平臥菊三七葉中黃酮提取工藝的研究

肖慧

摘 要：本實驗以平臥菊三七的葉為實驗材料，通過對提取溫度、提取時間、料液比進行單因素實驗，探討了不同提取工藝對黃酮得率的影響。通過單因素實驗得出：最佳提取溫度為80℃、最佳提取時間3h、最佳提取料液比為1：30。

關鍵詞：平臥菊三七 葉 黃酮 工藝優化 得率

前言

平臥菊三七是菊三七屬。是一種攀援草本，有臭氣，淡褐色或紫色，有條棱。它可以用于治支氣管肺炎，肺結核，其成份黃酮類有多種生物學活性在抗氧化作用方面、抗腫瘤活性，黃酮類物質對冠心病、心絞痛、高血脂，心血管疾病有很好的療效。

由于平臥菊三七有諸多的藥用性質，且其藥用性質主要來自于其中的黃酮成分，為此本試驗以平臥菊三七的葉為原料，采用分光光度法測提取物黃酮類化合物的含量，為平臥菊三七經濟價值的綜合利用以及產品的開發提供參考依據。

1、試驗材料與方法

1.1試驗材料

1.1.1主要試驗試劑

乙醇——分析純 硝酸鋁——分析純 氫氧化鈉——分析純 石油醚——分析純

1.1.2 試驗原料

平臥菊三七 采自江西農業大學中草藥資源開發教學基地

1.1.3主要試驗儀器

UV-2100型可見光分光分度計 尤尼柯（上海）儀器有限公司

Adventurer AR2140電子天平 OHAUS CORP USA

40目標準篩 上虞市大地分樣篩廠

HH-4，HH-2數顯恒溫水浴鍋 國華電器有限公司

L-20B型高速冷凍離心機 上海安亨科學儀器廠等

1.2試驗方法

1.2.1平臥菊三七葉的預處理

將干燥的平臥菊三七的葉用粉碎機粉碎，過40目篩后得到的葉粉用石油醚脫色脫脂3h，然后放入通風櫥中讓其風干至恒重，得到樣品。

1.2.2 平臥菊三七葉中黃酮提取工藝流程

平臥菊三七葉→預處理（清洗-曬干-粉碎）→乙醇溶液提取→過濾→定容→測吸光度→計算黃酮得率

1.2.3平臥菊三七葉提取黃酮的單因素試驗設計

1.2.3.1料液比對平臥菊三七葉黃酮得率的影響

在酒精濃度80%，且溫度80℃，時間3h條件下采用不同料液（1：20，1：30，1：40，1：50，1：60）分別提取，研究料液比對平臥菊三七葉黃酮得率的影響。

1.2.3.2提取溫度對平臥菊三七葉黃酮得率的影響

在1.2.3.1得出最佳料液比，且時間3h下采用不同溫度（50℃、60℃、70℃、80℃、90℃、95℃）分別提取，研究不同溫度對平臥菊三七葉黃酮得率的影響。

1.2.3.3提取時間對平臥菊三七葉黃酮得率的影響

在1.2.3.1，1.2.3.2得出最佳料液比，溫度，在不同提取時間情況（1h、2h、3h、4h、5h）分別提取一次，研究不同時間對平臥菊三七葉黃酮得率的影響。

1.2.4平臥菊三七葉黃酮得率的測定的方法

平臥菊三七葉黃酮測定時以蘆丁作為參照物，精密稱取105℃干燥恒重的蘆丁標準品10mg，加80%乙醇溶解，定容到25ml容量瓶中，搖勻，精密吸取標液0.0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2ml分別置10ml試管中，加5%NaNO2 1ml，放置6min后加10%AL（NO3）3 1ml放置6min，再加4%NaOH10ml，加水到刻度，搖勻，放置15min，用分光光度計進行測定，繪制標準曲線。

稱取1g平臥菊三七葉粉未，用酒精提取過濾取濾液1ml到25ml容量瓶中，加水5ml搖勻，加入濃度5%NaNO2 1ml混勻放置6min，加5%AL（OH）3溶液1ml混勻，放置6min，加入4%NaOH 10ml，再加定容到25ml，搖勻后放置15min，再用分光光度計在波長510nm處測定吸光度，根據回歸方程計算樣品中總黃酮總量[10]。

黃酮利率（%）=C*25*10-6*100/（W*P）

C：黃酮濃度：W：平臥菊三七葉粉末重量；P：料液比

2、結果與分析

2.1 標準曲線的繪制及回歸方程的建立

配制濃度分別為0、8、16、24、32、40、48μg/ml的蘆丁標準溶液，于510nm下測得蘆丁相應的吸光值，吸光度分別為： 0、 0.067、 0.154、0.222、0.274、0.337、0.448。通過線性回歸得到回歸方程為： y=0.0089x+0.0001 （其中x：濃度，y：吸光度），決定系數R2=0.9922.

由蘆丁標曲回歸方程的相關系數R=0.9961>R0.01（5）=0.874 ，可知蘆丁濃度與蘆丁吸光度值之間建立的回歸方程極顯著，可以通過所測得的提取液的吸光度值算出黃酮含量。

2.2平臥菊三七葉黃酮的單因素試驗結果

2.2.1料液比對平臥菊三七葉黃酮得率的影響

在酒精濃度80%，時間3h，80℃條件下進行料液比單因素實驗結果為：料液比1：20，黃酮得率4.57%，料液比1：30，黃酮得率5.64%，料液比1：40，黃酮得率5.54%，料液比1：50，黃酮得率5.18%，料液比1：60，黃酮得率4.42%。

由此可見，隨著液料比的升高，提取率也隨之升高，其中在到達30：1時提取率最高，隨著液料比的升高，黃酮得率降低，所以1：30是黃酮提取的最適合料液比。

2.2.2溫度對平臥菊三七葉黃酮得率的影響

在酒精濃度80%和2.2.1所得黃酮最適合提取的料液比分別是1：30，時間是3h條件下進行溫度單因素實驗結果為：溫度50℃，黃酮得率3.96%，溫度60℃，黃酮得率4.46%，溫度70℃，黃酮得率4.72%，溫度80℃，黃酮得率5.57%，溫度5.16℃，黃酮得率4.42%。

由此可見，隨著溫度的升高，提取率也隨之升高，其中在到達80℃時提取率最高，80℃以后隨著溫度的升高，黃酮得率降低，所以80℃是黃酮提取的最適合溫度。

2.2.3時間對平臥菊三七葉黃酮得率的影響

在酒精濃度80%和2.2.1、2.2.2所得黃酮最適合提取的料液比、溫度分別是1：30，80℃條件下進行時間單因素實驗結果為：提取時間1h，黃酮得率5.59%，提取時間2h，黃酮得率6.33%，提取時間3h，黃酮得率7.09%，提取時間4h，黃酮得率6.88%，提取時間5h，，黃酮得率6.52%。

由此可見，隨著時間的增加，提取率也隨之增加，其中在到3h時提取率最高，以后隨著提取時間的增加，黃酮得率降低，所以3h是黃酮提取的最適合時間。

3、結論

提取平臥菊三七葉黃酮的最佳提取溫度為80℃、最佳提取時間為3h、最佳提取料液比為1：30。