HPLC法測定顛茄磺芐啶片中的SMZ和TMP的含量

韓丹丹

哈藥集團制藥六廠 150000

HPLC法測定顛茄磺芐啶片中的SMZ和TMP的含量

韓丹丹

哈藥集團制藥六廠 150000

目的：探討高效液相色譜法在對顛茄磺芐啶片中兩種成分的含量測定中所起到的作用及可行性。方法：采用ZorbaxSB-C.色譜柱(150mmx4.6mm，5μm)，以pH為2.5的0.025μg·mL-1磷酸鹽緩沖液一乙腈(75：25)為流動相，流速為1.0μg·mL-1，檢測波長為230nm，進樣量20，用外標法測定。結果：SMZ在16—160μg·mL-1范圍內線性關系良好(r=0.9999)，平均回收率為99.75%，RSD為0.35%，TMP在3.2—32μg·mL-1范圍內線性關系良好(r=0.9999)，平均回收率為100.7%，RSD為0.51%.結論：采用HPLC法來對顛茄磺芐啶片中的SMZ和TMP進行含量測定具有很好的簡便性，且測定結果準確可靠，值得推廣。

HPLC；顛茄磺芐啶片；TMP；SMZ

所謂顛茄磺芐啶片，俗稱瀉利停，常常被用來治療腹瀉、痢疾桿菌引起的慢性菌痢和其他敏感致病菌引起的腸炎。作為一種止瀉藥物，顛

噁茄磺芐啶片是一種復方制劑，其主要的藥物成分是磺胺甲 唑(SMZ)，甲氧芐啶(TMP)及顛茄流浸膏，是磺胺類廣譜抗菌藥。其藥理作用是磺胺甲噁唑（SMZ）與甲氧芐啶（TMP）有協同抑菌和殺菌作用。對非產酶金黃色葡萄球菌、化膿性鏈球菌、肺炎鏈球菌、大腸埃希菌、克雷伯菌屬、沙門菌屬、變形桿菌屬、摩根菌屬、志賀菌屬等腸桿菌科細菌、淋病奈瑟菌、腦膜炎奈瑟菌、流感嗜血桿菌均具有良好抗菌作用，尤其對大腸埃希菌、流感嗜血桿菌、金黃色葡萄球菌的抗菌作用較SMZ單藥明顯增強。此外在體外對沙眼衣原體、星形奴卡菌、原蟲、弓形蟲等亦具良好抗微生物活性。

由此可見，在顛茄磺芐啶片中，SMZ和TMP是最主要的成分，其含量是否達標決定了顛茄磺芐啶片的質量好壞。為此需要對其含量進行有效測定。在此本文就探討了HPLC法在其測定中的具體使用過程，報道如下：

1.實驗材料與儀器

1.1 藥品與試劑

顛茄磺芐啶片(哈藥集團制藥六廠)，TMP和 SMZ對照品(中國藥品生物制品檢定所)，乙腈為色譜純(CaledonLaborato—riesLTD.)，水為重蒸水，其他試劑均為分析純。

1.2 儀器

Agilent 1100 LC系統：四元泵、在線真空脫氣機，可變波長紫外檢測器(VWD)，Agilent ChemStation工作站；TU-1221紫外可見分光光度計(北京普析通用儀器有限責任公司)；電子天平(Sartorious.BP211D)。所用儀器和量具均經檢定和校正。

2、實驗方法

2.1 色譜條件及系統適應性試驗色譜柱：ZorbaxSB—Cl8柱(150mmx4.6mm，5μm)；流動相：磷酸鹽緩沖液(0.025 mol·L-1磷酸二氫鉀用磷酸調pH為2.50±0.05)-乙腈(75：25)；檢測波長：230nm；柱溫30℃；流速：1.0mL?min一；進樣體積：20tLL.716一藥物分析雜志ChinJPharmAnal2005，25(6)TMP與SMZ的理論塔板數分別為6800和10300，與各雜質峰和輔料峰的分離度均大于1.5。見圖1。

圖1 SMZ和TMP液相色譜圖

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取干燥至恒重的對照品TMP與SMZ各16mg和80mg，置 100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，作為對照品儲備溶液.精取對照品儲備溶液2mL，置25mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

精密稱取顛茄磺芐啶片相當于TMP和SMZ各16mg和80mg的量，置100mL量瓶中，加甲醇適量，經超聲處理15min后，冷卻至室溫，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取2mL，置25mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，經0.45m濾膜濾過，棄去初濾液，取續濾液即得。

