蘇禽黃雞IGF1R基因第16外顯子多態(tài)性及其與生長性狀的關(guān)聯(lián)研究

陳則東　王文浩

摘要 本研究以IGF1R基因作為影響蘇禽黃雞生長性狀的候選基因，基因第16外顯子單核苷酸多態(tài)性采用DNA測序和PCR-SSCP技術(shù)進(jìn)行分析，并與雞的生產(chǎn)性能進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析。結(jié)果表明，共發(fā)現(xiàn)2個(gè)SNPs位點(diǎn)（C143082G和A143135G），在初生重方面，CC基因型個(gè)體的體重顯著高于AA、AB、AC、BB和BC基因型個(gè)體的體重（P<0.05）。推測IGF1R基因可能是影響雞體重的主（效）基因或與影響體重主（效）基因緊密連鎖。

關(guān)鍵詞 蘇禽黃雞；IGF1R基因；16外顯子；生產(chǎn)性狀；關(guān)聯(lián)

中圖分類號 S831 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A 文章編號 1007-5739（2017）16-0224-02

Abstract In this study，IGF1R gene as candidate gene of Suqin yellow chicken growth traits，using DNA sequencing and PCR-SSCP technology to analyze the correlation between IGF1R gene 16 exon SNPs and chicken production performance.The results showed that 2 SNPs loci（C143082G and A143135G）were found，the birth weight of CC genotype individuals were significantly higher than those in AA，AB，AC，BB and BC genotypes（P<0.05）.It was suggested that IGF1R gene might be the main（effect）gene of chicken weight，or it was closely linked to the main（effect）gene.

Key words suqin yellow chicken； IGF1R gene；exon 16；production performance；correlation

類胰島素生長因子（insulin-like growth factors，IGFs）包含2類受體（IGF1R、IGF2R）、2個(gè)多肽類生長因子（IGF1、IGF2）和7種結(jié)合蛋白（IGFBP1-7）[1-5]，是重要的生長因子之一。IGF1R對機(jī)體胚胎期和出生后生長有著十分重要的生長調(diào)節(jié)作用，主要表現(xiàn)為免疫調(diào)節(jié)、淋巴細(xì)胞生成、肌肉和骨的生長[6]。雞IGF1R基因位于10號染色體由單個(gè)基因編碼，21個(gè)外顯子構(gòu)成，mRNA全長4 698 bp，編碼1363氨基酸殘基[1，7]。現(xiàn)研究已表明IGF1R基因?qū)﹄u生長性狀有顯著效應(yīng)[8-9]。本研究以蘇禽黃雞為研究對象，以雞IGF1R基因作為影響生長性狀的候選基因[1，10]，通過DNA測序和PCR-SSCP方法的應(yīng)用分析該基因多態(tài)性與生長性狀之間的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)?zāi)鸽u品種為蘇禽黃雞，采自翔龍禽業(yè)有限公司，共150只，采集母雞血樣，待用。同時(shí)記錄150只母雞的0、4、8、12、16周齡體重。翅靜脈采集血樣1.5 mL，肝素鈉抗凝，-20℃保存[1-2]。常規(guī)苯酚-氯仿法抽提基因組DNA。

1.2 引物設(shè)計(jì)及PCR擴(kuò)增

根據(jù)GenBank中雞的IGF1R基因序列（NC_006097）設(shè)計(jì)第16外顯子的引物P16（F：TGACATGTTCTCCCTCTGCTT，R：GCCGTATCAGTCCACCTCAT），引物由上海生物工程有限公司合成。

1.3 PCR擴(kuò)增

IGF1R基因引物最佳PCR擴(kuò)增體系如下：DNA 1.5 μL，10×Buffer 3.0 μL，25mmol/L Mg2+ 2.2 μL，10 pmol/μL上游引物2.0 μL、10 pmol/μL下游引物2.0 μL，10 mmol/L dNTPs 1.3 μL，2U/L Taq DNA聚合酶0.5 μL，ddH2O 13.5 μL，總體系25.0 μL。IGF1R基因引物反應(yīng)循環(huán)參數(shù)：95 ℃預(yù)變性6 min，95 ℃變性30 s，58.5 ℃退火30 s，72℃延伸30 s，30次循環(huán)，72 ℃延伸10 min，10 ℃保存[1-4]。

1.4 PCR-SSCP分析

在7.0 μL變性緩沖液中加入PCR產(chǎn)物3.0 μL，98 ℃變性10 min，再迅速冰浴5 min。在10%聚丙烯酰胺凝膠中加入變性好的PCR產(chǎn)物點(diǎn)樣，140 V電壓電泳8～24 h[1-4]。在電泳結(jié)束后，進(jìn)行銀染顯色并拍照記錄結(jié)果[1]。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

為比較雞IGF1R各基因型之間的差異，特配合下列模型進(jìn)行最小二乘方差分析。

yij=μ+Gi+eij

式中，yij、μ、Gi、eij分別為性狀測定值、群體平均值、基因型效應(yīng)、隨機(jī)殘差效應(yīng)。

采用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件的GLM（General Linear Model）過程完成所有統(tǒng)計(jì)分析，采用LSD法進(jìn)行多重比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 PCR-SSCP結(jié)果

P16引物擴(kuò)增片段采用PCR-SSCP進(jìn)行分析。P16擴(kuò)增片段有AA、AB、AC、BB、BC、CC 6種帶型（圖1）。

2.2 序列分析結(jié)果

AA型與CC型相比在143 082 bp處發(fā)生了C→G突變，在143 135 bp處發(fā)生了A→G突變；BB型與CC型相比在143 135 bp處發(fā)生了A→G突變（圖2）。endprint

2.3 IGFIR基因P16位點(diǎn)與生長性狀的關(guān)聯(lián)分析

由表1可知，在4、8、12、16周齡體重均沒有顯著影響（P>0.05），在初生重方面，AA、AB、AC、BB和BC基因型個(gè)體的體重小于CC基因型個(gè)體的體重，具有顯著的差異性（P<0.05）。

3 結(jié)論與討論

在外顯子16處發(fā)現(xiàn)2個(gè)SNP位點(diǎn)（C143082G和 A1431

35G），位點(diǎn)全部位于編碼區(qū)，突變都未導(dǎo)致氨基酸的改變。雷明明等[8]發(fā)現(xiàn)IGF1R基因與生長和屠體性狀顯著相關(guān)，與初生重顯著相關(guān)（P<0.05）；金崇富等[3]發(fā)現(xiàn)IGF-IR基因IGR2-1、IGR2-2（AluⅠ）、IGR2-3、IGR3-2（Hin1Ⅰ）和IGR16（IGR16-1、IGR16-2）位點(diǎn)顯著影響著雞的生長性狀（P<0.05）；高鳳華等[9]發(fā)現(xiàn)肉雞品系的IGF1R基因?qū)?周齡體重有顯著影響（P<0.05）；Moe等[10]發(fā)現(xiàn)IGF1R基因多態(tài)性與鵪鶉體重具有相關(guān)性，對10周齡體重有極顯著的影響（P<0.01）。

本研究發(fā)現(xiàn)，在4、8、12、16周齡體重均沒有顯著影響（P>0.05），在初生重方面，CC基因型個(gè)體的體重顯著高于AA、AB、AC、BB和BC基因型個(gè)體的體重（P<0.05）。2個(gè)多態(tài)位點(diǎn)與生長性狀關(guān)聯(lián)分析結(jié)果推測IGF1R基因可能是影響雞體重的主（效）基因或與影響體重主（效）基因緊密連鎖[1-2]。

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