影響凝血四項檢測結果異常原因的分析

陳 勇，凌 建，徐 容，李 倩

(綿陽市人民醫院 檢驗科，四川 綿陽621000)

影響凝血四項檢測結果異常原因的分析

陳 勇，凌 建，徐 容，李 倩

(綿陽市人民醫院 檢驗科，四川 綿陽621000)

目的分析凝血標本的采集量、離心時間、離心速度、儲存時間和標本是否溶血等對PT、APTT、TT、Fib四項檢測指標的影響，便于日常檢測過程中控制。方法回顧性分析2016 年1月至2016年12月在我院檢驗科檢測859例不同因素的凝血標本對PT、APTT、TT和Fib四項指標影響的臨床資料。結果采血量<2.0 ml標本和>2.0 ml標本檢測PT、APTT和TT結果均明顯長于重新采血合格的標本(P<0.05)，Fib檢測結果短于重新采血合格的標本(P<0.05)；標本經5、10、15 min后不同離心時間檢測PT、APTT、TT和Fib結果間比較(P>0.05)；標本經4 000 r/min離心5 min和3 000 r/min離心15 min，其四項檢測結果間無統計學差異(P>0.05)；標本在室溫(20℃-25℃)環境下儲存1 h 后檢測凝血四項結果與立即送檢標本檢測結果比較(P>0.05)；標本儲存4 h后檢測APTT長于儲存2 h標本，TT明顯短于儲存2 h標本(P<0.05)，PT和Fib檢測結果與儲存2 h標本比較(P>0.05)；標本在4℃環境下儲存1 h、2 h、4 h后檢測凝血四項結果，不同時間之間比較(P>0.05)，不同儲存時間段與立即送檢標本檢測凝血四項結果比較(P>0.05)，溶血標本檢測PT和APTT結果明顯短于未溶血標本檢測的結果(P<0.05)；溶血標本檢測TT結果明顯長于未溶血標本(P<0.05)；溶血標本檢測Fib結果與未溶血標本(P>0.05)。結論抗凝比例不合適、室溫時間儲存過長和標本溶血與否等都是導致檢測結果準確性和可靠性異常原因，可用4 000 r/min離心5 min替代3 000 r/min離心15 min以更快速地向臨床報告檢測結果。

凝血四項；乏血小板血漿；溶血；采血量；影響因素

(ChinJLabDiagn,2017,21:1333)

凝血四項試驗廣泛用于出血性疾病的輔助診斷、口服抗凝藥的監測及術前篩查凝血性疾病等，是臨床極為重要的檢查手段以及重要的實驗室檢測指標。凝血四項主要包括凝血酶原時間(PT)、活化部分凝血活酶時間(APTT)、凝血酶時間(TT)和纖維蛋白原(Fib)，四項結果的準確性和可靠性直接影響臨床疾病診斷和治療以及醫患關系。由于血凝在實驗室檢測具有一定的特殊性，檢測不是對某一種特定物質的分析，而是對一系列酶促反應終點的監測。檢測結果受如凝血標本采集量、離心時間、存儲和標本是否溶血等諸多因素的影響[1]。故分析凝血四項檢測結果異常的因素，對實驗室提高檢測結果的準確性、可靠性和臨床提高治療的正確性具有重要意義。通過回顧性分析我院體檢中心采集的859例凝血標本從采集量、離心、儲存到送檢過程等各種影響凝血四項檢測結果的因素，便于在常規臨檢工作中更好的控制不良因素，以期為建立本實驗室檢查凝血四項的質量控制標準提供有價值的實驗室依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料

隨機選取859例于2016年1月至2016年12月在我院體檢中心進行健康體檢者作為研究對象，入選對象的凝血功能經臨床檢查均正常。標本采集：采用美國BD公司生產的真空凝血采血管(109 mmol/L枸櫞酸鈉1：9抗凝)，由專職護士在研究對象空腹(禁食8小時以上)平靜狀態下，采集靜脈外周血2.0 ml。

1.2 儀器與試劑

血液標本檢測的儀器為日本Sysmex公司生產的CA550全自動血凝儀，PT、APTT、TT和Fib試劑均為原裝進口配套試劑，檢測前試劑預熱15 min-20 min。離心儀器為北京時代北利離心機公司生產的DT5-3型低速自動平衡離心機，檢測步驟和儀器操作均嚴格按照試劑盒說明書的標準操作規程進行。

