病程、MMRC評分、FEV1Pred%、血氣分析結果等臨床資料詳見表1。

表1 COPD急性加重期患者臨床資料

2.2 COPD急性加重期患者淋巴細胞免疫分型的各項指標與MMRC評分、FEV1Pred%、PaO2、PaCO2、病程、吸煙相關性分析顯示： CD3+CD4+與PaO2呈顯著正相關(P<0.05)；CD3+CD8+與PaCO2呈顯著正相關(P<0.05)，但是CD4+/ CD8+比值與PaCO2呈顯著負相關(P<0.05)；CD56+與mMRC評分呈顯著正相關(P<0.01)，CD3+與mMRC評分呈顯著負相關(P<0.05)，詳見表2、表3。

表2 慢性阻塞性肺疾病急性發作期患者淋巴細胞免疫分型的多因素相關性分析

表3 慢性阻塞性肺疾病急性發作期患者淋巴細胞免疫分型的多因素相關性分析

*P<0.05，**P<0.01

3 討論

Saetta 等研究結果提示發展為COPD的吸煙者與肺功能正常、無臨床癥狀的吸煙者相比，CD3+CD8+T淋巴細胞數目明顯增加，提示CD3+CD8+T淋巴細胞在氣道的重塑方面起到了重要作用[3]。本研究結果顯示外周血CD3+CD8+T淋巴細胞與PaCO2呈顯著正相關(P<0.05)，說明氣道阻塞性通氣功能障礙越嚴重，CD3+CD8+T淋巴細胞也隨著氣道阻塞程度加重而造成的PaCO2增高而升高。Saetta等研究結果和本實驗結果均提示CD3+CD8+T淋巴細胞在COPD患者氣道炎癥反應過程中起重要作用。

Won-Dong Kim等研究表明彌散功能正常的COPD患者與健康吸煙者或COPD伴有彌散功能減低的患者相比，其CD3+CD8+T淋巴細胞比例升高，CD4+/CD8+比值下降，且在這組患者中FEV1/FVC與CD4+/CD8+比值具有顯著正相關性，推測CD3+CD8+T淋巴細胞可能參與部分COPD病人小氣道病變及氣流受限的炎癥反應過程[4]。本研究結果顯示COPD急性加重期患者，CD4+/CD8+比值與PaCO2呈顯著負相關(P<0.05)，Won-Dong Kim等研究結果和本實驗結果均提示CD4+/CD8+比值與氣道阻塞程度密切相關。

表2、表3顯示外周血CD3+CD4+與PaO2呈顯著正相關(P<0.05)；CD3+CD8+與PaCO2呈顯著正相關(P<0.05)，但是CD4+/CD8+與PaCO2呈顯著負相關(P<0.05)，說明動脈血PaO2、PaCO2與外周血CD3+CD4+、CD3+CD8+T淋巴細胞、CD4+/CD8+比值密切相關。表2還顯示CD3+T淋巴細胞與MMRC評分呈顯著負相關(P<0.05)。這些結果說明COPD患者出現Ⅱ型呼吸衰竭和呼吸困難時能引起機體內CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD3+T淋巴細胞參與的細胞免疫功能紊亂，臨床上應給予高度重視。

CD56分子是自然殺傷細胞 (NK細胞)主要的表面標志，本研究結果顯示CD56+與MMRC評分呈顯著正相關(P<0.01)，說明NK細胞參與了COPD患者的疾病進展過程，可能隨著患者病情加重，NK細胞逐漸被激活，進一步發揮其免疫調控作用和抗感染作用。本研究結果顯示CD19+B淋巴細胞及CD3+CD4+、CD3+CD8+T淋巴細胞與COPD急性加重期患者的肺功能、血氣分析、呼吸困難量表評分、病程長短、吸煙等各項指標均無明顯相關性；Jong JWD等研究表明吸煙的COPD患者中，FEV1占預計值百分比與CD19+B淋巴細胞具有正相關性[5]，Zhu X等研究結果顯示在COPD患者中，吸煙可能對CD3+CD4+、CD3+CD8+T淋巴細胞功能產生抑制作用[6]，這兩項研究結果與本實驗不一致，因此，吸煙對COPD急性加重期患者外周血淋巴細胞亞群是否產生影響，還需進一步研究。

[1]慢性阻塞性肺疾病診治指南(2013年修訂版)，中華醫學會呼吸病學分會慢性阻塞性肺疾病學組[J].中華結核和呼吸雜志，2013,36(4)：255.

[2]Pellegrino R,Viegi G,Brusasco V，et al.Interpretative strategies for lung function tests[J].European Respiratory Journal,2005,26(5):948.

[3]Saetta M ，Stefano AD，Turato G ，et al.CD8+T-lymphocytes in peripheral airways of smokers with chronic obstructive pulmonary disease[J].American Journal of Respiratory & Critical Care Medicine,1998,157(1):822.

[4]Won-Dong K,Woo-Sung K,Younsuck K,et al.Abnormal peripheral blood T- lymphocyte subsets in a subgroup of patients with COPD[J].Chest,2002,122(2):437.

[5]Jong JWD,Belt-Gritter BVD,Koeter GH,et al.Peripheral blood lymphocyte cell subsets in subjects with chronic obstructive pulmonary disease:association with smoking,IgE and lung function[J].Respiratory Medicine,1997,91(2):67.

[6]Zhu X,Gadgil AR,George M,et al.Peripheral T cell functions correlate with the severity of chronic obstructive pulmonary disease[J].Journal of Immunology,2009,182(5):3270.

*通訊作者

1007-4287(2017)09-1364-03

2016-10-17)