2.4 標準曲線

分別吸取上述對照品儲備溶液0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0mL置25mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，按上述色譜條件進樣，結果表明，TMP在3.2-32μg·mL-1范圍內，SMZ在16-160μg·mL-1范圍內線性關系良好，分別以二組分的濃度(μg·mL-1)為橫坐標(X)，峰面積為縱坐標(Y)作圖，回歸方程TMP，SMZ分別為

2.5 精密度試驗

取上述對照品溶液2.0mL，置25mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，連續進樣10次，每次20L，測定峰面積.TMP的RSD為0.41%，SMZ的RSD為0.50%。

2.6 穩定性試驗

取供試品溶液，分別于0，2，4，8h進樣，每次20L，測定峰面積.TMP的RSD為1.15%，SMZ的RSD為0.67%。

2.7 回收率試驗

按處方比例的 80%，100%，120%分別精密稱取一定量的TMP，SMZ對照品及顛茄流浸膏，淀粉，羧甲基淀粉，硬脂酸鎂等輔料，每個濃度配制3份，置100mL量瓶中，用甲醇溶解，并經超聲處理15min后，冷卻至室溫，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45m濾膜過濾，精密量取2mL置25mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，進樣 20ILL.TMP的平均回收率(RSD)為100.7%(0.51%)，SMZ的平均回收率(RSD)為99.75%(0.35%)。

2.8 樣品測定

取TMP和SMZ對照品及顛茄磺芐啶片3批，按含量測定方法按外標法計算各批中二組分的含量，結果批號為170301的TMP含量為100.7%，SMZ為99.8%；批號為170302的TMP含量為100.5%，SMZ為99.5%；批號為170303的TMP含量為100.2%，SMZ為100.0%。

3 討論

3.1 生產廠家在執行《國家藥品標準》2015版），廠家按處方100%投料，在檢測中間體顆粒時TMP含量偏高，SMZ含量較為正常，且除2個組分的峰外，無其他明顯輔料和雜質峰。按本文色譜條件檢測，發現TMP色譜峰前有一個明顯的雜質峰，見圖1。按處方配制的顛茄流浸膏按本法色譜條件，檢出在TMP色譜峰前的雜質峰，見圖2。

圖2 顛茄流浸膏色譜圖

3.2 pH值的選擇選擇pH值為2.50能在較短的時間內使各組分均能達到很好的分離，特別使雜質峰和輔料峰的分離，從而不影響分析結果的準確性。

3.3 流動相的組成比隨著乙腈濃度的增加，各組分的保留時間明顯提前，分離效果不佳。考慮各組分的分離狀態與分析時間，將流動相組成比例定為磷酸鹽緩沖液-乙腈(75：25)。

總之，作為一種消炎抗菌的止瀉藥物，其作用機制為：SMZ作用于二氫葉酸合成酶，干擾合成葉酸的第一步，TMP作用于葉酸合成代謝的第二步，選擇性抑制二氫葉酸還原酶的作用，二者合用可使細菌的葉酸代謝受到雙重阻斷。本品的協同抗菌作用較單藥增強，對其呈現耐藥菌株減少。然而近年來細菌對本品的耐藥性亦呈增高趨勢。顛茄為M膽堿受體阻斷藥，能抑制乙酰膽堿的毒蕈堿樣作用，主要系抑制節后膽堿能神經支配的自主性效應器部位乙酰膽堿的活動，受乙酰膽堿的平滑肌的活動也被抑制。抑制平滑肌、心肌、竇房結和房室結，以及外分泌腺等的興奮。較大量的顛茄也能減少胃腸的蠕動和分泌，降低輸尿管和膀胱的張力，對膽總管和膽囊僅略為松弛。

顛茄磺芐啶片中的SMZ和TMP是最主要的藥用成分。在生產藥品的過程中，必須要合理控制兩者的含量和比例，采取有效檢測方法進行含量測定，確保藥品質量。

[1]郝立芳.RP-HPLC法測定顛茄磺芐啶片中磺胺甲基異噁唑與甲氧芐啶含量[J].藥學與臨床研究,2004,12(3):23-25.

[2]丁建,朱斌清,王玲娜.RP—HPLC法同時測定顛茄磺芐啶片中SMZ和TMP的含量[J].藥物分析雜志,2005(6):715-716.

[3]趙明,隋譯,孫菲,等.顛茄磺芐啶片溶出度測定方法研究[J].中國醫藥導報,2009,6(21):50-51.

R473.5

A

1672-5018（2017）03-219-01