1.3 方法

1.3.1 不同采集量試驗 859例標本中有121例標本采血量異常，其中采血量<2.0 ml(采血量不足)的標本57例，采血量>2.0 ml(采血量過量)的標本64例。為采血量異常的對象重新采集2.0 ml靜脈外周血，及時將采血量異常和重新采集的標本在DT5-3型離心機上以3 000 r/min的速度離心10 min后，肉眼觀察血漿顏色正常(淡黃色液體)，進行凝血四項檢測并統計學比較。

1.3.2 不同離心時間試驗 859例標本中選取185例符合本試驗和采集量符合要求的標本，在DT 5-3型低速自動平衡離心機上以3 000 r/min的速度進行離心，離心時間為5 min標本有62例，離心時間為10 min標本60例，離心時間為15 min標本63例，及時收集不同離心時間的標本且肉眼觀察血漿顏色正常，進行凝血四項檢測并比較。

1.3.3 不同離心速度和離心時間試驗 859例標本中選取60例符合本試驗和采集量符合要求的標本，充分混勻后，用一次性塑料吸管吸出約1 ml到潔凈的塑料試管中，得到兩份相同的血液樣本，第一份以3 000 r/min的速度離心15 min，第二份以4 000 r/min 的速度離心5 min，將得到的血漿標本及時進行凝血四項檢測并統計學比較。

1.3.4 不同儲存時間試驗 859例標本中有382例符合本試驗儲存時間規定、采集量符合要求、及時離心且肉眼觀察血漿顏色正常的標本，隨機選取55例標本及時進行凝血四項檢測。剩余的標本中在室溫(20℃-25℃)環境下在儲存1 h有57例、2 h有53例、4 h有50例，在4℃環境下儲存1 h有56例、2 h有58例、4 h有53例。在各自儲存時間達到后及時對該組標本進行凝血四項檢測，與隨機選取55例標本進行統計學比較。

1.3.5 溶血和未溶血標本試驗 觀察在859例經離心分離的凝血標本中，收集56例肉眼觀察血漿顏色為淺紅色液體的溶血標本，進行凝血四項指標檢測，與55例肉眼觀察血漿顏色正常的未溶血標本凝血四項檢測結果比較。

1.4 統計學處理

2 結果

2.1 不同采集量對凝血四項檢測結果的影響 見表1、表2。結果顯示，采血量<2.0 ml標本和>2.0 ml標本檢測PT、APTT和TT結果均明顯長于重新采血合格的標本(P<0.05)，Fib檢測結果短于重新采血合格的標本(P<0.05)。

表1 采血量不足對凝血四項檢測結果的影響

表2 采血量過量對凝血四項檢測結果的影響

2.2 不同離心時間對凝血四項檢測結果的影響 見表3。結果顯示，標本經3 000 r/min離心5、10、15 min后，檢測PT、APTT、TT和Fib的檢測結果比較無顯著性差異(P>0.05)。

表3 不同離心時間對凝血四項檢測結果的影響

2.3 不同離心速度和離心時間對凝血四項檢測結果的影響 見表4。結果顯示，標本經3 000 r/min離心15 min與經4 000 r/min離心5 min所制備的乏血小板血漿的檢測結果比較，PT、APTT、TT和Fib四個項目的結果均無顯著性差異(P>0.05)。

表4 不同離心速度和離心時間對凝血四項檢測結果的影響

2.4 不同儲存時間對凝血四項檢測結果的影響

2.4.1 室溫(20℃-25℃)環境下在儲存1 h、2 h、4 h檢測結果比較 結果顯示，標本在室溫(20℃-25℃)環境下儲存1 h 后檢測凝血四項結果與立即送檢標本檢測結果比較無顯著性差異(P>0.05)；標本儲存4 h后檢測APTT顯著長于儲存2 h標本(P<0.05)，TT明顯短于儲存2 h標本(P<0.05)；PT和Fib檢測結果與儲存2 h標本比較無顯著性差異(P>0.05)。

2.4.2 在4℃環境下在儲存1 h、2 h、4 h檢測結果比較 結果顯示，標本在4℃環境下儲存1 h、2 h、4 h后檢測凝血四項結果比較，四項指標在儲存不同時間的檢測結果之間無統計學差異(P>0.05)，立即送檢與儲存不同時間后標本檢測結果之間無統計學差異(P>0.05)。

2.5 溶血和未溶血標本對凝血四項檢測結果的影響 見表5。結果顯示，溶血標本的PT和APTT檢測結果明顯短于未溶血標本結果(P<0.05)；溶血標本的TT檢測結果明顯長于未溶血標本結果(P<0.05)；溶血標本的Fib檢測結果與未溶血標本結果無顯著性差異(P>0.05)。

表5 溶血與未溶血標本對凝血四項檢測結果的影響

3 討論

凝血的標本采集以及前處理過程均直接影響實驗結果，且是凝血四項檢測結果準確性和可靠性的質量控制關鍵。ISO15189《醫學實驗室質量和能力的專項要求》闡明，準確、可靠的檢測結果來源于對分析前、分析中、分析后的質量控制[2]。臨床實驗室檢查的質量控制一般由檢驗科來把控，但由于影響的因素多、控制難度大很容易出現問題，已成為醫院質量控制管理中的薄弱環節。國內學者對急診檢驗誤差發生的種類和發生率進行統計分析，發現60%左右的檢驗誤差發生在檢驗前，護理人員對標本采集和運送是分析前質量控制的第一個重要環節。本實驗室對859例標本的臨床資料回顧性分析發現，有177例標本出現異常，其中采血量比例不當的有121例，占68.36%；離心致標本溶血有56例，占31.64%。本研究就采血量異常結果分析顯示，采血量<2.0 ml標本和采血量>2.0 ml標本檢測PT、APTT和TT結果均明顯長于重新采血合格的標本(P<0.05)，Fib檢測結果短于重新采血合格的標本(P<0.05)。說明采血量不足或過量都會影響凝血四項檢測結果的準確性，這一結果與王茂彩等[3]學者報道相符。

凝血四項檢測采用血漿作為標本進行檢測，所以采集后的標本須經離心處理，《全國臨床檢驗操作規程》第四版要求，標本須采用“低速離心”方式，即3 000 r/min離心15 min后分離血漿標本，并應立即檢測[4]。本研究中采用增加離心速度減少離心時間(4 000 r/min離心5 min)來制備乏血小板血漿，結果顯示，兩種離心條件得到的乏血小板血漿，其凝血四項檢測結果比較無統計學差異(P<0.05)。該結果與王貞[5]等的研究結果有不同之處，王貞等結果顯示，PT、INR無顯著性差異，APTT、Fib有顯著性差異，但相關回歸分析顯示兩種離心方法顯著相關，且4 000 r/min離心5 min制備的乏血小板血漿的PT、APTT、Fib檢測結果臨床可接受性能的評價均為全部接受。也就是說，本研究與王貞等的研究結論均為：可用4 000 r/min離心5 min來替代3 000 r/min離心15 min制備乏血小板血漿，縮短標本處理時間，可更快地向臨床提供準確的凝血檢驗報告。

叢玉隆等[6]專家認為：血液離體即開始變化，隨存放方式和時間的不同，凝血因子逐漸消耗而導致檢驗結果不同。美國臨床和實驗室標準協會(Clinical and Laboratory Standards Institute, CLSI)推薦血液標本應在室溫(20℃-25℃)保存條件下2 h內完成檢測，4℃保存4 h內完成檢測，若4 h內未能完成檢測，應將血漿標本置低溫保存(-70℃～-20℃)。檢測前將血漿于37℃下快速融化即可。本研究結果顯示，標本經5、10、15 min后不同離心時間檢測PT、APTT、TT和Fib結果間比較(P>0.05)，說明凝血標本離心時間的長短，對凝血四項檢測結果的準確性無明顯差異，與文獻報道一致[7-9]。本研究結果顯示，標本在室溫(20℃-25℃)環境下儲存1 h 后檢測凝血四項結果與立即送檢標本檢測結果比較無顯著性差異(P>0.05)；標本儲存4 h后檢測APTT顯著長于儲存2 h標本(P<0.05)，TT明顯短于儲存2 h標本(P<0.05)；PT和Fib檢測結果與儲存2 h標本比較無顯著性差異(P>0.05)。標本在4℃環境下儲存1 h、2 h、4 h后檢測凝血四項結果比較，四項指標在儲存不同時間的檢測結果之間無統計學差異(P>0.05)，立即送檢與儲存不同時間后標本檢測結果之間無統計學差異(P>0.05)。說明標本在室溫(20℃-25℃)條件下隨著儲存時間延長，對凝血因子的促凝活性存在一定影響，而標本4℃環境下儲存4 h后，檢測凝血四項結果無影響。

標本發生溶血是臨床生化檢驗工作中較常見的影響因素，也是凝血四項檢測結果最常見的影響因素之一[10]。溶血是由于采血或離心操作不當等因素致紅細胞破裂血紅蛋白溢出，成熟紅細胞破裂后釋放出于血小板第Ⅲ因子相似凝血活性的磷脂，進而影響凝血四項檢測結果準確性[11,12]。本研究結果顯示，溶血標本檢測PT和APTT結果明顯短于未溶血標本檢測的結果(P<0.05)；溶血標本檢測TT結果明顯長于未溶血標本(P<0.05)；溶血標本檢測Fib結果與未溶血標本(P>0.05)。說明標本溶血可致PT和APTT時間縮短，TT時間延長，Fib含量降低，從而導致凝血四項檢測結果的異常。因此，在標本采集或離心處理過程中應加強標準化操作，避免標本溶血發生。

綜上所述表明，實驗室外在因素對實驗準確性也十分重要，抗凝比例不合適、室溫時間儲存過長和標本溶血與否等都是致檢測結果準確性、可靠性異常的主要因素[13]。因此，檢驗科在開展凝血試驗時，應建立本實驗室的四項檢測標準操作程序，遵循《WS/T 359-2011血漿凝固實驗血液標本的采集及處理指南》標準要求對凝血標本從采集量、離心、儲存到送檢過程等環節的控制；加強對相關人員的培訓、提高其責任心、規范操作流程，可保證凝血四項檢測結果的準確性和可靠性，為臨床醫生提供可靠的依據。

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Analysisontheabnormalcausesofthefourdetectionresultsofcoagulation

CHENYong,LINGJian,XURong,etal.

(TheDepartmentofMedicalLaboratoryofthePeople’sHospitalofMianyangCity,Mianyang621000,China)

ObjectiveAnalysis of blood samples collection,centrifugal time,centrifugal speed,storage time and specimen whether hemolysis influence factors and detection of plasma prothrombin time (PT),activated partial thromboplastin time (APTT),thrombin time (TT) and fibrinogen (FIB) quantitative four results,which is convenient for daily inspection process control.MethodsRetrospective analysis from January 2016 to December 2016 in our hospital laboratory test 859 cases of different factors of coagulation specimens for PT,APTT,TT and Fib four indicators of clinical data.ResultsPT,APTT and TT results were significantly longer than the qualified samples (P<0.05) were test by blood sampling volume <2.0 ml > and >2.0 ml specimens.Fib test results are shorter than the re sampling of qualified samples (P< 0.05).The results of APTT,TT and PT were test by 5,10,15min,and Fib results after different centrifugation time (P>0.05).There was no statistical differences between the samples centrifugated by 4 000 r/min 5 min and 3 000 r/min 15 min (P>0.05).Specimens at room temperature (20 to 25℃) storage 1h test after coagulation four results and immediately specimens testing results (P>0.05),The specimens were stored in 4 h and the APTT was longer than that in 2 h specimens,TT was significantly shorter than that of 2 h specimens (P<0.05); PT and Fib testing results were compared with stored 2 h specimens(P>0.05).The samples were stored at 4℃environment 1H,2 h,4 h after the testing of coagulation four results,the comparison between different time (P>0.05),comparison of different storage time and immediately specimens of four items of blood coagulation detection results (P>0.05).Hemolysis tests of PT and APTT was significantly shorter in hemolysis test results (P<0.05); hemolysis specimens for the detection of TT results significantly longer than without hemolysis (P<0.05); FIB results of hemolysis and not hemolysis (P>0.05).ConclusionThe inappropriate proportion of anticoagulation,inappropriate storage in room temperature for long time,and hemolysis specimen or not,are the causes of the detection accuracy and reliability of the anomaly.We could use 4 000 r/min centrifugation 5min replacing 3 000 r/min centrifugation 15min for reporting the detection results to clinicians quicker.

four blood coagulation; platelet-poor plasma; hematolysis; blood volume; influence factor

1007-4287(2017)09-1333-05

R446.11+1

：A

陳勇(1978-)，男，主管檢驗師，本科，主要從事臨床血液學檢驗工作。

2017-03-08)